Аллергический метод диагностики инфекционных заболеваний


Аллергические диагностические пробы

Аллергические диагностические пробы — это высокоспецифичный и чувствительный метод диагностики аллергических и инфекционных заболеваний, в патогенезе которых преобладает аллергический компонент. Пробы основаны на местной или общей реакции сенсибилизированного организма в ответ на введение специфического аллергена.

Особое значение аллергические диагностические пробы имеют при диагностике аллергических заболеваний, так как определение аллергена или группы аллергенов, вызвавших состояние гиперчувствительности, позволяет в дальнейшем применять эти аллергены для гипосенсибилизации организма — наиболее специфического и перспективного метода лечения аллергических заболеваний.

При диагностике аллергических заболеваний в процессе сбора анамнеза выделяют предполагаемую группу аллергенов, которые могли вызвать у больного состояние гиперчувствительности. С этими аллергенами проводят аллергические диагностические пробы вне фазы обострения болезни. Параллельно с введением аллергенов вводят контрольные растворы — растворитель аллергенов и физиологический раствор.

Применяют кожные и провокационные аллергические диагностические пробы.

Кожные пробы — наиболее безопасный и простой вид аллергических диагностических проб. В зависимости от способа введения аллергена применяют аппликационные, скарификационные и внутрикожные пробы.

Аппликационные пробы применяют при повышенной чувствительности к простым химическим веществам (бензол, бензин и др.), некоторым медикаментам (йод, новокаин и др.) у больных с контактным дерматитом.

На неповрежденный участок кожи предплечья, спины или живота накладывают кусок марли, смоченный раствором аллергена (в концентрации, не вызывающей раздражения кожи у здоровых людей), и заклеивают лейкопластырем на 20 минут. Результат оценивают через 20 минут, 12 и 24 часа с момента нанесения аллергена. Появление на коже в месте контакта с аллергеном гиперемии и отека свидетельствует о наличии гиперчувствительности к данному аллергену.

Скарификационные пробы применяют при повышенной чувствительности к пыльцевым, бытовым и эпидермальным аллергенам у больных поллинозами, бронхиальной астмой, аллергическим ринитом, крапивницей и отеком Квинке. На кожу ладонной стороны предплечья наносят капли аллергена и контрольных растворов. Отдельным для каждого аллергена скарификатором проводят через каждую каплю параллельные царапины. Через 20 минут и 24 часа производят оценку проб. Развитие отека в зоне скарификации свидетельствует о положительной реакции.

Внутрикожные пробы применяют при повышенной чувствительности к бактериальным и грибковым аллергенам у больных бронхиальной астмой, хронической рецидивирующей крапивницей и инфекционными заболеваниями. Эти пробы в 100 раз более чувствительны, чем скарификационные, но менее специфичны и дают больше осложнений.

Туберкулиновым шприцем внутрикожно вводят от 0,01 до 0,1 мл раствора аллергена. При развитии уртикарного волдыря через 15 — 20 минут после введения — реакция положительная немедленного типа. Возникновение в месте инъекции зоны гиперемии с инфильтратом через 24—48 час. свидетельствует о положительной реакции замедленного типа.

Некоторые аллергены (пенициллин и другие антибиотики) при постановке пробы у больных с повышенной чувствительностью к ним могут дать тяжелые осложнения (шок) при проведении скарификационных и особенно внутрикожных проб. Для определения чувствительности к этим аллергенам лучше применять реакцию пассивного переноса гиперчувствительности по Прауснитцу — Кюстнеру. У больного с аллергией к антибиотикам получают сыворотку крови, содержащую антитела. Пассивно сенсибилизируют участок кожи здорового человека, вводя ему внутрикожно сыворотку больного. Через 24 часа в место введения сыворотки вводят аллерген. Покраснение этого участка кожи здорового человека свидетельствует о наличии у больного антител, специфичных к исследуемому аллергену.

При наличии повышенной чувствительности замедленного типа реакцию пассивного переноса проводят со взвесью лимфоцитов больного.

Провокационные пробы применяют в случаях, когда данные аллерголо-гического анамнеза не соответствуют результатам кожных проб. Провокационные пробы наиболее специфичны в диагностике аллергических заболеваний. Применяют назальные, конъюнктивальные, ингаляционные и другие провокационные пробы.

Назальный тест применяют при диагностике аллергического ринита. Пипеткой закапывают в обе половины носа по 2—3 капли контрольной жидкости. При отсутствии реакции начинают исследование с возрастающими концентрациями аллергена. При затруднении носового дыхания, чиханьи, ринорее проба считается положительной.

Конъюнктивальный тест применяют при диагностике поллинозов с явлениями конъюнктивита. После предварительного испытания с контрольным раствором аллерген закапывают пипеткой в нижний конъюнктивальный мешок. Покраснение, слезотечение и зуд век — признаки положительной реакции.

Ингаляционный тест применяют при диагностике бронхиальной астмы. Раствор аллергена дают больному при помощи аэрозольного распылителя. При положительной пробе жизненная емкость легких снижается на 10%, развивается бронхоспазм, который купируют бронхолитиками. При применении провокационных проб учитывают также и поздние реакции.

Холодовая проба применяется при диагностике хронической рецидивирующей крапивницы. Кусок льда закрепляют на коже предплечья на 3 минуты с помощью бинта. При положительном результате через 10 минут после удаления льда на коже образуется уртикарный волдырь.

Тепловая проба применяется при диагностике крапивницы. Пробирку с горячей водой (t° 40— 42°) помещают на 10 минут на кожу ладонной поверхности предплечья. Положительная реакция характеризуется образованием на месте контакта уртикарного волдыря.

Аллергические диагностические пробы применяют также при диагностике некоторых инфекционных и паразитарных заболеваний, сопровождающихся аллергической сенсибилизацией организма. При диагностике туберкулеза (см.) применяют скарификационную пробу Пирке и внутрикожную пробу Манту. В качестве аллергена применяют разведения сухого очищенного туберкулина. При диагностике бруцеллеза (см.) применяют внутрикожную пробу Бюрне. Аллергеном служит раствор бруцеллина, содержащий антигенный набор трех различных возбудителей бруцеллеза. При диагностике эхинококкоза (см.) применяют внутри-кожную пробу Касони. Аллергеном служит вытяжка из содержимого пузыря эхинококка. При диагностике туляремии (см.) применяют внутрикожную пробу с тулярином — убитой нагреванием взвесью бактерий. При диагностике дизентерии (см.) применяют пробу с дизентерином Цуверкалова.

Аллергические диагностические пробы — диагностические реакции, выявляющие состояние повышенной чувствительности организма к соответствующим аллергенам.

Сенсибилизированный организм отвечает на введение аллергена необычной реакцией местного или общего характера, степень которой определяется видовыми и индивидуальными свойствами организма, особенностями аллергена и способами его введения (см. Аллергия, Анафилаксия). Аллергическое состояние возникает при ряде инфекционных заболеваний (туберкулез, бруцеллез, пневмококковая пневмония, сап, токсоплазмоз и др.), однако практическое применение аллергические диагностические пробы получили при ограниченном числе заболеваний. Диагностическая ценность аллергических проб определяется их специфичностью, чувствительностью и безопасностью для человека или животного. Аллергическое состояние возникает через некоторое время после начала инфекции, что необходимо учитывать при постановке аллергических проб. Диагностическая ценность аллергических проб заключается в том, что с их помощью удается выявить атипичные и хронические случаи заболеваний, когда установление диагноза по клиническими микробиологическим данным затруднительно. Так как аллергическое состояние организма сохраняется в течение длительного срока после перенесенного заболевания, то аллергические диагностические пробы могут быть использованы также для постановки ретроспективного диагноза.

Наиболее широкое применение аллергические диагностические пробы получили при туберкулезе. В качестве аллергена применяется фракция микобактерии туберкулеза, называемая туберкулином (см.). При подкожном введении туберкулина возникает общая реакция (резкое повышение температуры), а также возможно активирование туберкулезной инфекции, поэтому подкожный метод не нашел применения в медицинской практике. Распространения не получила также офтальмореакция Кальметта — Вольфф-Эйснера, заключающаяся в нанесении 1 % раствора туберкулина на конъюнктиву глаза. Оба эти метода применяют в ветеринарии. В медицинской практике широко используются накожная проба с туберкулином, реакция Пирке и внутрикожная реакция Манту.

При реакции Пирке на кожу средней трети сгибательной поверхности предплечья наносят каплю неразведенного туберкулина Коха, а несколько ниже — каплю контрольного раствора (физиологический раствор с соответствующим туберкулину содержанием фенола). Затем в месте расположения капель скарифицируют кожу на протяжении 5 мм, не нарушая при этом кровеносных сосудов. После всасывания туберкулина избыток его удаляют марлей. Интенсивность реакции оценивается через 48—72 час. по величине папулы, возникшей на месте нанесения туберкулина (цветн. таблица, рис. 2). Положительная реакция Пирке указывает на инфицированность организма микобактерией туберкулеза. В раннем детском возрасте она свидетельствует не только о присутствии возбудителя, но и о клиническом заболевании. Относительно низкая чувствительность реакции Пирке при отрицательных результатах делает необходимым постановку другой аллергической диагностической пробы — реакции Манту, которая обычно дополняет пробу Пирке и осуществляется путем внутрикожного введения 0,1 мл разведенного старого туберкулина или его очищенной белковой фракции. Положительным результатом считается появление через 48—72 час. папулы не менее 5 мм в диаметре (цветн. таблица, рис. 1). При постановке реакции Манту необходимо учитывать, что положительный ответ может быть у детей, вакцинированных против туберкулеза. Только стойко положительные повторные реакции могут указывать на наличие туберкулезной инфекции.

Аллергическая диагностическая проба при бруцеллезе была предложена Бюрне (Е. Burnet). В качестве аллергена используют бруцеллин — фильтрат месячной бульонной культуры бруцелл, убитых прогреванием при t° 80° в течение 1 часа. Проба ставится внутрикожно. Учет проводят через 24 часа. Положительная реакция появляется через 6—8 час. и выражается в отеках, болезненности и покраснении на месте введения аллергена. Реакция Бюрне чувствительна и специфична. Положительный результат наблюдают с 8—9-го дня заболевания и длительное время после выздоровления. Отрицательный ответ, указывающий на отсутствие аллергии, не исключает заболевания.

Аллергические диагностические пробы при туляремии предложили Л. М. Хатеневер и др. Аллерген тулярин представляет собой убитую при t° 70° взвесь бактерий в глицериново-физиологическом растворе. Аллергическую диагностическую пробу с тулярином проводят путем внутрикожной инъекции 0,1 мл препарата. Учитывают реакцию через 24—48 час. При положительном результате на месте введения аллергена наблюдают отек и гиперемию. При пробе с тулярином возможны побочные реактивные явления: ухудшение самочувствия, лимфаденит, повышение температуры. Реакция специфическая и появляется с 5-го. дня заболевания. Как и проба с бруцеллином, проба с тулярином может быть положительной длительное время после заболевания. Отрицательный ответ не исключает инфекции.

Аллергические диагностические пробы при сапе проводят с помощью аллергена маллеина, который представляет собой взвесь убитой 4—8-месячной культуры бактерии в 4% глицериновом бульоне. Реакцию ставят накожным способом аналогично пробе Пирке. В ветеринарной практике применяют офтальмореакцию.

Реакция Касони представляет аллергическую диагностическую пробу при эхинококкозе. Аллерген — стерильный фильтрат жидкости эхинококкового пузыря из эхинококка легкого или печени скота.

Пробу проводят внутрикожно. Положительная реакция, наступающая уже через 20 мин., выражается в появлении беловатого пузырька, окруженного широкой гиперемированной зоной в виде сливающихся островков. Через 24—48 часов наступает поздняя реакция в виде инфильтрата.

колок (микра 10. 1. Методы микробиологической диагностики инфекционных болезней бактериоий, бактериологический, биолог, серол, аллерг и собственно иммунный. Их достоинства и недостатки

Название 1. Методы микробиологической диагностики инфекционных болезней бактериоий, бактериологический, биолог, серол, аллерг и собственно иммунный. Их достоинства и недостатки
Анкор колок (микра 10.doc
Дата 20.12.2020
Размер 0.7 Mb.
Формат файла
Имя файла колок (микра 10.doc
Тип Документы
#12286
страница 1 из 5
Подборка по базе: Методичка Возможности биорезонансной диагностики на аппаратно-пр, Контрольная работа Эконом методы Вариант 7.docx, ПРИНЦИПЫ И МЕТОДЫ ЛОГОПЕДИЧЕСКОГО ВОЗДЕЙСТВИЯ.docx, Лекция 12. Методы и задачи управления проектами на этапе реализа, Основные методы.docx, Методы диагностики внутриутробных состояний плода.doc, Курсовая — Социально-психологические методы управления.docx, «Нарушение менструальной функции. Диагностика. Методы лечени.doc, СРС Методы поиска решений в экспертных системах.docx, Современные методы поиска научной информации_ Курс для магистро.

1.Методы микробиологической диагностики инфекционных болезней: бактерио-ий, бактериологический, биолог, серол, аллерг и собственно иммунный. Их достоинства и недостатки.

Бактериоскопический (микроскопический) метод — совокупность способов обнаружения и изучения морфологических и тинкториальных свойств бактерий (микробов) в лабораторной культуре, патологическом материале или пробах из внешней среды с помощью микроскопии. Применяют для установления диагноза инфекционного заболевания или иного вызванного микробами процесса, а также при идентификации выделенной чистойкультуры. Метод бактериоскопического исследования приобретает особое значение, если микроб имеет морфологические и тинкториальные особенности или особую локализацию в тканях, клетках организма. Только при некоторых инфекциях для постановки диагноза достаточно морфологического исследования.

Для диагностики большинства инфекций микроскопия, как первый этап микробиологического исследования, имеет лишь вспомогательное, ориентировочное значение.

Ценность бактериоскопического метода состоит в простоте, доступности методик и быстроте получения результатов (30-60 минут и менее). Однако специфичность его в связи с близостью морфологии разных видов мала, а чувствительность ограничена —разрешающая способность метода составляет в среднем 100 000 клеток в мл.

Микроскопические методы заключаются в приготовлении микроскопических препаратов для микроскопирования (нативных или окрашенных простыми и сложными способами) из исследуемого материала и их микроскопирование с применениемразличных видов микроскопической техники (световая, темнопольная, фазово-контрастная, люминесцентная. электронная). В большинстве случаев результатымикроскопических исследований носят ориентировочный характер. Тем не менее, микроскопией материала можно определить некоторые морфологические признаки возбудителей (наличие ядер, жгутиков, внутриклеточных включений и т.д.), а также установить факт наличия или отсутствия микроорганизмов в присланных образцах.

Классическое бактериологическое (вирусологическое, микологическое) исследование (называемое «золотым стандартом» микробиологической диагностики). Егоцелью является выделение и идентификация возбудителя.

Алгоритм бактериологического (вирусологического, микологического) исследования складывается из следующих основных этапов:

1) первичная микроскопия (необязательный);

2) первичный посев для выделения чистой культуры;

3) накопление чистой культуры;

4) изучение комплекса биологических свойств выделенной культуры и ее идентификация. Идентификацию чистых культур (до вида микроорганизма) проводят с учётом морфологических, тинкториальных, культуральных, биохимических, токсигенных и антигенных свойств микроорганизма. Большинство исследований включает определение чувствительности к антимикробным препаратам у выделенного возбудителя. Для эпидемиологической оценки роли микроорганизма проводят внутривидовую идентификацию определением фаговаров, биоваров, резистентваров и т.д.


Классическое микробиологическое исследование имеет ряд недостатков. Прежде всего, это достаточно длительный процесс. Его минимальный срок 3-4 дня, но могут пройти многие дни и даже недели, прежде чем выделенный возбудитель будет точно идентифицирован. Для некоторых патогенных бактерий (холерного вибриона, дифтерийных бактерий) разработаны ускоренные методы выделения и идентификации, но и они позволяют получить ответ не ранее 36-48 часов.

Задача микробиологических исследований — выделить из исследуемого материала микроорганизмы и идентифицировать, то есть определить их видовую принадлежность.

Основой микробиологических исследований является бактериологический метод диагностики, суть которого – выделение микроорганизмов в чистой культуре и их идентификация.

Для идентификации микроорганизмов изучают следующие свойства:

5. Патогенные: ферменты патогенности – лецитиназа, плазмакоагулаза и пр.; токсигенность – способность продуцировать экзотоксины (дифтерийная палочка, золотистый стафилококк) (подробно вопрос был рассмотрен в предыдущем семестре, см. тему «Инфекция. Патогенность и вирулентность

6. Антигенные (серологические) (подробно вопрос был рассмотрен в темах раздела «Иммунтет», см. предыдущий семестр)

7. Фаголизабельность – способность лизироваться бактериофагами (вирусами бактерий): чувствительность к лечебным фагам (для лечения инфе ционного заболевания) и чувствительность к диагностическим фагам (в довым, типовым); фаготипирование – определение чувствительности к типовым фагам, проводится с целью определения источника и путей распространения микроорганизмов в окружающей среде или среди коллектива(подробно вопрос был рассмотрен в теме «Бактериофагия», см. соответствующую тему)

8. Бактерициночувствительность и бактериоциногения: проводиться с целью определения источника и путей распространения микроорганизмов вокружающей среде или среди коллектива (см. тему «Генетика бактерий»)

9. Чувствительность к антимикробным препаратам: антибиотикам,химиотерапевтическим препаратам и антисептикам (для леченияинфекционного заболевания, тема «Антибиотики»), дезинфектантам (длявыбора режима дезинфекции, см. тему «Асептика, антисептика.Дезинфекция, стерилизация»).

Основной недостаток бактериологического метода — длительность исследования — от 3 до 5 суток, а в отдельных случаях и более.

Результаты многих диагностических исследований на предмет обнаружения возбудителей в значительной степени зависят от их вида, а также от времени и способа взятия патологического материала. Характер материала определяется клиническими особенностями заболевания: это должны быть те субстраты или биологические жидкости, в которых на данной стадии заболевания наиболее вероятно присутствие возбудителей. Успех проведения бактериологического метода во многом зависит от предварительного этапа, включающего забор исследуемого материала и его транспортировку, оформление направления в бактериологическую лабораторию.

Биологические методы направлены на определение наличия токсинов возбудителя в исследуемом материале и на обнаружение возбудителя (особенно при незначительном исходном содержании в исследуемом образце или когда возбудитель не может быть обнаружен методом посева, — например, при вирусных и риккетсиозных заболедваниях).

Животных заражают для выделения чистой культуры возбудителя в тех случаях, когда нельзя получить ее другими способами (например, при загрязнении исследуемых объектов посторонней микрофлорой, подавляющей рост возбудителя; при незначительном содержании микроорганизмов или переходе их в фильтрующиеся формы).

Методы включают заражение чувствительных лабораторных животных (чувствительных к предполагаемому возбудителю) исследуемым материалом споследующим выделением чистой культуры патогена либо установлением фактаприсутствия микробного токсина и его природы, либо воспроизводят характернуюклиническую картину.

Моделирование экспериментальных инфекций у чувствительных животных — важный инструмент изучения патогенеза заболевания и характера взаимодействий внутрисистемы микроорганизм—макроорганизм. Для проведения биологических пробиспользуют только здоровых животных определённых массы тела и возраста.

Инфекционный материал вводят внутрь, в дыхательные пути, внутрибрюшинно, внутривенно, внутримышечно, внутрикожно и подкожно, в переднюю камеру глаза, черезтрепанационное отверстие черепа, субокципитально (в большую цистерну головногомозга). У животных прижизненно забирают кровь, экссудат из брюшины, после гибели —кровь, кусочки различных органов, СМЖ, экссудат из различных полостей.

Недостатки: а) необходимость содержания вивария; б) длительность проведенияисследования. Кроме того, даже при лабораторном заражении далеко не всегда удаетсявыделить возбудителя, что особенно характерно для вирусных инфекций.

СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ метод заключается в определении титра специфических антител в сыворотке больного. Для его реализации используют различные реакции иммунитета, как простые (агглютинация и ее разновидности), так и сложные (РСК, ИФА и др.).

Классическая серодиагностика основана на:

1). Определении антител к возбудителю в диагностическом титре;

2).Обнаружение в исследуемой сыворотке крови антител к возбудителю ряда инфекционных болезней недостаточно для постановки диагноза, поскольку оно может отражать наличие постинфекционного или поствакцинального иммунитета. Именно поэтому исследуют парные сыворотки больного, взятые в первые дни болезни и через 7-10 дней (иногда этот интервал может быть более длительным). В этом случае оценивают нарастание титра антител. Нарастание титра антител в 4 раза и более свидетельствуетоб инфекционной природе антител.

3).При экзотических инфекционных болезнях, а также при гепатитах, ВИЧ- инфекции и при некоторых других заболеваниях сам факт определения антител свидетельствует об инфицированности пациента и имеет диагностическое значение.

Серологический метод диагностики применяют с конца первой-начала второй недели заболевания.

Для обнаружения антитела к исследуемой сыворотке прибавляют известный антиген. Эти препараты, называемые диагностикумами, представлят собой взвесь убитых микроорганизмов (их отдельных антигенов) или эритроцитов (частиц латекса), на которых адсорбированы микроорганизмы или их антигены.

СОБСТВЕННО ИММУННЫЙ МЕТОД ДИАГНОСТИКИ

Собственно-иммунный метод (экспресс)

Цель: поиск антигенов микробов в патологическом материале с помощью серологических иммунных реакций (см. реакции в приложении 6 в разделе 4).

Серологическими называют реакции иммунитета между антигенами (АГ) и антителами (AT). Детерминанта АГ связывается с активным центром AT. Соединение АГ и AT осуществляется посредством водородных и гидрофобных связей, взаимодействия ионов, кулоновских и ван-дер-вальсовых сил. Прочность соединения АГ с AT обеспечивается не только силами связывания, но и оптимальной адаптацией активного центра AT к АГ-детерминанте. Серологические реакции протекают в две фазы. Первая — специфическая невидимая — заключается во взаимодействии АГ с AT. Вторая фаза — видимая — проявляется в зависимости от типа реакции, который определяется свойствами АГ, AT и другими ингредиентами реакций. Различают несколько типов реакций: агглютинация, преципитация (иммунная диффузия), лизис, нейтрализация и др.

В реакции агглютинации (РА) антиген участвует в виде корпускулярной частицы. Это могут быть суспензии микроорганизмов, клеток организма, например эритроцитов.

При смешивании со специфической антисывороткой происходит склеивание и оседание визуально различимых хлопьев — иммунных комплексов.

Реакцию агглютинации можно ставить качественно — на стекле и количественно — в пробирках, где готовятся разведения сыворотки.

Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА) является своеобразной модификацией РА.

Сущность ее состоит в том, что молекулы антигена адсорбируются на поверхности эритроцитов (после обработки эритроцитов танином или формалином). Такие «нагруженные» АГ эритроциты приобретают способность агглютинироваться иммунной сывороткой, специфичной для данного АГ.

Образование комплекса АГ—AT влечет за собой и склеивание эритроцитов (на дне лунки или пробирки образуется гемагглютинат в виде «перевернутого зонтика»), что легко учитывать. Таким образом, эритроциты не участвуют непосредственно в образовании комплекса АГ—AT, но служат его индикаторами.

РНГА более чувствительна, чем РА.

Это тест на выявление неполных антител, которые сами не могут агглютинировать антигены, но способны к ним присоединяться. Реакцию проводят поэтапно: к сыворотке крови обследуемого добавляют эритроцитарный диагностикум — известные антигены, адсорбированные на эритроцитах. После инкубации эритроциты отмывают и добавляют кроличьи AT против человеческих глобулинов. В результате антиглобулиновая сыворотка склеивает эритроциты через образовавшиеся на них комплексы АГ—AT.

Существуют две разновидности реакции Кумбса: прямой и непрямой:

• Прямой метод: выявление антирезусных антител, адсорбированных на эритроцитах новорождённого.

Кровь берут у новорождённого, отмывают эритроциты, добавляют к ним

антиглобулиновые антитела: реализуется феномен «решётки» — происходит видимая глазом агглютинация эритроцитов

• Непрямой метод: выявление антирезусных анител в сыворотке матери.


///1. В пробирку с материнской сывороткой вносят стандартные резус-положительные эритроциты. На эритроцитах адсорбируются антирезусные антитела сыворотки матери.

2.Вносят в пробирку антиглобулиновую сыворотку (антиглобулиновые антитела): реализуется феномен «решётки» — происходит видимая глазом агглютинация эритроцитов

В реакции преципитации (РП) участвует мелкодисперсный (растворимый антиген). При контакте с антителами — преципитинами образуется осадок.

Реакцию преципитации можно проводить в жидкой среде (в узких пробирках) и в геле (в чашках Петри). При постановке РП в узких пробирках жидкость, содержащую один из реагентов, например, прозрачный экстракт из микробных клеток (0,2 мл), наслаивают на прозрачную преципитирующую сыворотку (0,2 мл). В положительных случаях на границе соприкосновения жидкостей через 1—5 минут образуется серо-белое кольцо. РП, как и РА, идет в электролите, но отличается более высокой чувствительностью.

////Схемы реакций преципитации в пробирке (А) и агаре (Б).

Одной из разновидностей РП в геле является реакция определения токсигенности дифтерийной палочки. Для этого в чашку Петри на питательную среду помещают полоску стерильной фильтровальной бумаги, пропитанную антитоксической противодифтерийной сывороткой. Затем чашку засевают испытуемыми культурами в виде пятачков на расстоянии 0,6—0,8 см от края бумаги. Чашки инкубируют при 37°С в течение суток. При наличии токсигенной культуры в месте взаимодействия токсина с антитоксином образуются лини преципитации в виде дуг (усов, полуколец).

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)

Прямая (метод Кунса). Микроорганизмы, обработанные антителами, меченными флюорохромами, способны светиться в люминесцентном микроскопе.

Непрямая. На первом этапе микроорганизмы взаимодействуют со специф ческой сывороткой. Далее воздействуют на образовавшийся иммунный комплекс антиглобулиновой сывороткой, меченной флюорохромом. Иммунный комплекс с помощью этого конъюгата светится в люминесцентном микроскопе.

Реакция связывания комплемента (РСК)

Это реакция лизиса антигена (например, цитолиза, бактериолиза) под действием антител с участием комплемента. Если антиген — это бактериальная клетка или вирус, то лизис не сопровождается видимыми проявлениями. Поэтому, чтобы обнаружить наличие комплекса АГ + AT + комплемент в опытной системе, где неизвестен один из компонентов (АГ или AT), используют индикаторную систему АГ + AT, где оба компонента известны и лизис антигена хорошо проявляется, так как в качестве АГ берут эритроциты. Реакция основана на способности комплемента — комплексной системы белков нормальной сыворотки позвоночных — фиксироваться на комплексе АГ—AT и последующем лизисе антигена. В РСК участвуют пять компонентов: АГ—AT опытной системы, в которой один из реагентов неизвестен, комплемента и индикаторной системы.

Индикаторная — гемолитическая система состоит из взвеси эритроцитов барана и гемолитической сыворотки кролика, полученной путем его иммунизации эритроцитами барана. Если АГ и AT в опытной системе соответствуют друг другу, то результатом этого взаимодействия является связывание комплемента. Индикаторная система выявляет свободный, несвязавшийся комплемент. Если комплемент остался свободным, то он свяжется с комплексом эритроциты — гемолитическая сыворотка и будет лизировать эритроциты. Таким образом, наличие гемолиза означает отрицательный результат РСК, а отсутствие гемолиза — положительный результат.

Высокочувствительный метод выявления АГ или AT на основе реакции АГ—AT с применением меченных ферментами АГ или AT.

Принципиальная схема иммуноферментного анализа для выявления AT следующая. Известный АГ (вирус, белок) — диагностикум — фиксируется на твердой фазе. К нему добавляют сыворотку обследуемого с неизвестными AT. После инкубации и промывки на антигене остаются специфичные к нему AT, если таковые имелись в сыворотке обследуемого. Для обнаружения комплекса АГ—AT к нему добавляют кроличью антиглобулиновую сыворотку, меченную ферментом (АГС-Ф). Для получения данной сыворотки иммунизируют кролика глобулинами человека. Полученную от кролика сыворотку метят каким-либо ферментом, например, пероксидазой хрена. Если в исследуемой сыворотке есть AT к АГ (диагностикум), то они будут служить антигеном для антиглобулиновой сыворотки. После второй промывки образовавшийся комплекс АГ + AT + АГС-Ф можно обнаружить, добавив субстрат к ферменту и индикатор на продукты расщепления субстрата. Изменение цвета индикатора свидетельствует о наличии искомых AT в сыворотке обследуемого.

АЛЛЕРГИЧЕСКИЙ МЕТОД ДИАГНОСТИКИ.

При многихинфекционных заболеваниях развивается состояние повышенной чувствительностик повторному введению возбудителя или продуктов его жизнедеятельности. Такоесостояние, называемое инфекционной аллергией, характерно для туберкулеза,туляремии, бруцеллеза, сапа, сифилиса, сибирской язвы, токсоплазмоза, паротита,простого герпеса и ряда других инфекций.

Для выявления инфекционной аллергии применяют аллергическиедиагностические пробы, для чего строго внутрикожно вводят соответствующий аллерген.Наличие гиперемии и инфильтрата указывает на положительный результатреакции, т. е. на наличие инфекционной аллергии.

Аллергический метод диагностики основан на аллергической реакции – реакциигиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ).

В основе формирования реакции ГЗТ лежит не гуморальный, а клеточныйиммунный ответ организма на первый (сенсибилизирующий) контакт с определеннымантигеном. Сенсибилизация связана с преимущественной пролиферацией Т-лимфоцитов,несущих специфические для данного аллергена рецепторы. После этого в организменадолго сохраняется размножившийся клон сенсибилизированных Т-лимфоцитов,который вступает в реакцию с конкретным аллергеном при его повторном попадании ворганизм.

Выявление клеточного иммунного ответа — гиперчувствительности замедленноготипа (ГЗТ), схема

* Введение внутрикожно Аг бактерий

* Через 48 – 72 часа появляется воспаление

* Измеряют величину покраснения и папулы

Аг Тх выделяют лимфокиныактивация Тцтл активация фагоцитоввоспаление

В реакциях ГЗТ участвуют: Т-хелперы (стимулируют образование Т-эффекторовчерез ИЛ-2) → Т-эффекторы (продуцируют лимфокины — хемоаттрактанты и привлекаютмакрофаги в очаг воспаления) → макрофаги (продуцируют медиаторы-монокины) →мононуклеарный инфильтрат на месте введения аллергена → величина инфильтратазависит от степени сенсибилизации организма и достигает максимума через 24-48 ч

Аллергические диагностические пробы позволяют диагностировать туберкулез (реакция Манту), бруцеллез (проба Бюрне), туляремию (проба с тулярином), сибирскую язву (проба с антраксином), мягкий шанкр (реакция Дюкрея), проказу (реакция Мицуды), а последняя — даже дифференцировать туберкулоидную (лепромин-положительную) форму от лепроматозной (лепромин-отрицательной).

Положительная кожная аллергическая проба указывает, что введение аллергена при постановке пробы является повторным, т. е. индивидуум в прошлом имел контакт с микробным агентом. Здесь сказывается основной недостаток диагностической ценности кожно-аллергических проб, так как они могут быть положительными не только у инфицированных, но и у привитых против этих болезней, а также у лиц, переболевших много лет назад, в том числе и у носителей, т. е. положительный тест у здоровых лиц указывает только на контакт с микробным антигеном.

При определении природы заболевания истинное диагностическое значение имеет только переход от отрицательной кожной пробы к положительной, который наблюдается в течение болезни. Кроме того, вираж реакции, т. е. увеличение выраженности ее проявления при повторном исследовании, также служит основанием для более детального обследования на инфицированность данным возбудителем.

При приеме некоторых препаратов кортикостероидных гормонов, иммунодепрессантов, а также при некоторых заболеваниях (саркоидозе, болезниХоджкина и отдельных опухолях) учет результатов постановки аллергических проб затруднен, потому что в этих случаях наблюдается так называемая анергия, т. е. значительное снижение общей кожной реактивности.

Более того, при появлении сыпи у детей, когда ребенок переносит одно из таких заболеваний, как корь, ветряная оспа, также может иметь место анергия, и в этот период при постановке пробы Манту туберкулиноположительный ребенок может стать временно туберкулиноотрицательным, т. е. получается ложноотрицательный результат.

2.Генетические методы диагностики инфекционных заболеваний (ДНК-зондирование, ПЦР). Их принцип, область применения.

Аллергический метод диагностики инфекционных заболеваний

ДИАГНОСТИКА ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ

Методы диагностики. Чтобы распознать инфекционную болезнь и выявить больных животных, проводят клинический осмотр, аллергические, серологические, микроскопические, бактериологические исследования, биологическую пробу и патологоанатомпческие вскрытия.

Клиническому осмотру подвергают все поголовье животных в хозяйстве, где появилось заболевание. Животных с явно выраженными ь неясными клиническими признаками выделяют для уточнения диагноза.

Аллергические исследования заключаются в введении в организм животного (на конъюнктиву глаза, подкожно или внутрикожно) специфических препаратов, вызывающих у больного животного характерную реакцию. Имеются препараты для выявления лошадей, больных сапом (маллеин), животных, больных туберкулезом (туберкулин), бруцеллезом (бруцеллизат) и другие. Эти препараты называются аллергенами. При введении двух-трех капель маллеина в глаз больной сапом лошади у нее через несколько часов начинается слезотечение из этого глаза, с выделением гноя. У здоровой лошади такой реакции не наблюдается.

Серологическим исследованием называется исследование сыворотки крови животных, позволяющее выявить зараженных животных. В ветеринарной практике широко применяют исследование сыворотки крови по реакции агглютинации (РА) и реакции связывания комплемента (РСК).

Микроскопическому исследованию подвергают мазки крови или отпечатки из органов животных. При этом удается увидеть возбудителей болезни под микроскопом. Бактериологическим исследованием выделяют из органов павшего животного культуру возбудителя болезни посевами зараженного материала на специальные питательные среды. Биологическая проба позволяет воспроизвести заболевание у здоровых животных заражением их материалом, взятым от больного животного, или культурой возбудителя.

Патологоанатомическое вскрытие трупа животного нередко помогает подтвердить прижизненный диагноз. Иногда кусочки органов посылают в лабораторию для гистологического исследования, т. е. исследования под микроскопом ткани, ее характера и строения.

Взятие и пересылка материала для исследования на инфекционные болезни. Взятие патологического материала. Патологический материал берут в стерильную посуду стерильным инструментом, строго соблюдая меры личной предосторожности. Место на трупе или органе, от которых необходимо взять материал на исследование, прижигают горячей металлической пластиной (шпателем).

Жидкий материал — кровь, желчь, мочу, эксудат, слизь, гной и пр. — насасывают в тоЕпше стеклянные пастеровские пипетки, которые запаивают с обоих концов. Его можно также взять стерильным шприцем с иглой в стерильный флакон или стерильную пробирку с плотной резиновой или корковой пробкой, залив ее сверху расплавленным парафином пли воском. Тот же материал, но для микроскопического исследования наносят тонким слоем на чистое предметное, предварительно обезжиренное и профламбированное на огне стекло, которое затем подсушивают на воздухе; стекла связывают попарно мазками внутрь, вложив между ними перекладины из спичек. Вместо предметного можно использовать кусочек оконного стекла, чисто вымыв его в теплом 2-3%-ном растворе питьевой соды и обезжирив в спирте с эфиром или в бензине. Такое стекло высушивают на воздухе и обжигают пламенем спиртовки, после чего на него наносят тонким слоем подлежащий исследованию материал,

Гной из глубоких полостей берут стерильным ватным тампоном на кусочке тонкой проволоки или на небольшой деревянной палочке, вделанной в ватную пробку стерильной пробирки. ,


Гной из невскрывшихся глубоких абсцессов берут проколом стенки абсцесса тонкой, длинной иглой, в стерильный 5-20-граммовый шприц. Затем гной сливают через эту же иглу в стерильную пробирку (или флакон), плотно закрыв ее стерильной ватной или корковой пробкой и залив сверху расплавленным парафином или воском. Место прокола предварительно выстригают и дезинфицируют, после взятия гноя .смазывают настойкой йода.

Кал берут из прямой кишки в небольшом количестве в стерильные пробирки или в такие же стеклянные баночки, плотно закрывающиеся пробками.

Мочу у большинства животных берут через катетер в стерильные флакончики емкостью 100-200 мл. Ее можно взять и без катетера, массажируя рукой мочевой пузырь через прямую кишку и вызывая этим мочеиспускание.

Для исследования на бешенство берут аммоновы рога, а на болезнь Ауески — продолговатый мозг. Их кладут в стерильные баночки и консервируют: для бактериологического исследования — 33%-ным водным раствором глицерина, для гистологического исследования — 10%-ным водным раствором формалина.

Если невозможно вскрыть черепную коробку с соблюдением всех мер предосторожности, в лабораторию посылают голову, целиком отделив ее от трупа. Отпрепарированную голову необходимо завернуть в марлю, пропитанную дезинфицирующим раствором, а затем в пергамент или клеенку, запаковать в плотный ящик и срочно отправить с нарочным в ветеринарную лабораторию. Руки необходимо защитить резиновыми перчатками или брезентовыми (кожаными) рукавицами и после этой работы вымыть и тщательно продезинфицировать, помня, что в слюне бешеных животных содержится вирус.

Внутренние органы — сердце, легкие, печень, селезенку, почки, лимфатические узлы, желудок, а также пораженные мышцы и др. ткани — для бактериологического и гистологического исследования берут маленькими кусочками в местах с наиболее типическим поражением на границе со здоровой тканью в стерильные баночки с плотно притертыми пробками. Части пораженного желудка, кишечника или кусочки некротизированных тканей вначале обмывают водой, затем просушивают ватными тампонами и также помещают в стерильные баночки.

Материал, взятый для бактериологического исследования в зимнее время, не консервируют, в теплое же время года заливают 33%-ным водным раствором глицерина; для гистологического исследования — 10%-ным водным раствором формалина.

Материал не следует консервировать при быстрой доставке его в лабораторию. Банки с материалом герметически закупоривают пробками, закрепляя их тонкой проволокой или шпагатом, а затем заливают сургучом или замазывают смесью воска с парафином.

Трубчатые кости отделяют от трупа, стремясь не повредить их концы, освобождают от мышц и сухожилий, заворачивают в марлю, смоченную раствором сулемы или фенола, и упаковывают в плотный ящик.

Ухо (для исследования па сибирскую язву) берут с той стороны, на которой лежал труп. Предварительно ухо перевязывают у основания в двух местах шпагатом и отрезают между перевязками. Участок кожи на трупе, где отрезано ухо, прижигают каленым железом. Отделенное ухо сначала заворачивают в марлю, смоченную раствором сулемы или фенола, а затем в пергаментную бумагу, после чего упаковывают в плотный ящик. Для проведения бактериологического исследования на сибирскую язву вместо уха можно послать кровь, взятую из него толстой иглой. Можно сделать небольшой, но глубокий надрез кожи, взять кровь и нанести ее толстыми мазками на несколько предметных стекол. Мазки высушивают на открытом воздухе и, не фиксируя их пламенем спиртовки, складывают на перекладинки спичек, затем заворачивают в пергамент и упаковывают в плотный ящик или коробку, в которой и отправляют с нарочным в лабораторию. Место надреза (или укола иглой) прижигают раскаленным железом.

Трупы поросят, ягнят, птиц, телят и жеребят, а также плоды абортировавших животных отправляют в лабораторию в целом виде в тех случаях, когда на месте невозможно стерильно взять материал.

Трупы и плоды животных предварительно обтирают и завертывают в мешковину, смоченную раствором фенола или креолина, а затем упаковывают в металлический или плотный деревянный ящик со стружками и опилками.

Пчелиный сот с погибшим расплодом заворачивают в пергамент или вощеную бумагу и плотно укладывают в деревянный * ящик на планки (чтобы сот не соприкасался с дном и крышкой ящика). Погибших пчел и маток пересылают в стеклянных, плотно закрывающихся баночках, наполненных медом.

Патологический материал пересылают в лабораторию с нарочным. Плотный материал (например, трубчатую кость) можно послать почтой, обеспечив надежную упаковку, исключающую возможность рассеивания инфекции. Верх посылки обозначают надписью. При подозрении на особо опасные инфекции (сибирская язва, сап, эмфизематозный карбункул, туляремия, бруцеллез, чума свиней и птиц, инфекционная анемия, инфекционный энцефаломиелит и бешенство) материал, взятый в стеклянную посуду, помещают в металлическую коробку, которую запаивают, пломбируют или опечатывают и упаковывают в деревянный ящик.

При отправке нарочным следует герметически упакованную посуду с патологическим материалом опечатать, завернуть в вату и уложить в деревянный ящик.

В лабораторию отправляют вместе с посылкой сопроводительный документ (направление), в котором указывают: 1) адрес лаборатории; 2) какой материал направляют для исследования и в чем он законсервирован; 3) от какого животного и кому оно принадлежит; 4) клинические признаки у больного животного; 5) основные патологоанатомические изменения, обнаруженные при вскрытии трупов на месте; 6) имеются ли еще в хозяйстве больные животные со сходными признаками (сколько); 7) предполагаемые причины падежа; 8) на какие заболевания необходимо произвести исследование. Сопроводительное письмо подписывает ветеринарный работник, направляющий материал. В письме указывают дату взятия и отправления материала.

Взятие крови для серологического исследования. Кровь животных берут стерильными иглами у лошадей, крупного рогатого скота, верблюдов и у других крупных животных, а также у овец, коз из яремной вены, у свиней — из копчика хвоста или из ушной вены. На месте взятия пробы шерсть выстригают и кожу протирают дезинфицирующим раствором или денатурированным спиртом. При взятии крови следят, чтобы капли ее не попали на землю; для этого на муфту иглы надевают небольшую резиновую трубку, конец которой опускают в пробирку. С этой же целью используют специальный прибор, в который с одного конца вставляют иглу, а с противоположной стороны — пробирку. Струю крови нужно направлять по стенке пробирки, чтобы избежать распада эритроцитов (гемолиза). Гемолизированная кровь для исследования непригодна.

Кровь, взятую зимой, сразу же ставят в теплое место для свертывания кровяного сгустка и отстаивания сыворотки. Кровь доставляют в лабораторию не позднее чем на 2-3-й день после ее взятия. Сохранять ее следует в темном и прохладном месте. В жаркую погоду при невозможности своевременной отправки крови для исследования ее необходимо консервировать 0,5%-ным раствором карболовой кристаллической кислоты на физиологическом (0,85?о-ном) растворе поваренной соли. С этой целью отстоявшуюся сыворотку крови пипеткой отсасывают и переносят в чистые пробирки, оставив в первоначальной пробирке кровяной сгусток. К 9 мл сыворотки крови добавляют 1 мл 5%-ного раствора карболовой кристаллической кислоты, пробирку тщательно встряхивают, плотно закрыв ватной пробкой. При малом количестве исследуемой сыворотки к 1 мл ее добавляют 0,1 мл указанного раствора карболовой кислоты. Консервированная сыворотка может сохраняться длительное время.

Пробирки с кровью упаковывают в вертикальном положении и отправляют в лабораторию с нарочным, предохраняя от замораживания и встряхивания. Гемолизированная, проросшая и покрытая сверху пленкой плесени кровь, а также помутневшая сыворотка давно взятой крови для серологического исследования непригодны.

На каждой пробирке с кровью ставят номер или кличку животного. Бумажную этикетку надписывают простым карандашом и прикрепляют ее резиновым колечком, плотно надетым на пробирку. Пробы с кровью направляют в сопровождении списка, составленного в 2 экземплярах. Одни из них с обозначением полученных результатов лаборатория возвращает лицу, направившему кровь на исследование.

Ключевые методы лабораторной диагностики распространенных инфекций

Инфекционные болезни — это заболевания, вызванные проникновением в организм бактерий, грибков или вирусов. Самая важная часть диагностики инфекций — это определение возбудителя и его концентрации. Для этих целей используются разнообразные лабораторные методы, которые позволяют выяснить, чем именно и как давно атакован организм, а в некоторых случаях — спрогнозировать эффективность лечения тем или иным препаратом.

Особенности диагностики инфекционных заболеваний

В клинической практике данный тип заболеваний встречается очень часто. Именно они, по данным Всемирной организации здравоохранения, становятся причиной 26% всех смертей. В список самых распространенных инфекционных заболеваний входят инфекционная пневмония и другие воспалительные заболевания дыхательных путей, гепатит, ВИЧ, туберкулез, малярия, воспаления органов половой системы и мочевыводящих путей, гистоплазмоз, ротавирусные инфекционные заболевания, ветряная оспа, герпес, вирус папилломы человека и еще несколько десятков болезней. Хотя бы раз в жизни каждый из нас сталкивается с инфекционными заболеваниями и необходимостью быстрой постановки диагноза.

Все инфекционные болезни делятся на пять типов — прионные, вирусные, бактериальные, протозойные и грибковые поражения. Далее будут рассмотрены последние четыре типа как наиболее распространенные. Разные возбудители иногда могут вызывать одно и то же заболевание. В частности, пневмония может быть результатом как вирусной, так и бактериальной инфекции. Лечение зависит не от проявлений, а от возбудителя болезни. Противовирусные препараты бесполезны в борьбе с бактериями и грибками, антибиотики не действуют на вирусы. Поэтому основная задача лабораторной диагностики инфекционных заболеваний — выявление типа возбудителя.

Способы лабораторной диагностики инфекционных болезней можно разделить на два типа: неспецифические и специфические методы.

К неспецифическим относятся общий анализ крови и исследование соотношения ее белковых фракций, печеночные пробы, общий анализ мочи и кала. Эти методы не дают информации о виде возбудителя, но позволяют узнать, в какой мере болезнь затронула органы и системы организма, что именно в их работе нарушено и насколько далеко зашел процесс.

Специфические — вирусологический и бактериологический методы, микроскопическое исследование возбудителей, анализы на антигены и антитела — направлены непосредственно на обнаружение возбудителя.

Методы лабораторной диагностики бактериальных инфекций

Современная медицина располагает множеством методов выделения возбудителей бактериальной инфекции:

Бактериоскопический . Исследуется окрашенный специальным образом мазок.

Бактериологический . Биоматериал высеивается в питательную среду, и через некоторое время специалист исследует колонию бактерий, выросшую в ней.

Биологический . Направлен на определение патогенности микроорганизмов.

Серологический . Выявляет антитела и антигены в сыворотке крови — особые вещества, которые вырабатываются организмом при контакте с возбудителем определенной болезни.

Чаще всего для исследований используют кровь или сыворотку крови, реже — слюну, мочу, кал, клетки эпителия (мазок и соскоб) и другой биоматериал.

Диагностика вирусных инфекций

В лабораторной диагностике вирусных заболеваний используются:

Вирусологическое исследование . Световая и электронная микроскопия дает возможность выявить наличие вирусных включений и сами вирусы и идентифицировать их.

Серологическое исследование для обнаружения антител и антигенов. Этот метод дает возможность быстро выявить агрессора, как и в случае с бактериальными инфекциями. Для диагностики используются разнообразные способы исследования материала — реакции гемадсорбции, гемагглютинации или метод непрямой иммунофлюоресценции. Имунноблоттинг, в частности, позволяет выявлять антитела сразу к нескольким инфекциям и считается современным и точным диагностическим методом.

Молекулярно-генетические методы . Последнее слово в лабораторной диагностике. Позволяют обнаружить вирус даже тогда, когда его концентрация ничтожно мала — то есть на самых ранних стадиях. Самым известным из этих методов является ПЦР, при которой фрагмент вируса многократно копируется до тех пор, пока специалист не получит достаточно материала для определения типа вируса и его изначальной концентрации.

Для выявления вирусов обычно требуется сделать анализ крови.


Методы диагностики протозойных инфекций

Так называют инфекции, вызванные простейшими паразитами, например, амебами. Малярия, амёбиаз, токсоплазмоз, лямблиоз, трихомониаз, сонная болезнь — вот неполный список самых распространенных протозойных инфекций. Лабораторная диагностика таких заболеваний включает в себя следующие методы:

Микроскопический . Простейшие паразиты выявляются путем исследования под микроскопом окрашенных образцов биоматериала. Самый простой и надежный метод для многих возбудителей.

Культуральный . Посев биоматериала в питательную следу для дальнейшего исследования размножившихся простейших. У этого метода есть существенный недостаток: результатов нужно ждать долго, сам процесс может занять не менее 5-6-ти дней.

Серологический . Используют редко ввиду малой информативности.

Аллергический . Также не является распространенным. Кожные аллергопробы делают для того, чтобы подтвердить лейшманиоз и токсоплазмоз. Это вспомогательный диагностический метод.

В качестве биоматериала для исследований в основном используется кровь, иногда — – кал или моча.

Диагностика грибковых инфекций

Грибковые инфекции распространены не так широко, как вирусные или бактериальные потому, что они поражают в основном людей с ослабленным иммунитетом. Обычно при словах «грибковая инфекция» люди думают о заболеваниях кожи и ногтей, но сфера деятельности микозов шире: они могут поражать практически любые ткани. Самые распространенные грибковые поражения – это кандидоз, или молочница, микозы стоп, аспергиллез. При диагностике грибковых инфекций чаще всего используются следующие лабораторные методы:

Микроскопическое исследование . Препарат окрашивается и рассматривается под мощным микроскопом. Посредством иммунофлюоресцентной микроскопии исследуется проба, помеченная флюоресцеинами — специальным красителем. Наиболее быстрый способ выявления грибка по сравнению с другими методами.

Культуральный . Происходит посев пробы на питательную среду и дальнейшее исследование полученной в результате колонии грибков.

Серологический . Используется для выявления грибковых поражений, однако для микозов он считается не особенно точным.

Гибридизация нуклеиновых кислот . Самый современный способ выявления грибковых инфекций, его применяют для идентификации основных возбудителей системных микозов. Из культуры извлекается РНК и вносится особым способом помеченная молекула ДНК. Если в пробе наличествует один из основных патогенных грибков, ДНК объединится с его РНК, создав легко различимую структуру. Несомненным преимуществом метода является возможность определить инфекцию на самых ранних стадиях.

Биоматериалом для исследований являются клетки кожи, волос и ногтей, клетки слизистых оболочек (мазок или соскоб), мокрота, моча, секрет простаты, сперма, грудное молоко.

Современные методики диагностики инфекций позволяет выявить их на начальном этапе, Чем раньше болезнь будет обнаружена, тем проще ее вылечить. Поэтому сдавать анализы на инфекции желательно регулярно, даже если вы ни на что не жалуетесь и не замечаете никаких перемен в самочувствии.

Пе­ред сда­чей био­ма­те­ри­а­ла для ис­сле­до­ва­ний иног­да тре­бу­ет­ся опре­де­лен­ная под­го­тов­ка. Так, кровь обыч­но сда­ют с ут­ра, на­то­щак, а пе­ред за­бо­ром маз­ка не ре­ко­мен­ду­ет­ся при­ни­мать душ. Эти тре­бо­ва­ния очень важ­ны: они обес­пе­чи­ва­ют точ­ность ре­зуль­та­та, по­это­му узнай­те у вра­ча за­ра­нее о под­го­то­ви­тель­ных ме­рах и точ­но сле­дуй­те всем его ре­ко­мен­да­ци­ям.

Аллергический метод диагностики инфекционных заболеваний

Инфекционные болезни – многочисленная категория заболеваний, объединенных общим происхождением: все они вызваны болезнетворными микроорганизмами, то есть вирусами, бактериями или простейшими.

Своевременная диагностика инфекционных болезней необходима для назначения правильного лечения. Все инфекционные болезни можно разделить на группы по локализации заболевания и по характеру возбудителя болезни.

По локализации заболевания инфекционные болезни делят на болезни наружных покровов, инфекции дыхательных путей, кишечные инфекции, инфекционные болезни кровеносной системы, инфекции с различными механизмами передачи.

По характеру возбудителя инфекционные болезни делят на бактериальные, вирусные, грибковые, протозойные (вызванные простейшими организмами), прионные (вызываются особым классом белков – прионов, не имеющих нуклеиновых кислот и вызывающих тяжелые патологии центральной нервной системы).

Диагностика инфекционных заболеваний проводится с использованием следующих методов:

  1. Клинический метод, или симптоматическая диагностика. Опрос и осмотр пациента позволяют выявить симптомы заболевания и определить круг возможных инфекционных болезней.
  2. Объективное обследование пациента: наличие и характер сыпи, состояние слизистых, языка, лимфатических узлов.
  3. Эпидемиологический метод (анамнестический). Сбор сведений о пребывании в эндемичном очаге, контактах с инфекционными больными, употреблении зараженной пищи, о профилактических прививках и др.
  4. Лабораторные методы диагностики инфекционных заболеваний.

Именно лабораторная диагностика играет решающую роль в постановке диагноза инфекционного заболевания, поэтому на лабораторных методах диагностики инфекций стоит остановиться подробнее.

Все методы лабораторной диагностики инфекционных болезней разделяют на две группы – неспецифические или общие (например, общие анализы крови и мочи, рентгенография органов грудной клетки) и специфические (специальные), применяемые для подтверждения предполагаемого диагноза инфекционной болезни и оценки тяжести заболевания.

Специфические методы исследования позволяют обнаружить в материале от больного возбудителя инфекционного заболевания, или его антиген, или антитела к нему. Все методы специфической диагностики разделяют на группы.

1. Микроскопический метод. Материал от больного исследуют под микроскопом. Этот метод имеет решающее значение при диагностике гельминтозов и протозойных заболеваний (малярия, амебиаз, лямблиоз и др.).

2. Бактериологический метод. Материал от больного высевают на искусственную питательную среду и получаю культуру возбудителя с последующей его идентификацией. Вирусологический метод требует живых питательных сред (куриный эмбрион, культура тканей), сложен и поэтому используется только в крупных лабораториях.

3. Биологический метод основывается на заражении лабораторных животных материалом от больного. Затем из лабораторных животных выделяют чистую культуру возбудителя (бруцеллез, чума, туляремия, сибирская язва) или проводят на животных реакцию нейтрализации (ботулизм, столбняк).

4. Аллергический метод основан на обнаружении специфической сенсибилизации организма к определенному антигену. Накожно или, чаще, внутрикожно в организм больного вводится определенный антиген. У больного, сенсибилизированного к данному виду микроба, на месте введения специфического аллергена через 24-48 ч. развивается воспалительная реакция (положительная проба). Примером могут служить положительные внутрикожные реакции на тулярин (туляремия), туберкулин (туберкулез), бруцеллин (бруцеллез, проба Бюрне), токсоплазмин (токсоплазмоз).

5. Серологический метод обнаруживает в материале от больного антигены возбудителя или антитела к ним. Метод основывается на иммунологической реакции антиген-антитело. Этот метод имеет ведущее значение при диагностике вирусных инфекций.

Антиген (АГ) возбудителя выявляют в испражнениях, сыворотке крови, ликворе, слюне и другом биологическом материале, полученном от больного. Реакции основаны на применении специальных диагностических препаратов (диагностикумов), представляющих собой носитель (лиофилизированный стафилококк, латексные частицы, эритроциты) с фиксированной на нём высокоактивной сывороткой против того или иного АГ возбудителя. Реакции высокоспецифичны и могут быть использованы как методы экспресс-диагностики в ранние сроки болезни.

Антитела (AT) в цельной сыворотке крови или её фракциях, содержащих иммуноглобулины различных классов, можно обнаружить с помощью многих специфических лабораторных методов. Наиболее популярен иммуноферментный анализ (ИФА). Исследования проводят с заведомо известными АГ.

Традиционные иммунодиагностические методы, используемые для серологической диагностики острой фазы вирусных, бактериальных и паразитарных инфекций, имеют ряд ограничений. Часто невозможно провести четкую дифференциацию между первичной инфекцией, реинфекцией или обострением инфекционного процесса, особенно при серодиагностике инфекций с нетипичной динамикой антителообразования, когда наличие иммуноглобулинов класса М (IgМ) не является достоверным и достаточным признаком для дифференциации стадий заболевания. Определение IgМ, как показателя первичной инфекции, в ряде случаев утратило свое значение, так как было доказано, что их можно выявить в сыворотке периферической крови спустя месяцы или даже годы после наступления сероконверсии (так называемые хронические IgМ). Кроме того, выявление IgМ может дать ложнопозитивные результаты, например, вследствие вторичной инфекции (экзогенная реинфекция или эндогенная реактивация инфекции). Было показано, что специфические IgА также могут присутствовать в сыворотке периферической крови через 2-3,5 года с момента зарегистрированной сероконверсии. Серологическая диагностика, основанная на определении титра специфических иммуноглобулинов класса G (IgG) может быть полезной при дифференциации активного периода болезни от перенесенной в прошлом и уже неактивной инфекции. Однако этот метод имеет ряд ограничений:

  • — не позволяет дифференцировать первичную и реинфекцию;
  • — у пациентов с реактивацией хронического процесса не всегда наблюдается достоверный рост уровня IgG;

Для того, чтобы установить точный момент инфицирования и разграничивать первичную, реинфекцию или реактивацию инфекционного процесса, в 1988г. был предложен тест на определение авидности IgG антител.

Первичный иммунный ответ на ранее невстречаемые организмом антигены начинается с продукции иммуноглобулинов класса М. Специфические IgG появляются позже. При первичном иммунном ответе они сменяют ранние антитела IgМ и накапливаются в организме в больших количествах.

Под воздействием антигена происходит процесс отбора и стимуляции В-клеток, что приводит к увеличению аффинности IgG антител, низкой после первого контакта с антигеном и возрастающей в течение последующих недель или месяцев (от 1 до 7). В конце первого месяца после инфицирования вариабельные участки антител становятся более специфичными по отношению к антигену, и аффинность IgG антител возрастает. Этот процесс называют «созреванием» антител.

Уровень авидности пропорционален дозе и природе антигена, а также индивидуальному уровню соматических мутаций. Низкие дозы антигена приводят к более быстрому возрастанию авидности, а высокие дозы — к более медленному. Таким образом, низкоавидные антитела продуцируются в течение первой стадии инфекции, когда содержание антигенов обычно высокое.


Выявление в испытуемой сыворотке антител с индексом авидности ниже 30-50% указывает на «свежую» первичную инфекцию. Показатель авидности, равный или превышающий 50%, свидетельствует о наличии в сыворотке высокоавидных антител — маркеров перенесенной в прошлом инфекции или персистирующей инфекции. Показатель авидности антител в интервале 31-49% может свидетельствовать о поздней стадии первичной инфекции или недавно перенесенной инфекции только при условии выявления антител в высокой концентрации. Таким образом, если в исследуемой сыворотке крови при наличии или отсутствии IgМ, обнаруживаются IgG с низкой авидностью, то это свидетельствует о первичной (недавней) инфекции. Наличие же высокоавидных антител IgG говорит о вторичном иммунном ответе в случае попадания возбудителя в организм или обострения (реактивации).

6. ПЦР-диагностика.

В настоящее время наиболее быстро развивается так называемая диагностика методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Это изящный метод, имитирующий естественную репликацию ДНК и позволяющий обнаружить единственную специфическую молекулу ДНК в присутствии миллионов других молекул. Суть метода заключается в многократном копировании (амплификации) в пробирке определенных участков ДНК в процессе повторяющихся температурных циклов. На каждом цикле амплификации синтезированные ранее фрагменты вновь копируются ДНК-полимеразой. Благодаря этому происходит многократное увеличение количества специфических фрагментов ДНК, что значительно упрощает дальнейший анализ. В отличии от ИФА, который широко используется для диагностики инфекционных заболеваний, ДНК- диагностика позволяет определить непосредственно возбудителя заболевания.

Кроме того, для оценки количества ДНК-мишени, в реакционной смеси используют специальные подходы, известные под общим названием количественного ПЦР-анализа. Для проведения количественного анализа используют специальные ДНК-амплификаторы с оптической насадкой (амплификаторы с детекцией в реальном времени), позволяющих детектировать флуоресценцию внутри реакционной пробирки. С помощью усовершенствованных схем постановки ПЦР можно выявлять патогенные микроорганизмы в очень низкой концентрации.

Таким образом, ПЦР – метод высокой точности в области диагностирования инфекций, вирусных болезней в любой стадии (острой или хронической), а также — на раннем этапе — до очевидных проявлений болезни путем идентификации возбудителей, на основе их ДНК, РНК, являющихся генетическим материалом, в пробах, которые получают от пациента.

Следует подчеркнуть, что диагностика инфекционных заболеваний должна заключаться в использовании одновременно нескольких методов, поскольку отрицательный результат лабораторной диагностики не может полностью исключить диагноз.

На базе клинико-иммунологической лаборатории ГУЗ «Липецкий областной Центр по профилактике и борьбе со СПИД и инфекционными заболеваниями» проводится диагностика инфекционных заболеваний различными методами исследования, что позволяет в наиболее короткие сроки поставить точный диагноз и своевременно начать лечение, а следовательно, избежать осложнений перенесенной инфекции.

зав. КИЛ Филонюк Н.В., биолог КИЛ Спирина Е.Н.

Кожно – аллергические пробы, их использование в диагностике инфекционных заболеваний. Аллергены для постановки проб, их получение.

АЛЛЕРГИЧЕСКИЕ ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ПРОБЫ — методы диагностики аллергических заболеваний и болезней, в патогенезе к-рых ведущую роль играет аллергия.

Аллергические диагностические пробы проводят после того, как путем тщательного сбора анамнеза выявлен круг подозреваемых аллергенов. Их выполняют вне фазы обострения заболевания и не ранее чем через 2-3 нед. после перенесенной острой аллергической реакции, т. к. чувствительность организма к аллергену в течение этого времени снижается (так наз. рефрактерный период).

Различают кожные и провокационные А. д. п. Кожные пробы основаны на выявлении специфической сенсибилизации организма путем введения аллергена через кожу. При этом оценивают величину и характер развивающейся воспалительной реакции. Различают качественные и количественные кожные пробы. С помощью качественных кожных проб определяют наличие или отсутствие сенсибилизации к данному аллергену. Эти пробы используют при диагностике аллергических, а также нек-рых инфекционных (туберкулез, бруцеллез и др.) и паразитарных (гельминтозы) болезней. Количественные кожные пробы позволяют получить представление о степени сенсибилизации организма. С их помощью определяют ту минимальную концентрацию специфического аллергена, при к-рой он вызывает в сенсибилизированном организме видимую аллергическую реакцию. Этот метод называется аллергометрическим титрованием. Его проводят для установления дозы аллергена, с к-рой можно начинать специфическую гипосенсибилизацию — снижение уровня сенсибилизации путем введения в организм аллергена.

В зависимости от методики проведения кожные пробы могут быть прямыми и непрямыми. При прямых кожных пробах аллерген непосредственно контактирует с кожей больного в результате повреждения эпидермиса при введении (укол, царапина, внутрикожное введение). При капельных и аппликационных кожных пробах аллерген (обычно лекарственный препарат или вещество) наносят на неповрежденную кожу в виде капли или аппликации. Ответная кожная реакция считается положительной при появлении гиперемии, инфильтрации или волдыря. Она может возникнуть в течение 20 мин (немедленная реакция), через 6-12 ч (реакция переходного типа), через 24-48 ч (замедленная реакция). Тип ответной кожной реакции зависит от характера иммунол. механизма аллергической реакции (см. Аллергия). Степень чувствительности кожных проб различных видов увеличивается в следующем порядке: капельная, аппликационная, укол, скарификационная, внутрикожная.

Выбор вида кожной пробы зависит от заболевания, предполагаемой степени чувствительности, характера аллергена, а также от реактивности кожи. Прием нек-рых лекарственных препаратов (антигистаминных, седативных средств) резко уменьшает реактивность кожи, поэтому перед специфическим аллергол. обследованием необходимо в течение 5-7 дней воздержаться от приема этих лекарственных препаратов.

К непрямым кожным пробам относится реакция Прауснитца-Кюстнера, при к-рой сыворотку крови больного вводят внутрикожно здоровому человеку и после фиксации антител в коже реципиента (через 24 ч) в то же место вводят аллерген. По развитию местной кожной реакции судят о наличии антител-реагинов в исследуемой сыворотке. Данная реакция не исключает возможности переноса с сывороткой крови возбудителя при наличии скрытой инфекции у донора, поэтому применение ее ограничено.

В диагностике аллергических болезней нельзя полностью полагаться на кожные пробы и переоценивать их результаты. Постановка кожных проб и оценка их результатов должны проводиться только специально обученным медперсоналом в специализированных аллергол. кабинетах.

При несоответствии данных аллергол. анамнеза и результатов кожных проб в период ремиссии проводят провокационные пробы. Эти пробы основаны на воспроизведении аллергических реакций введением аллергена в орган или ткань, поражение к-рых является ведущим в картине заболевания. Различают конъюнктивальные, назальные и ингаляционные провокационные пробы. Конъюнктивальная провокационная проба проводится путем закапывания аллергена в нижний конъюнктивальный мешок. При появлении гиперемии конъюнктивы, слезотечения и зуда век реакция считается положительной. При назальной провокационной пробе, к-рую проводят при аллергических ринитах и поллинозах, испытуемый аллерген закапывают в одну половину носа, а в другую — контрольную жидкость. При появлении на стороне закапывания аллергена затрудненного носового дыхания и зуда реакция считается положительной. Ингаляционный провокационный тест применяют с целью этиологической диагностики бронхиальной астмы: с помощью аэрозольного распылителя вдыхают через рот р-р аллергена. В случае снижения более чем на 15% жизненной емкости легких реакция считается положительной.

К провокационным пробам относятся также холодовая и тепловая пробы, применяемые при холодовой и тепловой крапивнице.

Экспозиционная провокационная проба проводится при отсутствии четких признаков заболевания. Она основана на непосредственном контакте больного с подозреваемым аллергеном в той среде, в к-рой больной обычно находится. Противоположной ей является элиминационная проба — исключение из пищевого рациона предполагаемого аллергена, перевод больного, страдающего бытовой аллергией, в так наз. безаллергенную палату и др. Лейкоцитопеническую и тромбоцитопеническую провокационные пробы применяют в диагностике пищевой и лекарственной аллергии. В основе этих проб лежит снижение числа лейкоцитов и тромбоцитов в крови после введения больному испытуемого аллергена.

Характеристика возбудителя сибирской язвы. Патогенез различных форм заболевания (кожной, легочной и кишечной). Принципы лабораторной диагностики сибирской язвы. Использование реакции термокольцепреципитации по Асколи. Препараты для специфической профилактики и лечения.

Характеристика возбудителя. Возбудитель сибирской язвы – Bacillus anthracis относится к отделу Fermicutes, сем. Васillaсеае. Морфология: крупные неподвижные (нет жгутиков) палочки с обрубленными концами, которые расположены в цепочку, в внешней среде образуют центральную спору, в организме человека и животных образуют капсулу. Тинкториальные свойства: грам «+».

Культуральные свойства: аэробы, хорошо растут на простых питательных средах. В МПБ растут в виде комочка ваты на дне, МПБ — прозрачный. На МПА — колонии в R-форме, крупные, напоминающие львиную гриву. Разжижают желатин в виде опрокинутой елочки. Характер роста на средах имеет диагностическое значение. Биохимические свойства выражены хорошо. Разлагают глюкозу, лактозу и мальтозу до кислоты. Свертывают молоко.

Антигенная структура: возбудитель имеет 3 антигена: О-антиген (общий для всего рода), К-антиген (защищает от фагоцитоза) и протективный антиген (обладает иммунизирующим действием).

Факторы патогенности: образует экзотоксин, компоненты которого вызывают отек и некроз тканей. Большая роль в вирулентности принадлежит капсуле.

Резистентность: вегетативные формы сибиреязвенных палочек малоустойчивы, зато споры — очень устойчивы, выдерживают кипячение 5-7 минут, в почве могут сохраняться десятки лет.

Эпидемиология сибирской язвы. Сибирской язвой болеют многие животные: овцы, коровы, лошади, олени, верблюды, свиньи. Животные заражаются при поедании травы, зараженной спорами сибиреязвенной палочки и через укусы насекомых-слепней. Заболевшие животные погибают от септицемии. Длительная сохраняемость возбудителя в почве — причина эндемичных заболеваний среди животных.

Источник инфекции: больные животные.

1) контактно-бытовой — при уходе за животными, снятии шкуры, при изготовлении предметов и изделий и их использовании (изделия из кожи, шерсти — полушубки, меховые рукавицы, шапки, воротники, кисточки для бритья, шерстяные платки, шарфы и т.д.);2) пищевой (алиментарный) — при употреблении мяса больных животных; 3) воздушно-капельный — при вдыхании пыли и др. со спорами;

4) трансмиссивный — через укусы кровососущих насекомых.

Восприимчивость людей всеобщая. Больной человек не заразен для окружающих. Уровены заболеваемости среди людей зависит от распространения эпидемии среди животных. Заболевание часто носит профессиональный характер и наблюдается у рабочих животноводческих ферм и кожевенных заводов.

Патогенез и клиника.

Входные ворота: кожа, слизистые оболочки дыхательных путей, пищеварительный тракт. Основной патогенетический фактор — экзотоксин, который вызывает отек, некроз тканей и другие повреждения.

Инкубационный период от нескольких часов до 8 дней. Различают 3 формы сибирской язвы: 1) кожная форма; 2)кишечная форма; 3) легочная форма. Чаще бывает кожная форма — 65% случаев. Вначале на коже образуется красное пятно, потом сибиреязвенный карбункул, он вскоре покрывается буро-черной коркой, напоминающий уголь — антрацит, он почти безболезненный. Болезнь может длиться от недели до месяца. Больные, как правило, выздоравливают. Кишечная и легочная сибирская язва — очень тяжелые формы заболевания. Развиваются интоксикация и геморрагические поражения кишечника и легких. Летальность высокая.

Иммунитет: формируется стойкий иммунитет. Возможны рецидивы.

Лабораторная диагностика. Исследования проводят в специальных лабораториях.

Исследуемый материал: содержимое карбункула. Кровь, мокрота, испражнения, моча, трупный материал.

1) бактериоскопический метод — из исследуемого материала готовят мазок, красят по Граму или Бурри-Гинсу для выявления капсулы;

2) бактериологический метод — делают посев материала на среды для получения чистой культуры и проводят ее идентификацию, нередко применяют фагодиагностику (в отличие от антракоидов, сибиреязвенные палочки на кровяном агаре не дают гемолиза);

3) биологический метод — исследуемым материалом заражают морских свинок или белых мышей подкожно или внутрибрюшинно, животные погибают на 2-3 день; 4) серологический метод — ставят реакцию кольцепреципитации по Асколи с целью обнаружения сибиреязвенного антигена в сырье (коже, шерсти, трупном материале), из которого трудно выделить чистую культуру (для этого: а)материал подвергают кипячению в физ. растворе, фильтруют и получают преципитиноген; б) в преципитационную пробирку наливают преципитирующую сибиреязвенную сыворотку, на нее наслаивают преципитиноген; в) при положительной реакции на границе двух жидкостей появляется белое, мутное кольцо, что говорит о соответствии антигена антителам сыворотки, т.е. о наличии белков возбудителя сибирской язвы в материале); 5) кожно-аллергическая проба с антраксином — внутрикожное введение аллергена.

Лечение. Антибиотики: пенициллин, тетрациклин, стрептомицин, рифампицин, а также противосибиреязвенный γ-глобулин.

для специфической профилактики применяют живую сибиреязвенную вакцину — СТИ, представляющую собой споровую культуру бескапсульного варианта сибиреязвенных бацилл. Прививают работников животноводства в населенных пунктах, неблагополучных по сибирской язве. Для экстренной профилактики (если человек заразился) вводят сибиреязвенный иммуноглобулин и пенициллин.

Общая профилактика: своевременное выявление и лечение больных животных, проведение тщательной дезинфекции помещений для скота, захоронение погибших животных в специальных скотомогильниках на глубину не менее 2 м.


Микробиологическая диагностика инфекционных болезней

Микробиологические (бактериологические, микологические, вирусологические) методы основаны на выделении чистой культуры возбудителя и ее последующей идентификации на основании морфологических, культуральных, биохимических, антигенных (серологических) и других признаков. Располагая чистой культурой бактерий, можно определить их родовую и видовую принадлежность, факторы патогенности, а также чувствительность к антибиотикам и химиотерапевтическим препаратам.

Микологические исследования осуществляются реже, чем бактериологические, поскольку микроскопическая диагностика микозов достаточно надежна. Микологические исследования проводят при диагностике кандидозов путем определения нарастания количества клеток дрожжеподобных грибов рода Candida, а также глубоких микозов.

Лабораторная диагностика инфекционных заболеваний проводится в трех основных направлениях:

1) поиски возбудителя заболевания в материале, взятом у больного (испражнения, моча, мокрота, кровь, гнойное отделяемое и др.);
2) обнаружение специфических антител в сыворотке крови — серологическая диагностика;
3) выявление повышенной чувствительности организма человека к возбудителям инфекционных заболеваний — аллергический метод.

Для выявления возбудителя инфекционного заболевания и его идентификации (определения вида возбудителя) используют три метода: микроскопический, микробиологический (бактериологический) и биологический.

Микроскопический метод позволяет обнаружить возбудителя непосредственно в материале, взятом у больного. Этот метод имеет решающее значение при диагностике гонореи, туберкулеза, заболеваний, вызываемых простейшими: малярии, лейшманиозов, балантидиаза, амебиаза. Возможности микроскопического метода при этих инфекциях обусловлены значительными морфологическими различиями возбудителей данных заболеваний. Особенности морфологии возбудителей играют основную роль в постановке диагноза. Однако микроскопический метод не позволяет поставить диагноз при таких инфекциях, как, например, брюшной тиф и паратифы, дизентерия, потому что различить их возбудителей по морфологическим признакам невозможно (все они грамотрицательные палочки). Для того чтобы различить сходные между собой по морфологии микроорганизмы, их надо получить в чистой культуре и идентифицировать, что можно сделать с помощью микробиологического (бактериологического) метода исследования.

Микробиологический метод заключается в посеве исследуемого материала на питательные среды, выделении чистой культуры возбудителя и его идентификации. Определение вида и типа возбудителя производят по ряду признаков: морфологии, способности окрашиваться различными красителями (тинкториальные свойства), характеру роста на искусственных питательных средах (культуральные свойства), ферментации углеводов и белков (биохимические свойства). Окончательную принадлежность выделенной культуры к определенному виду (типу) микроорганизмов устанавливают после изучения антигенной структуры, используя различные иммунологические реакции (агглютинации, преципитации, нейтрализации и др.).

Если возбудители инфекционных заболеваний (риккетсии, вирусы, некоторые простейшие) не растут на искусственных питательных средах или необходимо выделить возбудителя из микробных ассоциаций, то используют метод заражения восприимчивых животных биологический.

Биологический метод осуществляют путем выделения возбудителя заболевания или его токсина при заражении лабораторных животных, восприимчивых к данному заболеванию. Диагноз устанавливают по воспроизведению у животного типичной картины заболевания и по выделению чистой культуры возбудителя из различных органов путем посева на питательные среды в случае заражения животного микробными ассоциациями. Идентификацию выделенного возбудителя проводят до вида (типа), используя бактериологический метод. Биологический метод используют также при определении вирулентности возбудителей.

Серологические методы диагностики инфекционных заболеваний основаны на выявлении специфических иммунных антител в сыворотке крови больного. Для этого используют различные иммунологические реакции: реакцию агглютинации при брюшном тифе (Видаля), реакцию Райта при бруцеллезе, реакцию связывания комплемента (Вассермана) при сифилисе, реакцию непрямой гемагглютинации при многих инфекционных заболеваниях, реакцию нейтрализации и торможения гемагглютинации при вирусных заболеваниях.

Аллергический метод позволяет поставить диагноз инфекционного заболевания с помощью аллергических проб — накожных и внутрикожных. Метод выявляет повышенную чувствительность замедленного типа, возникающую в организме при многих инфекционных заболеваниях. Введение аллергена накожно или внутрикожно используют для диагностики бруцеллеза, туляремии, токсоплазмоза и других заболеваний.

Для того чтобы правильно поставить диагноз инфекционного заболевания, чаще всего используют комплекс всех лабораторных методов: выделение возбудителя, определение антител в крови больного и выявление повышенной чувствительности замедленного типа.

Вирусологический метод является наиболее достоверным в диагностике вирусных инфекций. Однако его трудоемкость, связанная с приготовлением культуры клеток, обработкой исследуемого материала, а также со сравнительно частым получением отрицательных результатов, ограничивают применение данного метода. Кроме того, он требует затраты сравнительно большого времени, особенно при проведении «слепых» пассажей. Во многих случаях вирусологический метод используют для ретроспективной диагностики вирусных инфекций.

Все микробиологические методы имеют определяющее значение в лабораторной диагностике, являются наиболее информативными и достоверными, особенно если они подтверждены дополнительными серологическими данными.

Глава 5 Учение об иммунитете

§ 1. Понятие об иммунитете

Еще в древние времена было замечено, что человек, который перенес инфекционное заболевание, становится к нему невосприимчивым и повторно не болеет. В средние века людей, переболевших чумой, холерой, привлекали к уходу за больными или к захоронению умерших. Впервые английский врач Э. Дженнер использовал искусственное заражение человека для предохранения его от заболевания оспой. Затем Л. Пастер предложил прививки против бешенства и сибирской язвы. Изучение явлений иммунитета позволило создать вакцины, получить лечебные сыворотки и гамма-глобулины.

В процессе эволюции у человека сформировалась специальная система защиты организма от чужеродных веществ и микроорганизмов, вызывающих заболевания. Эта система называется иммунной системой. Она представлена лимфо-идной тканью и выполняет функции специального надзора, т.е. распознает чужеродные вещества, генетически чуждые макроорганизму. Чужеродные агенты, попадающие в наш организм, называются «антигенами». К ним относятся вещества белковой природы; соединения белков липидов и полисахаридов, микробы и их токсины; вирусы и т. д. А невосприимчивость организма к чужеродным веществам (антигенам) называется «иммунитетом» (от лат. Immunitas — освобождение, избавление от чего-либо).

Иммунный надзор играет важную роль в нормальном функционировании организма, предохраняет от различных болезней инфекционной и неинфекционной природы.

Изучением функционирования иммунной системы, а также разработкой средств и методов иммунологической диагностики, профилактики и лечения инфекционных и неинфекционных болезней занимается иммунология — наука об иммунитете. Иммунология как наука сформировалась лишь в конце XIX в. Основоположниками ее можно считать И.И. Мечникова, Л. Пастера и П. Эрлиха.

Существуют различные классификации видов и форм иммунитета. Наиболее простая классификация:

1) естественный иммунитет:

а) врожденный иммунитет; б) приобретенный иммунитет; в) пассивный иммунитет новорожденных;

2) искусственный иммунитет:

а) активный иммунитет; б) пассивный иммунитет.

1. Естественный врожденный иммунитет является наиболее прочной формой невосприимчивости, которая обусловливается врожденными, биологическими особенностями данного вида. Например, человек не болеет чумой рогатого скота или куриной холерой. Животные не болеют заболеваниями человека: дифтерией, сифилисом и др. Эти свойства невосприимчивости к тем или иным заболеваниям передаются потомству по наследству. Поэтому мы говорим о врожденном иммунитете.

Естественный приобретенный иммунитет возникает после того, как человек перенес инфекционную болезнь, поэтому этот иммунитет также называют постинфекционным. Приобретенный иммунитет индивидуален и по наследству не передается. Если человек в детстве переболел эпидемическим паротитом (свинкой), то это не значит, что его дети не будут болеть этим заболеванием. Длительность приобретенного иммунитета различна и зависит от вида возбудителя. Например, после перенесения одних заболеваний в организме человека образуется длительный, пожизненный иммунитет (чума, эпидемический паротит, коклюш, туляремия и др.), а после перенесения других заболеваний остается непродолжительный, кратковременный иммунитет. Такими инфекциями человек может болеть несколько раз (грипп А, гонорея, ангина и др.).

Невосприимчивость к инфекции возникает не только при выраженной форме заболевания, но и при бессимптомных формах течения болезни.

Пассивный иммунитет новорожденных обусловлен передачей особых защитных веществ-антител — из организма матери плоду через плаценту или ребенку через грудное молоко. Продолжительность такого иммунитета невелика, всего несколько месяцев, но его роль для здоровья ребенка очень важна. Уже точно доказано, что дети, находящиеся на грудном вскармливании, болеют гораздо реже, чем те, которые вскармливаются искусственно.

2. Искусственный иммунитет — его создают в организме человека искусственным путем, чтобы предупредить возникновение инфекционной болезни, а также используют для лечения инфекционных болезней. Различают активную и пассивную формы искусственного иммунитета: активный иммунитет создают у человека путем введения вакцин или анатоксинов. Активный иммунитет может быть напряженным и длительным. Пассивный иммунитет создается путем введения в организм человека иммунных сывороток, в которых содержатся иммунные антитела. Пассивный иммунитет сохраняется недолго, около месяца, до тех пор, пока сохраняются антитела в организме. Затем антитела разрушаются и выводятся из организма. В зависимости от локализации иммунитет может быть общим и местным. Местный иммунитет осуществляет защиту кожных покровов и слизистых оболочек, а общий иммунитет обеспечивает иммунную защиту внутренней среды организма человека. Деление иммунитета на различные виды и формы очень условно, так как защиту организма осуществляют одни и те же системы, органы и ткани. Их функция направлена на то, чтобы поддерживать в организме постоянное нормальное состояние. Защитные факторы, которые обусловливают невосприимчивость человека к заболеваниям, могут быть специфическими и неспецифическими.

§ 2. Неспецифические факторы защиты

Неспецифические факторы защиты врожденные и лишены избирательности, так как действуют на любой микроорганизм.

К первичным барьерам неспецифических факторов защиты относятся:

1. Кожа — покрывает все тело и механически защищает организм от проникновения микробов, вирусов и т.д. На коже также имеются потовые и сальные железы, которые вырабатывают молочную и жирные кислоты. Известно, что кислая среда губительно действует на микроорганизмы. Если на поверхность чистой кожи нанести микробы, то через 30 мин они погибнут. Грязная кожа обладает сниженными бактерицидными свойствами, поэтому мытье рук и тела является важным условием сохранения защитной роли кожи.

2. Слизистые оболочки носоглотки, дыхательных путей, кишечника обладают еще более выраженными защитными свойствами, чем кожа. В слезах, слюне обнаружен лизоцим, который растворяет многие сапрофитные микробы, а также некоторые патогенные. Известно, что в слюне у собак лизоцима содержится в 100 раз больше, чем у человека. Поэтому слюна собак является более бактерицидной. Эпителий слизистых путей также механически препятствует проникновению микроорганизмов, эту роль выполняет слизь и реснитчатый эпителий, освобождающие слизистые оболочки от попавших на них частичек. В желудочно-кишечном тракте защитную роль выполняют соляная кислота желудочного сока, которая убивает микроорганизмы. Еще в древние времена люди знали об этом свойстве, поэтому врач никогда не приходил к больному на «голодный» желудок.

3. Нормальная микрофлора организма человека обладает антагонистическим действием к различным видам микроорганизмов. Она препятствует их размножению и проникновению в организм. Например, кишечная палочка вырабатывает молочную кислоту, которая оказывает губительное действие на бактерии. Если микроорганизмы преодолевают эти барьеры, то в работу вступают вторичные барьеры неспецифических факторов защиты. К ним относятся:

1) гуморальные факторы — система комплемента. Комплемент — это комплекс 26 белков в сыворотке крови. Обозначается каждый белок, как фракция, латинскими буквами: С4, С2, СЗ и т. д. В условиях нормы система комплемента находится в неактивном состоянии. При попадании антигенов он активируется, стимулирующим фактором является комплекс антиген — антитело. С активации комплемента начинается любое инфекционное воспаление. Комплекс белков комплемента встраивается в клеточную мембрану микроба, что приводит к лизису клетки. Также комле-мент участвует в анафилаксии и фагоцитозе, так как обладает хемотаксической активностью. Таким образом, комплемент является компонентом многих им-мунолитических реакций, направленных на освобождение организма от микробов и других чужеродных агентов;

2) клеточные факторы защиты.

Фагоциты. Фагоцитоз (от греч. phagos — пожираю, cytos — клетка) впервые открыл И. И. Мечников, за это открытие в 1908 г. он получил Нобелевскую премию. Механизм фагоцитоза состоит в поглощении, переваривании, инактивации инородных для организма веществ специальными клетками-фагоцитами. К фагоцитам Мечников отнес макрофаги и микрофаги. В настоящее время все фагоциты объединены в единую фагоцитирующую систему. В нее включены: промоноциты — вырабатывает костный мозг; макрофаги — разбросаны по всему организму: в печени они называются «купферовские клетки», в легких — «альвеолярные макрофаги», в костной ткани — «остеобласты» и т. д. Функции клеток-фагоцитов самые разнообразные: они удаляют из организма отмирающие клетки, поглощают и инактивируют микробы, вирусы, грибы; синтезируют биологически активные вещества (лизоцим, комплемент, интерферон); участвуют в регуляции иммунной системы.

Выявление аллергии


В диагностике аллергических заболеваний огромная роль принадлежит выяснению этиоогически значимого аллергена. К настоящему времени спектр определяемых аллергенов очень широк. Ниже нами представлена лишь часть из известных и клинически значимых аллергенов.

Аллергены.
Аллергенами называют антигены и гаптены, которые способны вызвать аллергическую реакцию.
Выдляют две большие группы аллергенов: неинфекционные и инфекционные.
К неинфекционным аллергенам относятся: пыльцевые, пищевые, бытовые, эпидермальные, инсектные, лекарственные и промышленные аллергены.
Пыльцевые аллергены.
Это аллергены растительного происхождения, вызывающие поллиноз. Аллергенность пыльцы обусловлена белками, входящими в ее состав. Выделяют несколько групп пыльцевых аллергенов:
1) аллергены пыльцы злаковых трав: тимофеевки, ежи сборной, лисохвоста, пырея, райграса, овсяницы и других;
2) аллергены пыльцы культурных злаков: овса, пшеницы, ячменя, ржи, кукурузы;
3) аллергены пыльцы культивируемых растений: сахарной свеклы, клевера, щавеля, подсолнечника и т.д.;
4) аллергены пыльцы деревьев: дуба, клена, ольхи, орешника, березы, тополя, осины, сосны, ели, липы и т.д.;
5) аллергены пыльцы сорняков: одуванчика, амброзии, подорожника, крапивы, полыни, лебеди и т.д.;
6) аллергены пыльцы фруктовых деревьев: яблони, вишни, груши и т.д.;
7) аллергены пыльцы садовых цветов: маргаритки, розы, тюльпанов, нарциссов, лилий и т.д.

Пищевые аллергены.
Ими могут быть любые продукты питания или вещества, образующиеся при их переваривании, кулинарной обработке или длительном хранении. Пищевые аллергены делят на две большие группы:
1) облигатные аллергены 1 группы: кофе, какао, шоколад, цитрусовые, клубника, земляника, куриные яйца, мясо курицы, мед, рыба, икра, крабы, раки;
2) облигатные аллергены 2 группы : молоко, морковь, свекла, томаты, гречневая крупа и т.д.

Бытовые аллергены .
Это аллергены домашней пыли, пера подушки и библиотечной пыли.
Аллерген домашней пыли очень разнообразен по своему составу. В него входят вещества животного, растительного происхождения, продукты жизнедеятельности грибов, насекомых, бактерий. Основной составной частью домашней пыли являются клещи из рода
Dermatophagoides, которые особенно активно размножаются в октябре и в марте-апреле.

Эпидермальные аллергены.
Они могут входить в состав домашней пыли и иметь самостоятельное значение в развитии клинической картины аллрегических заболеваний. К ним относятся: перхоть человека, лошади, свиньи; шерсть собаки, кошки, кролика, морской свинки, мыши, овцы, козы и т.д.

Инсектные аллергены.
Это аллергены насекомых , которые находятся в их слюне, яде и теле. Аллергическая реакция возникает при ужалении перепончатокрылых; укусах двукрылых и клопов; при контакте с выделениями и частями тел чешуйчатокрылых.

Лекарственные аллергены.
Это химические, ферментные препараты и продукты грибкового синтеза. Лекарственные препараты — это в основном гаптены, которые становятся истинными аллергенами только при кон,югации с белком-носителем.

Промышленные аллергены.
Это химические и биологические загрязнения среды. Среди химических веществ аллергенами являются: металлы и их соли, пестициды, синтетические полимеры. Они вызывают профессиональные аллергические заболевания.

К инфекционным аллергенам относятся аллергены бактерий, вирусов, грибов, простейших и гельминтов.
Бактериальные аллергены.
Ими могут быть различные составные части бактериальной клетки. Поскольку структура бактериальной клетки сложна и до сих пор остается неясным, какие вещества являются преимущественно аллергенами, то аллергенность отдельных компонентов бактерий может различаться у разных больных.

Вирусные аллергены.
Аллергены вирусов вызывают аллергию замедленного и немедленного типов. Аллергия к вирусам определяется внутрикожным тестированием и тестированием in vitro.
Грибковые аллергены.
В мире известно огромное количество видов грибов, которые способны сенсибилизировать организм человека. Однако стандартные аллергены изготавливают только из 100 видов грибов.

Аллергены гельминтов.
Это аллергены аскарид, эхинококка, трихинелл. Наиболее аллергенны продукты их личинок по сравнению со взрослой особью.

Методы диагностики in vivo.
К методам диагностики аллергических заболеваний in vivo относятся:
1. Аллергологический анамнез.
2. Кожные пробы.
3. Провокационные тесты.

При сборе анамнеза у детей необходимо в первую очередь уделять внимание следующим факторам:
1. Характеру течения антенатального периода с целью определения возможной внутриутробной сенсибилизации.
2. Наличию внутриутробной гипоксии , что может способствовать ранней сенсибилизации плода.
3. Характеру вскармливания ребенка и диете кормящей матери.
4. Времени введения докормов, прикормов, соков и их объему и кратности.
Анализируя анамнез, важно уточнить время возникновения заболевания, что предположительно может указать на этиологически значимый фактор, а именно: в возрасте 2-3 лет у детей преобладает пищевая аллергия, затем присоединяется бытовая, а к 5-7 годам — пыльцевая, бактериальная.
Таким образом, на первом этапе диагностики можно не только установить нозологическую форму заболевания, но и предположить его этиологию.

Кожные пробы.
Выделяют следующие виды кожных проб:
1. Накожные (капельные, аппликационные и др.).
2. Скарификационные.
3. Тест-уколом (prik-тест).
4. Внутрикожные.
Выбор кожной пробы зависит от предполагаемой этиологии заболевания, степени сенсибилизации больного и стадии процесса.
Показаниями для проведения кожных проб являются данные анамнеза, указывающие на роль того или иного аллергена или группы аллергенов в генезе заболевания.
Противопоказаниями для кожного тестирования являются:
1) острая фаза аллергического заболевания;
2) обострение сопутствующих хронических заболеваний;
3) острые интеркурентные инфекционные заболевания;
4) туберкулез и вираж туберкулиновых проб;
5) декомпенсированные состояния при болезнях сердца, печени, почек;
6) заболевания крови, онкозаболевания, системные и аутоиммунные заболевания;
7) период лечения антигистаминными препаратами и мембраностабилизаторами, гормонами, бронхоспазмолитиками;
8) судорожный синдром, нервные и психические болезни;
9) беременность, кормление ребенка грудью, первые 2-3 дня менструального цикла;
10) возраст до 3 лет;
11) анафилактический шок, синдромы Лайела, Стивенса-Джонсона в анамнезе.

Накожные пробы:
1. Капельная проба.
Используется при высокой сенсибилизации, особенно к химическим веществам и иногда к лекарствам.
Техника постановки: на обезжиренную сгибательную поверхность кожи предплечья наносят каплю аллергена и параллельно, в качестве контроля, каплю растворителя. Оценивают через 20 минут.

2. Аппликационная проба.
Используется для диагностики профессиональной аллергии, контактных дерматитов.
Техника постановки: на сгибательную поверхность предплечья, предварительно обработанную 700 спиртом, наносят марлечку, смоченную в растворе аллергена и параллельно марлечку с растворителем. Оценивают через 30 минут.

3.Скарификационные кожные пробы.
С их помощью выявляют причинно-значимый аллерген и степень сенсибилизации к нему. Их проводят со всеми неинфекционными аллергенами. Одновременно можно поставить не более 10-15 проб, причем при высокой сенсибилизации количество аллергена одного наименования ограничено (4-5 серий д/п).
Техника постановки:
Кожу сгибательной поверхности предплечья обрабатывают 70 спиртом, затем наносят отдельными шприцами по капле гистамина 0,01%, аллергенов и тест контрольной жидкости на расстоянии 4-5 см друг от друга. Стерильными скарификаторами проводят отдельно через каждую каплю по 2 параллельные царапины длиной 4-5 мм и расстоянием между ними 2 мм.
У детей до пяти лет можно проводить по одной царапине. Царапины проводят поверхностно, нарушая только целостность эпидермиса, не травмируя кровеносные сосуды. Через 10 минут осторожно промокают каждую каплю отдельным ватным тампоном, еще через 10 минут оценивают пробы.
Обязательным условием является отрицательный результат с тест контрольной жидкостью и положительный с гистамином.
При оценке скарификационного кожного тестирования следует учитывать возможность появлния ложноположительной реакции на тест-контрольную жидкость. Это бывает в тех случаях,когда имеется повышенная чувствительность кожных покровов к механическому воздействию, а также в случае возникновения реакции на компоненты , входящие в тест-контрольную жидкость (фнол).
Ложноположительные реакции на аллергены наблюдаются при нарушении техники постановки кожного тестирования (глубоко) и повышенной индивидуальной чувствительности кожных покровов на механическое воздействие.
Ложноотрицательные реакции на гистамин возможны при снижении индивидуальной чувствительности к гистамину, при проведении кожного тестирования в период лечения антигистаминными или гормональными препаратами. Кроме того, подобный результат можно получить при длительном хранении разведенного гистамина.

Ложноотрицательные пробы с аллергенами возможны:
1) при отсутствии полного серийного набора аллергенов одного типа (например, домашней пыли);
2) другом механизме аллергической реакции;
3) неправильном хранении аллергенов;
4) нарушении техники введения аллергена (очень поверхностно);
5) проведении кожного тестирования на фоне обострения аллергического или тяжелого соматического заболевания;
6) приеме антигистаминных препаратов, мембраностабилизаторов, гормонов, бронхолитиков.

Тест уколом (Prik-тест).
Этот тест проводится специальным иглодержателем, в который вставляется игла. Он позволяет регулировать глубину укола, исключает раздавливание капли при уколе. Оценка проводится так же, как и оценка скарификационных проб.
Внутрикожные пробы.
Внутрикожные пробы ставятся главным образом с инфекционными алергенами (бактериальными, грибковыми и другими), при которых скарификационная реакция очень слабая.
С неинфекционными аллергенами их проводят только тогда, когда аппликационные или скарификационные тесты отрицательны или сомнительны, а анамнез четко положительный.
Техника постановки: кожа сгибательной поверхности предплечья или кожа на спине обрабатывается 70 спиртом, затем туберкулиновым или инмулиновым шприцем вводят 0,02 мл неинфекционного аллергена или 0,05-0,1 мл инфекционного аллергена. В качестве контроля вводят внутрикожно тест-контрольную жидкость и скарификационно раствор гистамина.
Поскольку внутрикожное тестирование более чувствительно по сравнению со скарификационным, то вводимый внутрикожно аллерген должен быть в 10 раз меньшей концентрации, чем при скарификационном тестировании.
Однако внутрикожная проба менее специфична и довольно часто дает ложноположительные результаты; кроме того она может спровоцировать нежелательные осложнения. Учитывая это количество аллергенов при внутрикожном тетировании не должно превышать 4-5-ти.

Провокационные тесты.
Провокационные тесты — это более достоверный метод диагностики, позволяющий достичь контакта шокового органа с аллергеном. Их используют в случае расхождения данных анамнеза и результатов кожного тестирования.
В зависимости от вида аллергена и способа его введения в организм различают следующие провокационные тесты назальный, конъюнктивальный, ингаляционный, подъязычный, оральный.
Противопоказания для их проведения такие же, как и при кожном тестировании.

Назальный тест.
Его проводят с бытовыми, эпидермальными, пыльцевыми, бактериальными аллергенами для диагностики аллергических риносинуситов, трахеитов, бронхитов, бронхиальной астмы в стадии ремиссии.

Ингаляционный тест.
Основными показаниями для проведения ингаляционного теста являются: выявление этиологически значимых аллергенов; оценка эффективности медикаментозного лечения; выявление неспецифических факторов , вызывающих бронхоспазм; определение профессиональной пригодности пациента (выявление латентного бронхоспазма).
Проводится с бытовыми, эпидермальными, пыльцевыми, бактериальными аллергенами с 4-5-летнего возраста , при отрицательном результате назального теста или же несовпадении данных анамнеза с результатами кожного тестирования.

Подъязычная проба.
Этот тест используют для диагностики пищевой и лекарственной аллергии. Аллерген наносится на слизистую под,язычной области. При пищевой аллергии применяются натуральные продукты в разведении 1:10, при лекарственной — 1/8-1/4 разовой дозы растворенного вещества. Тест считается положительным при появлении в подъязычной области гиперемии, отека, зуда, учащения пульса, высыпаний на коже, чихания, кашля.

Оральный тест.
Этот тест используется для диагностики пищевой аллергии. В качестве аллергенов используют натуральные продукты. За 2-3 дня до проведения теста из питания исключают исследуемый продукт. Затем вводят этот продукт в рацион питания, оценивая общее состояние и состояние шокового органа. Проба считается положительной при появлении реакции со стороны шокового органа в течение 1 часа.

Методы диагностики in vitro
В настоящее время довольно широко применяются лабораторные методы диагностики аллергических заболеваний, т.к. они обладают рядом преимуществ. В частности, можно отметить ряд из них:
1) возможность проведения исследования в раннем детском возрасте (до 2-3 лет);
2) возможность проведения исследования в период обострения аллергического заболевания и у пациентов с высокой степенью сенсибилизации.
3) выявление поливалентной сенсибилизации, когда нет возможности провести тестирование in vivo сразу со всеми предполагаемыми аллергенами, а сроки обследования ограничены;
4) возможность иследования при измененной реактивности кожи (ложноположительный или ложноотрицательный результат при кожном тестировании);
5) безопасность для больного, т.к. не вызывает дополнительной сенсибилизации.
6). обследование одновременно с большим количеством лекарственных препаратов, другими химическими веществами..

В многочисленных руководствах и пособиях можно найти достаточно подробное описание тестов диагностики in vitro.
Мы ограничимся лишь кратким перечнем этих методов: радиоаллергосорбентный тест (РАСТ) для определения специфических IgE антител к различным аллергенам в сыворотке крови; метод ПРИСТ для определения общего IgE; тест Шелли (прямой, непрямой), тест дегрануляции тучных клеток (тест Шварца), ИФА, реакция лейкоцитолиза, тест повреждения нейтрофилов, РТМЛ, РБТЛ, Е-РОК с аллергенами и др.

АЛЛЕРГОЛОГИЧЕСКОГО МЕТОДА ИССЛЕДОВАНИЯ

Аллергологический метод исследования (АЛМИ) используется для выявления в организме Ат или сенсибилизированных Т-лимфоцитов к аллергену.

Задачи АЛМИ:

1) диагностика хронических инфекционных заболеваний, в патогенезе которых имеет место сенсибилизация к микробным антигенам (ГЗТ);

2) диагностика аллергических заболеваний (ГНТ);

3) разработка специфической десенсибилизирующей терапии реакций ГНТ медиаторного типа.

Этапы АЛМИ:

I этап АЛМИ. Сбор аллергологического анамнеза с целью:

1) установления наследственной предрасположенности к аллергии;

2) выявления факторов, отягощающих личный аллергологический анамнез:

– перенесенных острых заразных и инфекционных заболеваний;

– наличия в данное время или в анамнезе хронических воспалительных заболеваний (хронический тонзиллит, синусит, ринит, холецистит, колит, хронические язвы кожи, микробная экзема, фурункулёз, кожные грибковые заболевания);

– выявление пищевой аллергии, ингаляционной аллергии, инсектной аллергии, контактных дерматитов;

– получение сведений о профилактических прививках и реакциях на них;

– получение сведений о введении гетерологичных сывороток и реакциях на них;


– получение сведений о реакциях на введение антибиотиков, частоте применения антибиотиков, сведения о непереносимости других лекарств.

3) установление эффекта элиминации аллергена: связи между контактом с аллергеном и изменением состояния пациента.

Так, аллергию к клещам домашней пыли можно заподозрить при развитии обострений, связанных с уборкой помещения, работе с книгами. При смене места проживания выраженность симптомов часто уменьшается, иногда вплоть до полной клинической ремиссии, в виду отсутствия контакта с аллергенным триггером.

При аллергии на производственные аллергены наблюдается ухудшение состояния после выходных («эффект понедельника»).

При лекарственной аллергии отмечается смягчение или исчезновение симптомов аллергии после отмены препарата.

4) предположения по группе аллергена:

– связь с простудными заболеваниями у больных с инфекционно-аллергической бронхиальной астмой, аллергическим ринитом;

Так, при поллинозах связь обострения заболевания с периодом цветения растений обычно настолько очевидна, что проведение аллергологического обследования становится необходимым лишь с целью уточнения спектра аллергенов для проведения специфической десенсибилизации.

Атопический дерматит, обусловленный гиперчувствительностью к аллергенам домашней пыли и плесневых грибов, обостряется ранней весной еще до цветения растений и поздней осенью (больше времени проводится в помещении).

– наличие наследственной предрасположенности при медиаторном типе ГНТ;

5) дифференциации пищевой аллергии с парааллергией (употреблением большого количества продуктов, содержащих биологически активные амины, что имитирует патофизиологическую стадию медиаторного типа ГНТ) и идиосинкразией (непереносимостью отдельных продуктов, например, молочных, обусловленной ферментопатией).

В диагностике пищевой аллергии существенное значение имеют сведения, четко указывающие на связь обострения с приемом конкретного пищевого продукта. При этом учитывается только обострение, которое развивается во временном диапазоне от нескольких минут до 4 часов с момета употребления в пищу подозреваемого продукта.

Существенное значение для выявления пищевых аллергенов имеет установление непереносимости продуктов, сходных по антигенной структуре с подозреваемым аллергеном. Например, пациенты, имеющие аллергию на куриное яйцо, чаще всего не переносят и мясо курицы. При непереносимости коровьего молока нередко отмечается аллергия на говядину.

II этап АЛМИ. Постановка кожно-аллергических пробпредполагает введение предполагаемого аллергена в организм больного.

А. Антигены многих возбудителей обладают сенсибилизирующим действием, что используют для диагностики инфекционных заболеваний, а также при проведении эпидемиологических исследований.

Кожно-аллергические реакции при инфекционных заболеваниях появляются относительно рано (с 4–5 дня болезни), достигают наибольшей интенсивности на 2–3 неделе болезни. В зависимости от выраженности или напряженности аллергического процесса положительная реакция может сохраняться годами (напр., при бруцеллёзе) или исчезать довольно быстро, в течение нескольких недель-месяцев (напр., при дизентерии). Кожные пробы нашли применение в диагностике таких заболеваний как сап, мелиоидоз, бруцеллёз. Наиболее известна проба Манту, используемая как для диагностики туберкулёза, так и для оценки невосприимчивости организма к возбудителю (рис. 50, 51).

Кожно-аллергические пробы для диагностики ГЗТ предполагают внутрикожное введение Аг (аллергена). Аллергенные препараты готовятся специальными учреждениями – институтами вакцин и сывороток. Предполагаемый аллерген вводят внутрикожно в объёме 0,1 мл. Результат учитывают через 24–72 часа после введения аллергена по диаметру папулы (инфильтрата).

Рис. 50. Постановка пробы Манту

Рис. 51. Учет пробы Манту

Б. Кожные тесты используются при диагностике ГНТ медиаторного типа. Введенные в практику в 1911 году, кожные тесты остаются одним из самых достоверных диагностических тестов in vivo. Именно кожные тесты являлись и являются ориентиром для определения достоверности всех тестов in vitro. Кожное тестирование – ценный метод диагностики сенсибилизации, который широко используется во всех странах мира.

Для кожных тестов используют растворы аллергенов: трав, пыльцы, эпидермиса животных, яда насекомых, пищи, лекарств. Степень диагностической чувствительности кожных проб увеличивается в следующем порядке: капельная, аппликационная (накожная), укол (прик-тест), скарификационная (через царапину), внутрикожная.

Капельные пробы – аллерген наносится на неповреждённую кожу в виде капли.

Аппликационные пробы – раствором аллергена смачивают марлевый тампон и накладывают его на неповрежденный участок кожи (внутренней поверхности предплечья или спины). Затем этот участок заклеивается перфорированным лейкопластырем (рис. 52).

Рис. 52. Аппликационные пробы на коже спины

Оценка результатов проводится как в течение первого часа после нанесения на кожу аллергена (ГНТ), так и спустя 24–48 часов (ГЗТ). Оцениваются гиперемия кожи, зуд, отечность, мокнутие в месте нанесения вещества. Аппликационные тесты незаменимы для оценки индивидуальной переносимости различных наружных средств для лечения и ухода за кожей.

Скарификационные пробы – на чистую кожу предплечья наносят капли аллергенов, через них одноразовым скарификатором делают небольшие царапины (рис. 53).

Рис. 53. Постановка скарификационных проб

Прик-тесты – на чистую кожу предплечья наносят капли аллергенов, через них одноразовыми иглами делают легкие уколы (на один миллиметр в глубину).

Внутрикожные тесты – разведенный 1:100 (по отношению к кожным тестам) аллерген вводят внутрикожно в кожу предплечья в объёме 0,1 мл. Внутрикожные тесты ставятся с ингаляционными аллергенами в сложных диагностических ситуациях, когда клинические данные убедительно свидетельствуют о наличии сенсибилизации, а результаты кожных тестов сомнительны. Внутрикожные тесты с пищевыми аллергенами проводить категорически запрещено из-за их чрезмерной чувствительности и возможности провокации анафилактической реакции.

Противопоказания к кожному тестированию:

– обострение текущего аллергического заболевания;

– острое инфекционное заболевание (ОРВИ, ангина и др.);

– хроническое заболевание в стадии декомпенсации;

– туберкулезный процесс любой локализации в период обострения;

– психическое заболевание в период обострения;

– длительная терапия кортикостероидами или местное их применение в области кожи, где предполагается проведение проб (отказаться за 2 недели до проведения проб);

– прием антигистаминных препаратов (отказаться за сутки до проведения проб);

– возраст старше 60 лет.

В таких ситуациях кожное тестирование запрещается или откладывается.

Кожное тестирование проводить нецелесообразно при:

– указании в анамнезе на острую реакцию к определенному аллергену (для исключения возможных анафилактических реакций);

– отсутствии подозрений на аллергическую природу заболевания;


– отказе родителей больного ребенка или самого больного от проведения тестирования;

– наличии у больного выраженного дермографизма;

– наличии у пациента инфекционных заболеваниях кожи или поражения кожи (отсутствии непораженных участков для проведения тестирования).

В этаких ситуациях кожное тестирование откладывают или используют лабораторные методы диагностики.

Аллергологические пробы проводятся в процедурном кабинете аллергологического отделения под контролем врача-аллерголога.

За один раз проводится не более 15 проб с различными аллергенами и 2 контроля. Положительный контроль содержит гистамин и указывает на то, что соблюдены все условия постановки теста. Отрицательный контроль содержит жидкость, которая не должна вызывать каких-либо кожных реакций (напр., изотонический раствор хлорида натрия). Результаты постановки кожных проб оцениваются относительно контролей. Если пациент перед проведением кожной пробы принимал антигистаминные препараты, то положительный контроль и пробы на аллергены не дадут реакции.

Положительный результат ГНТ регистрируется, если через 20 минут после контакта с аллергеном:

– наблюдаются везикула (волдырь) или эритема;

– наблюдается только эритема диаметром больше 20 мм;

– имеются признаки общей реакции (головокружение, тошнота).

При этом степень кожной реакции на аллерген оценивают по шкале от одного (+) до четырех (++++) плюсов:

+ – везикула или эритема до 3 мм;

++ – везикула или эритема до 6 мм;

+++ – везикула или эритема до 10 мм;

++++ – везикула или эритема более 10 мм.

Положительный контроль должен показать реакцию на ++ или +++, а отрицательный контроль – ничего не показать.

Рис. 54. Результаты кожных проб

Положительные результаты кожного тестирования свидетельствуют только о наличии сенсибилизации к аллергену и не являются доказательством его причинной значимости в возникновении заболевания. Аллерген, кожная проба на который положительна, можно считать причиной заболевания, только в том случае, если это совпадает с клиническими проявлениями и данными анамнеза. В то же время своевременное выявление сенсибилизации к аллергенам играет решающую роль при назначении профилактических мероприятий.

Если подозревалась аллергия на конкретный аллерген, а результат кожной пробы отрицателен, это не исключает аллергию на этот аллерген. Проба может быть повторена с другими сериями того же аллергена, так как разные серии аллергенов в зависимости от стандартизации аллергенов и индивидуальной чувствительности могут действовать по-разному. Кроме того, следует учитывать, что чувствительность кожи и слизистых оболочек (конъюнктивы глаз, слизистой носа) отличаются от друга. Поэтому при несовпадении результатов или сомнении ставят элиминационно-провокационные пробы.

Необходимость в проведении элиминационно-провокационных тестов чаще всего возникает у больных с атопическим дерматитом, так как у них наблюдаются положительные кожные пробы к множеству пищевых аллергенов, в то время как клинически значимыми обычно оказываются 1–3 пищевых продукта. Если в таких ситуациях, основываясь только на результатах кожных тестов, без проведения элиминационно-провокационного тестирования, исключить из питания множество продуктов, это будет неоправданным.

III этап АЛМИ.Постановка провокационных пробпредполагает воспроизведение симптомов аллергической реакции через принудительный контакт с аллергеном в период ремиссии.

Провокационные пробы применяют по строгим показаниям, когда имеются расхождения между данными анамнеза, результатами кожных проб и данными лабораторного обследования. При наличии аллергии на конкретный препарат, ставить провокационные тесты не рекомендуется. Провокационные пробы проводят в специализированных центрах, так как шоковая реакция возможна даже на микрограммы препарата.

Для провокационных проб могут быть использованы пероральный (пищевой), конъюнктивальный, назальный, ингаляционный или холодовой тесты. Если в ответ на введение предполагаемого аллергена развивается аллергическая реакция, то аллерген может считаться причинно значимым.

IV этап АЛМИ. Постановкаэлиминационных тестов.Элиминационные тесты используют для подтверждения причинного аллергена, если с ним имеет место постоянный контакт (напр., при пищевой аллергии). Элиминационная диета, исключающая определённые продукты, обладающие сесибилизирующим действием на организм пациента, назначается на 1-2 недели. При улучшении состояния пациента проводится провокационная проба, подтверждающая причинный аллерген.

V этап АЛМИ. Лабораторные методы выявления эффекторных молекул Ат и биологически активных аминов, а также сенсибилизированных лимфоцитов к аллергенам, опосредующих клинические проявления аллергических реакций. Лабораторные методы диагностики аллергии используются при наличии противопоказаний к кожным тестам. Лабораторные методы диагностики аллергии подробно изучаются в курсе иммунологии.

После аллергологического обследования пациента врач заполняет паспорт больного аллергией – медицинский документ, содержащий все сведения об аллергическом заболевании, которым страдает данный человек. Паспорт (или его копию) страдающий аллергией должен всегда иметь с собой и предъявлять при обращении за медицинской помощью.

Дата добавления: 2015-02-23 ; просмотров: 4447 ; ЗАКАЗАТЬ НАПИСАНИЕ РАБОТЫ

Методы диагностики инфекционных болезней — серологическая реакция и аллергические пробы

Методы диагностики инфекционных болезней — серологическая реакция и аллергические пробы

Для диагностики инфекционных болезней наиболее часто пользуются реакцией агглютинации, или иначе серологическая реакция сущность которой состоит в склеивании бактерий между собой под влиянием специфических антител — агглютининов, вырабатывающихся в процессе болезни в организме больного.

Методы диагностики инфекционных болезней — серологическая реакция агглютинации может быть поставлена в пробирке и на стекле. Реакция в пробирке ставится следующим образом: 0,1 мл сыворотки крови больного разводят физиологическим раствором в 100, 200, 400, 800 и более раз. Затем в каждую пробирку добавляют по одной капле диагностикума (убитой культуры того или иного возбудителя) и все пробирки ставят в термостат при температуре 37° на 12—24 часа.

Угри розовые. Симптомы, причины и лечение Угри розовые

В тех пробирках, где произошло склеивание бактерий (агглютинация) и оседание их на дно пробирки, реакция считается положительной. Сыворотку можно одновременно использовать для постановки реакции агглютинации с различными диагностикумами: убитыми брюшнотифозными палочками (реакция Видаля), риккетсиями Провачека, бруцеллами (реакция Райта), протеем OXi9 (реакция Вейля—Феликса) и многими другими возбудителями инфекционных болезней.

Для постановки серологической реакции агглютинации обычно достаточно 0,2—0,3 мл сыворотки. Для получения такого количества сыворотки у больного необходимо взять 1—2 мл крови из мякоти пальца или из вены. Перед взятием крови из пальца на серологическую реакцию необходимо его тщательно обмыть, место укола протереть спиртом, а затем подсушить на воздухе или протереть эфиром.

Место прокола и инструменты должны быть сухими. Прокол кожи производят на глубину 2—3 мм либо иглой Франка, либо обычной инъекционной иглой. Укол должен быть настолько глубоким, чтобы кровь самопроизвольно выступала на поверхность кожи. Палец больного фиксируют первым и вторым пальцем левой руки, захватывая его с боков ногтевой фаланги. Первую выступившую каплю крови стирают сухой стерильной ватой. Последующие капли выдавливают в пробирку, для чего палец массируют по направлению к периферии. Руку при этом лучше держать несколько опущенной. Кровь на реакцию агглютинации можно брать в нестерильную пробирку.

Амилоидоз. Симптомы, причины и лечение Амилоидоз

Для выявления аллергии прибегают к реакциям, основанным на накожном, внутрикожном и конъюнктивальном введении антигенов. Чаще других применяется внутрикожная аллергическая проба. Для постановки пробы тонкой иглой строго внутрикожно вводят 0,1 мл аллергена (при подозрении на бруцеллез вводят бруцеллин, при подозрении на туляремию — тулярин).

При наличии заболевания на месте введения образуется болезненный инфильтрат кожи с гиперемией ее. Реже, при резко положительной реакции, наблюдается некроз кожи, лимфангоит и увеличение ближайших лимфатических узлов. Большинство аллергических проб читаются через 24—48 часов после постановки. Становятся положительными аллергические пробы с 8—10-го дня болезни.

Методы микробиологической диагностики инфекционных болезней

Микробиологические (бактериологические, микологические, вирусологические) методыоснованы на выделении чистой куль­туры возбудителя и ее последующей идентификации на основа­нии морфологических, культуральных, биохимических, антиген­ных (серологических) и других признаков. Располагая чистой культурой бактерий, можно определить их родовую и видовую принадлежность, факторы патогенности, а также чувствитель­ность к антибиотикам и химиотерапевтическим препаратам.

Микологические исследования осуществляются реже, чем бактериологические, поскольку микроскопическая диагностика микозов достаточно надежна. Микологические исследования про­водят при диагностике кандидозов путем определения нараста­ния количества клеток дрожжеподобных грибов рода Candida, а также глубоких микозов.


Вирусологический метод является наиболее достоверным в диагностике вирусных инфекций. Однако его трудоемкость, связанная с приготовлением культуры клеток, обработкой иссле­дуемого материала, а также со сравнительно частым получе­нием отрицательных результатов, ограничивают применение дан­ного метода. Кроме того, он требует затраты сравнительно боль­шого времени, особенно при проведении «слепых» пассажей. Во многих случаях вирусологический метод используют для ретроспективной диагностики вирусных инфекций.

Все микробиологические методы имеют определяющее значе­ние в лабораторной диагностике, являются наиболее информа­тивными и достоверными, особенно если они подтверждены до­полнительными серологическими данными.

73. Возбудители брюшного тифа и паратифов. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.

Брюшной тиф и паратифыА и В— острые кишечные инфек­ции, характеризующиеся поражением лимфатического аппарата ки­шечника, выраженной интоксикацией. Их возбудителями являются соответственно Salmonella typhi, Salmonella paratyphi А и Salmonella schottmuelleri.

Таксономическое положение. Возбудители брюшного тифа и паратифов А и В относятся к отделу Gracilicutes, семей­ству Enterobacteriaceae, родуSalmonella.

Морфологические и тинкториальные свойства. Сальмонеллы — мелкие грамотрицательные палочки с закругленными конца­ми. В мазках располагаются беспорядочно. Не образуют спор, имеют микрокапсулу, перитрихи.

Культуральные свойства. Сальмонеллы — факульта­тивные анаэробы. Оптимальными для роста являются темпера­тура 37С. Растут на простых питательных средах. Элективной средой для сальмонелл является желчный бульон.

Биохимическая активностьсальмонелл достаточно высока, но они не сбраживают лактозу. S.typhi менее активна, чем возбудители паратифов.

Антигенные свойства и классификация. Сальмо­неллы имеют О и H-антигены, состоящие из ряда фракций. Каждый вид обладает определенным набором антигенов. Все виды сальмонелл, имеющие общую так назы­ваемую групповую фракцию О-антигена, объединены в одну группу. Таких групп в настоящее время насчитывается около 65. S.typhi и некоторые другие сальмонеллы имеют Vi-антиген (раз­новидность К-антигена), с этим антигеном связывают вирулен­тность бактерий, их устойчивость к фагоцитозу.

Факторы патогенности. Сальмонеллы образуют эндо­токсин, обладающий энтеротропным, нейротропным и пирогенным действием. С белками наружной мембраны связаны адгезивные свойства, наличие микрокапсулы обусловливает устойчивость к фагоцитозу.

Резистентность. Сальмонеллы довольно устойчивы к низ­кой т-ре. Очень чувствительны к дезинфицирующим веществам, высокой температуре, ультрафиолетовым лучам. В пищевых продуктах (мясе, молоке) сальмонеллы могут не только долго сохраняться, но и размножаться.

Эпидемиология. Брюшной тиф и паратиф А — антропонозные инфекции; источником заболевания являются больные люди и бактерионосители. Источником паратифа В могут быть также сельскохозяйственные животные. Механизм заражения фекально-оральный. Среди путей передачи преобладает водный.

Патогенез. Возбудители попадают в организм через рот, достигают тонкой кишки, где в ее лимфатических образованиях размножаются и затем попадают в кровь (стадия бактериемии). С током крови они разносятся по всему организму, внедряясь в паренхиматозные органы (селезенку, печень, почки, костный мозг). При гибели бактерий освобождается эндотоксин, вызывающий интоксикацию. Из желчного пузыря, где С. могут длительно сохраняться, они вновь попадают в те же лимфатические образования тонкой кишки. В результате повторного поступления С. может развиться аллергическая реак­ция, проявляющаяся в виде воспаления, а затем некроза лим­фатических образований. Сальмонеллы выводятся из организма с мочой и калом.

Клиника. Клинически брюшной тиф и паратифы неразли­чимы. Инкубационный период составляет 12 дней. Болезнь начинается остро: с повышения температуры тела, по­явления слабости, утомляемости; нарушаются сон и аппетит. Для брюшного тифа характерны помутнение сознания, бред, галлюцинации, сыпь. Очень тяжелыми осложнениями являются прободение стенки кишки, перитонит, кишечное кровотечение, возникающие в результате некроза лимфатических образований тонкой кишки.

Иммунитет. После перенесенной болезни иммунитет проч­ный и продолжительный.

Микробиологическая диагностика.Основной метод диа­гностики — бактериологический: посев и выделение S. typhi из крови (гемокультура), фекалий (копрокультура), мочи (уринокультура), желчи, костного мозга. РИФ для обнаружения антиге­на возбудителя в биологических жидкостях. Серологический ме­тод обнаружения О- и Н- антител в РПГА. Бактерионосителей выявляют по обнаружению Vi-антител в сыворотке крови с по­мощью РПГА и положительному результату бактериологического; выделения возбудителя. Для внутривидовой идентификации применяют фаготипирование.

Лечение. Антибиотики. Иммуноантибиотикотерапия.

Профилактика. Санитарно-гигиенические мероприятия. Вакци­нация — брюшнотифозная химическая и брюшнотифозная спиртовая вакцина, обогащеннаяVi-антигеном. Для экстренной профилактики — брюшнотифозный бакте­риофаг.

74. Возбудители эшерихиозов. Таксономия. Характеристика. Роль кишечной палочки в норме и патологии. Микробиологическая диагностика. Лечение.

Эшерихиозы— инфекционные болезни, возбудителем которых является Escherichia coli.

Различают энтеральные (кишечные) и паренте­ральные эшерихиозы. Энтеральные эшерихиозы — острые инфек­ционные болезни, характеризующиеся преимущественным пора­жением ЖКТ. Они протекают в виде вспышек, возбудителями являются диареегенные штаммы E.coli. Парентеральные эшерихи­озы — болезни, вызываемые условно-патогенными штаммами E.coli — представителями нормальной микрофлоры толстой киш­ки. При этих болезнях возможно поражение любых органов.

Таксономическое положение. Возбудитель — кишеч­ная палочка — основной представитель рода Escherichia, семей­ства Enterobacteriaceae, относящегося к отделу Gracilicutes.

Морфологические и тинкториальные свойства. E. coli — это мелкие грамотрицательные палочки с закругленными концами. В мазках они располагаются беспорядочно, не образуют спор, перитрихи. Некоторые штаммы имеют микрокапсулу, пили.

Культуральные свойства. Кишечная палочка — факультативный анаэроб, оптим. темп. для роста — 37С. E. coli не требовательна к питательным средам и хоро­шо растет на простых средах, давая диффузное помутнение на жидких и образуя колонии на плотных сре­дах. Для диагностики эшерихиозов используют дифференциально-диагности­ческие среды с лактозой — Эндо, Левина.

Ферментативная ак­тивность. E. coli обладает большим набором различных ферментов. Наиболее отличительным признаком E. coli является ее способность ферментировать лактозу.

Антигенная структура. Кишечная палочка обладает со­матическим О-, жгутиковым Н- и поверхностным К-антигена­ми. О-антиген имеет более 170 вариантов, К-антиген — более 100, Н-антиген — более 50. Строение О-антигена определяет принадлежность к серогруппе. Штаммы E. coli, имеющие присущий им набор антигенов (ан­тигенную формулу), называются серологическими вариантами (серовары).

По антигенным, токсигенным, свойствам разли­чают два биологических варианта E. coli: 1) условно-патоген­ные кишечные палочки; 2) «безусловно» патогенные, диареегенные.

Факторы патогенности. Образует эндотоксин, обладающий энтеротропным, нейротропным и пирогенным действием. Диареегенные эшерихии продуцируют эк­зотоксин вызывающий значительное на­рушение водно-солевого обмена. Кроме того, у некоторых штам­мов, как и возбудителей дизентерии, обнаруживается инвазивный фактор, способствующий проникновению бактерий внутрь клеток. Патогенность диареегенных эшерихий — в возникновении геморрагии, в нефротоксическом действии. К факторам патогенности всех штам­мов E.coli относятся пили и белки наружной мембраны, способствующие адгезии, а также микрокапсула, препятству­ющая фагоцитозу.

Резистентность. E. coli от­личается более высокой устойчивостью к действию различных факторов внешней среды; она чувствительна к дезинфектантам, быстро погибает при кипячении.

Роль E. coli. Кишечная палочка — представитель нормаль­ной микрофлоры толстой кишки. Она является антагонистом патогенных кишечных бак­терий, гнилостных бактерий и грибов рода Candida. Кроме того, она участвует в синтезе витаминов группы В, Е и К, частично расщепляет клетчатку.

Штаммы, обитающие в толстой кишке и являющиеся условно-патогенны­ми, могут попасть за пределы ЖКТ и при снижении иммуни­тета и их накоплении стать причиной различных неспецифичес­ких гнойно-воспалительных болезней (циститов, холециститов) — парентеральных эшерихиозов.

Эпидемиология. Источник энтеральных эшерихиозов — больные люди. Механизм заражения — фекально-оральный, пути передачи алиментарный, контактно-бытовой.

Патогенез. Полость рта.Попадает в тонкую кишку, адсорбируется в клетках эпителия с помощью пилей и белков наружной мембраны. Бактерии размножаются, погибают, осво­бождая эндотоксин, который усиливает перистальтику кишеч­ника, вызывает диарею, повышение температуры тела и другие симптомы общей интоксикации. Выделяет экзотоксин — тяжелая диарея, рвоту и значительное нарушение водно-солевого обмена.

Клиника. Инкубационный период составляет 4 дня. Бо­лезнь начинается остро, с повышения температуры тела, болей в животе, поноса, рвоты. Отмечаются нарушение сна и аппе­тита, головная боль. При геморрагической форме в кале обнаружи­вают кровь.

Иммунитет. После перенесенной болезни иммунитет не­прочный и непродолжительный.

Микробиологическая диагностика. Основной метод — бак­териологический. Определяют вид чистой культуры (грамотрицательные палочки, оксидазоотрицательные, ферментирующие глюкозу и лактозу до кислоты и газа, образующие индол, не образую­щие сероводород) и принадлежность к серогруппе, что позволяет, отличить условно-патогенные кишечные палочки от диареегенных. Внутривидовая идентификация, имеющая эпидемиологичес­кое значение, заключается в определении серовара с помощью диагностических адсорбированных иммунных сывороток.

Профилактика: соблюдение санитарного режима, выявление бактерионосителей. Специфической профилактики нет.

Лечение:Для лечения больных детей раннего возраста используют бифидобактерин, лактобактерин, т.е. препараты, содержащие молочнокислые бактерии, являющиеся антагонистами Е.Coli. Взрослым – антибиотики широкого спектра.

75. Возбудители шигеллеза. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Лечение.

Род Shigella включает 4 вида: S. dysenteriae — 12 сероваров, S.flexneri — 9 сероваров, S. boydii — 18 сероваров, S. sonnei — 1 серовар.

Морфология.Шигеллы представле­ны неподвижными палочками. Спор и капсул не образуют.

Культуральные свойства.Хорошо культи­вируются на простых питательных средах. На плотных средах образуют мелкие глад­кие, блестящие, полупрозрачные колонии; на жидких — диффузное помутнение. Жидкой средой обогащения является селенитовый бу­льон. У S. sonnei отмечена при росте на плот­ных средах S-R-диссоциация.


Биохимическая активность:слабая; отсутствие газообразования при фермента­ции глюкозы, отсутствие продукции сероводорода, отсутствие ферментации лактозы.

Резистентность.Наиболее неустойчив во внешней среде вид S. dysenteriae. Шигеллы переносят высушивание, низкие темпе­ратуры, быстро погибают при нагревании. S. sonnei в молоке способны не только длительно пере­живать, но и размножаться. У S. dysenteriae отмечен переход в некультивируемую форму.

Антигенная структура.Соматический О-антиген, в зависи­мости от строения которого происходит их подразделение на серовары, a S. flexneri внут­ри сероваров подразделяется на подсеровары. S. sonnei обладает антигеном 1-й фазы, кото­рый является К-антигеном.

Факторы патогенности.Способность вызывать инвазию с пос­ледующим межклеточным распространением и размножением в эпителии слизистой толстого кишечника. Функци­онирование крупной плазмиды инвазии, кото­рая имеется у всех 4 видов шигелл. Плазмида инвазии детерминирует синтез белков, входящих в состав наружной мембраны, которые обеспечивают процесс ин­вазии слизистой. Продуцируют шига и шигаподобные белковые токсины. Эндотоксин защищает шигеллы от дейс­твия низких значений рН и желчи.

Эпидемиология: Заболевания — шигеллезы, антропонозы с фекально-оральным механизмом переда­чи. Заболевание, вызываемое S. dysenteriae, имеет контактно-бытовой путь передачи. S. flexneri — водный, a S. sonnei — алиментар­ный.

Патогенез и клиника:Инфекционные заболева­ния, характеризующиеся поражением толсто­го кишечника, с развитием колита и интокси­кацией.

Шигеллы взаимодействуют с эпителием слизистой тол­стой кишки. Прикрепляясь инвазинами к М-клеткам, шигеллы поглощаются макрофагами. Взаимодействие шигелл с макрофагами приводит к их гибели, следствием чего является выделение ИЛ-1, который инициирует воспа­ление в подслизистой. При гибели шигелл происходит выделение шига токсинов, действие которых приводит к появлению крови в испражнениях.

Иммунитет. Секреторные IgA, пре­дотвращающие адгезию, и цитотоксическая антителозависимая активность лимфоцитов.

Лабораторные методы диагностики в аллергологии

Аллергические заболевания – группа заболеваний, характеризующихся комплексом патофизиологических процессов, ключевым звеном которых является избыточная сенсибилизация иммунной системы к определенным этиологическим факторам (аллергенам). У больного с аллергическим заболеванием при первичном контакте с аллергеном происходит образование специфических антител или специфически реагирующих Т-лимфоцитов. При повторном контакте развивается реакция гиперчувствительности, тип которой определяется видом аллергена, локализацией проникновения аллергена в организме, а также рядом внутренних и внешних факторов.

Лабораторная диагностика аллергических заболеваний становится все более важной составляющей комплексного обследования, проводимого врачом-аллергологом. Важным преимуществом такой диагностики аллергических заболеваний является о, что она, в отличие от кожных аллергопроб, практически не имеет противопоказаний к проведению исследования. Взятие крови для анализа безопасно и может быть проведено у людей любого возраста и состояния, в т. ч. у грудных детей и беременных женщин. Лабораторные исследования можно выполнять и в период повышенной сенсибилизации или обострения заболевания, проводить на фоне лечения. В ряде случаев (элиминация конкретного аллергена, анти-IgE терапия) мониторинг лечения проводят при помощи соответствующих лабораторных исследований.

Увеличению роли лабораторной диагностики в аллергологии способствуют объективные причины, связанные со значительным ростом числа аллергических заболеваний и их распространенности. Существенно увеличилось и число аллергенов, которые способны привести к тяжелым клиническим последствиям, в т. ч. новых аллергенов искусственного происхождения. В таких условиях возникает потребность скринингового обследования большого числа людей с подозрением на аллергические заболевания.

Аллергены, вызывающие патологическую иммунную реакцию у пациента, называют причинно-значимыми или причинными аллергенами. Моноаллергенами называют выделенные из причинно-значимого аллергена отдельные вещества (белки, полисахариды, гликопротеиды, металлопротеиды), к эпитопам которых вырабатываются специфические антитела или рецепторы лимфоцитов. Моноаллергены играют большую роль в современной аллергологии, так как в одном причинно-значимом аллергене может содержаться целый комплекс потенциальных моноаллергенных компонентов, но только один или несколько из них будут реальными этиологическими агентами аллергических реакций у конкретного пациента. Для определения специфических антител в наборах реагентов нового поколения используются препараты подобных аллергенов, полученные по технологиям высокой очистки экстракта природного источника или созданные путем биотехнологических процессов. Разработанные новые технологии позволяют провести анализ для выявления сразу большого числа аллергенов одновременно, выполнить скрининговое обследование без подробного выяснения анамнеза. В арсенале многих производителей наборов реагентов для аллергодиагностики тысячи аллергенов, к которым можно определять специфические антитела.

В лабораторной диагностике аллергических заболеваний определяют преимущественно уровень общих IgE-антител и специфических IgE- и IgG4-антител в сыворотке крови к отдельным аллергенам или группам аллергенов природного или искусственного происхождения. IgE-зависимая реакция возникает в течение нескольких минут после контакта с аллергеном, а IgG (IgG4)-зависимая (наиболее часто встречаемая при пищевой аллергии) развивается в более поздние сроки – через часы, иногда даже через несколько суток после контакта с аллергеном.

Показания к исследованию

  • Скрининг аллергических заболеваний;
  • развернутое обследование в срочных клинических случаях;
  • выбор адекватной терапии и контроль тактики ведения пациента;

Методы исследования: Для определения антител (общий IgE, специфические IgE, IgG, IgG4) используют различные иммунохимические методы исследования.

Общий IgE

В норме концентрация суммарных (общих) IgE-антител очень мала и не превышает 0,05% по сравнению с концентрацией IgG-антител. Общее количество IgE-антител начинает возрастать у ребенка после рождения и продолжает расти до 10–14 лет, после чего у здоровых людей стабилизируется на постоянном уровне и снижается после 60 лет. Повышение уровня концентрации общего IgE в крови наблюдается преимущественно при аллергических заболеваниях, развивающихся по механизму реакций гиперчувствительности I типа (атопические заболевания). В большинстве случаев повышение концентрации общих IgE выше 100 U/л у взрослых людей и более 20 U/л у детей до 4 лет может свидетельствовать об аллергическом заболевании.

Помимо аллергических заболеваний, причиной повышения уровня общих IgE могут быть:

  • паразитарные заболевания;
  • паразитарные заболевания;
  • тимусная аплазия (синдром Ди-Джорджи);
  • иммунодефицитные состояния (СПИД, Вискотт-Олдриджа, синдром Джобса, синдром Незеллофа и др.);
  • вирусные инфекции, вызывающие серьезные изменения в иммунной системе;
  • некоторые воспалительные и инфекционные заболевания (муковисцидоз, синдром Кавасаки, лепра, бронхопульмональный аспергиллез, аспергиломма и др.), при которых наблюдается сдвиг иммунного ответа в сторону Т2-типа.

Специфические IgE

Определение специфических IgE выполняют при наличии IgE-зависимой пищевой аллергии, а также при невозможности проведения кожных проб, в т. ч. у детей и лиц пожилого возраста, у пациентов с заболеваниями кожи, аллергическими реакциями в анамнезе и др. Интерпретация результатов исследования требует осторожности, заключение должно быть сделано врачом-аллергологом с учетом анамнеза и клинической картины заболевания.

Специфические IgG

В последние годы внимание аллергологов привлекает IgE-независимая пищевая аллергия, иммунопатогенез которой связан с выработкой различных подклассов IgG антител, участвующих в иммунопатологических реакциях с хроническими воспалительными заболеваниями и “скрытыми” формами пищевой аллергии. Для диагностики скрытой пищевой аллергии используют количественное определение подклассов IgG специфических антител (IgG1-IgG4) к индивидуальным антигенам пищевых продуктов. Как и при интерпретации результатов выявления общего и специфических IgE, заключение должно быть сделано врачом-аллергологом с учетом анамнеза и клинической картины заболевания.

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

Copyright ФБУН Центральный НИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, 1998 — 2020

Центральный офис: 111123, Россия, Москва, ул. Новогиреевская, д.3а, метро «Шоссе Энтузиастов», «Перово»
+7 (495) 788-000-1, info@cmd-online.ru

! Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

ОСНОВНЫЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ

Диагностика инфекционных болезней основана на комплексном использовании

Клинические методы предусматривают

  • выявление жалоб больного
  • анамнестических сведений (анамнез болезни, эпидемиологический анамнез, основные сведения из анамнеза жизни)
  • клинический осмотр больного

Анамнез

Анамнез инфекционной болезни выясняют путём активного опроса больного: детального выявления его жалоб на момент осмотра врачом, времени и характера начала болезни (острого или постепенного), подробного и последовательного описания возникновения отдельных симптомов и их развития в динамике заболевания. При этом нельзя ограничиваться рассказом больного (если позволяет его состояние), анамнестические данные выясняют максимально подробно. Это даёт врачу возможность составить предварительное впечатление о вероятном клиническом диагнозе. Старое правило клиницистов гласит: «Анамнез — половина диагноза».


эпидемиологический анамнез

При сборе анамнестических сведений у инфекционных больных особое внимание необходимо обратить на данные эпидемиологического анамнеза. При этом врач преследует цель получить сведения о месте, обстоятельствах и условиях, при которых могло произойти заражение, а также о возможных путях и способах передачи возбудителя инфекции данному больному. Выясняют контакты и частоту общения пациента с другими больными людьми или животными, его пребывание в местах, где могло произойти заражение (в эндемических или эпизоотических очагах). Обращают внимание на возможность укусов насекомых и животных, любые повреждения кожных покровов (травмы, ранения), лечебные парентеральные вмешательства.

анамнез жизни

При выяснении анамнеза жизни обращают внимание на условия быта, питания, труда и отдыха больного. Исключительно важны сведения о перенесённых ранее заболеваниях, в том числе инфекционных, и проводимом при этом лечении. Необходимо выяснить, сделаны ли больному профилактические прививки (какие и когда), есть ли в анамнезе указания на введение сывороток, иммуноглобулинов, препаратов крови и кровезаменителей, а также возможные реакции на них.

Клинический осмотр

Клинический осмотр больного проводят в определённом порядке в соответствии со схемой истории болезни. Последовательный и детальный осмотр позволяет выявить симптомы и синдромы, характерные для инфекционного заболевания .

оценка общего состояния больного

Прежде всего оценивают общее состояние больного:

  • сохранность сознания или степень его нарушения
  • возбуждение или заторможенность
  • наличие или отсутствие психических нарушений
  • адекватность поведения

объективное обследование

В соответствии с установленным порядком проводят объективное обследование

  • кожных покровов и слизистых оболочек
  • периферических лимфатических узлов
  • состояние внутренних органов — опорно-двигательного аппаратадыхательной
  • сердечно-сосудистой систем
  • ЖКТ
  • органов мочевыделения
  • половых органов
  • нервной системы

На основе информации, полученной врачом при выявлении анамнестических сведений, и данных клинического осмотра больного формулируют предварительный диагноз.

В соответствии с диагнозом (с оценкой формы и тяжести заболевания, периода болезни, наличия осложнений и сопутствующих заболеваний) врач определяет место госпитализации больного в инфекционном стационаре: отделение (при необходимости реанимационное), палату или изолированный бокс;

разрабатывает план лабораторного и инструментального обследования, проведения консультаций специалистов,

Методы лабораторной и инструментальной диагностики

Методы лабораторной и инструментальной диагностики подразделяют на общие (например, общие анализы крови и мочи, рентгенография органов грудной клетки) и специфические (специальные), применяемые для подтверждения предполагаемого диагноза инфекционной болезни и оценки тяжести заболевания. Данные специфических исследований необходимы также для контроля над выздоровлением, определения сроков и условий выписки больного. В зависимости от нозологической формы заболевания, его характера и периода специфическому исследованию могут подлежать кровь, фекалии, моча, мокрота, спинномозговая жидкость, дуоденальное содержимое, смывы со слизистых оболочек, пунктаты и биоптаты органов, отделяемое язв, секционный материал.

Бактериологические исследования

предусматривают посев на питательные среды различного материала, взятого у больного (крови, мочи, ликвора, испражнений и т.д.), выделение чистой культуры возбудителя, а также определение его свойств, в частности типовой принадлежности и чувствительности к антибиотикам. При вспышках кишечных инфекций бактериологическому исследованию подвергают остатки пищи, с которой может быть связано инфицирование употреблявших её лиц. Бактериологическое исследование занимает как минимум несколько дней.

Вирусологические исследования

предусматривают выделение и идентификацию вирусов. При их проведении используют тканевые культуры, куриные эмбрионы, лабораторных животных. Довольно часто подобные исследования проводят в режимных лабораториях.

Для более быстрой лабораторной диагностики некоторых бактериальных (возвратного тифа, первичного сифилиса) и большинства паразитарных (малярии, амебиаза, балантидиаза, лямблиоза, гельминтозов и др.) болезней достаточно применения прямой микроскопии исследуемого материала (окрашенных и нативных мазков, толстой капли крови). Диагностическую ценность микроскопии повышает применение специфических сывороток, меченных флюорохромом (иммунофлюоресцентные методы).

Иммунологические методы

основаны на обнаружении Аг возбудителя или AT к ним.

Антиген (Аг) возбудителя выявляют в испражнениях, сыворотке крови, ликворе, слюне и другом биологическом материале, полученном от больного. Для этого применяют реакции коагглютинации (РКА), латекс-агглютинации (РЛА), РИГА, ИФА и др. Реакции основаны на применении специальных диагностических препаратов (диагностикумов), представляющих собой носитель (лиофили-зированный стафилококк, латексные частицы, эритроциты) с фиксированной на нём высокоактивной сывороткой против того или иного Аг возбудителя. Реакции высокоспецифичны и могут быть использованы как методы экспресс-диагностики в ранние сроки болезни.

Антитела (AT) в цельной сыворотке крови или её фракциях, содержащих иммуноглобулины различных классов, можно обнаружить с помощью многих специфических лабораторных методов. Наиболее популярны РА при бруцеллёзе, иерсиниозах, туляремии, некоторых риккетсиозах и других инфекциях, РНГА — при многих кишечных инфекциях, РТГА — при различных вирусных инфекциях. При риккетсиозах и некоторых вирусных заболеваниях большое диагностическое значение имеют реакция связывания комплемента (РСК), радиоиммунологический анализ (РИА) и ИФА. Исследования проводят с заведомо известными Аг. Определение принадлежности AT к различным классам иммуноглобулинов помогает уточнить фазу инфекционного процесса, отличить первичное инфекционное заболевание от повторного (например, сыпной тиф от болезни Брилла-Цинссера), дифференцировать инфекционное заболевание от поствакцинальных реакций.

Вместе с тем методы обнаружения AT имеют и существенные недостатки. Как правило, положительные результаты реакций могут быть получены не ранее чем на 2-й неделе заболевания, когда титры сывороточных AT начинают превышать минимальный диагностический уровень. Слабое или отсроченное образование AT наблюдают у лиц со сниженной активностью иммунной системы, а также при многих инфекционных заболеваниях, возбудители которых проявляют высокую

иммуносупрессивную активность (иерсиниозах, брюшном тифе и др.). Диагностическая ценность реакций возрастает при исследовании «парных» сывороток, взятых с интервалом 7—10 дней. В этих случаях прослеживают динамику нарастания титров AT, что наиболее важно при вирусных инфекциях, когда диагностическое значение имеет лишь нарастание титров во второй порции сыворотки в 4 раза и более.

В последние годы в практике здравоохранения широко применяют и другие иммунологические методы — определение маркёров вирусных гепатитов (Аг вирусов и AT к ним), определение иммуноглобулинов разных классов, количественного содержания Т-лимфоцитов, иммуноблоттинг и др.

Диагностика инфекционных болезней

Методы диагностики инфекционных болезней у животных: клинический осмотр, аллергические, серологические, микроскопические, бактериологические исследования, биологические пробы и патологоанатомические вскрытия. Взятие и пересылка материала в лабораторию.

Рубрика Медицина
Вид реферат
Язык русский
Дата добавления 05.11.2013
Размер файла 21,2 K

Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже

Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.

Размещено на http://www.allbest.ru/

Диагностика инфекционных болезней

Чтобы распознать инфекционную болезнь и выявить больных животных, проводят клинический осмотр, аллергические, серологические, микроскопические, бактериологические исследования, биологическую пробу и патологоанатомические вскрытия

Клиническому осмотру подвергают все поголовье животных в хозяйстве, где появилось заболевание. Животных с явно выраженными ь неясными клиническими признаками выделяют для уточнения диагноза.

Аллергические исследования заключаются во введении в организм животного (на конъюнктиву глаза, подкожно или внутрикожно) специфических препаратов, вызывающих у больного животного характерную реакцию. Имеются препараты для выявления лошадей, больных сапом (маллеин), животных, больных туберкулезом (туберкулин), бруцеллезом (бруцеллизат) и другие. Эти препараты называются аллергенами. При введении двух-трех капель маллеина в глаз больной сапом лошади у нее через несколько часов начинается слезотечение из этого глаза, с выделением гноя. У здоровой лошади такой реакции не наблюдается.


Серологическим исследованием называется исследование сыворотки крови животных, позволяющее выявить зараженных животных. В ветеринарной практике широко применяют исследование сыворотки крови по реакции агглютинации (РА) и реакции связывания комплемента (РСК).

Микроскопическому исследованию подвергают мазки крови или отпечатки из органов животных. При этом удается увидеть возбудителей болезни под микроскопом. Бактериологическим исследованием выделяют из органов павшего животного культуру возбудителя болезни посевами зараженного материала на специальные питательные среды. Биологическая проба позволяет воспроизвести заболевание у здоровых животных заражением их материалом, взятым от больного животного, или культурой возбудителя.

Патологоанатомическое вскрытие трупа животного нередко помогает подтвердить прижизненный диагноз. Иногда кусочки органов посылают в лабораторию для гистологического исследования, т.е. исследования под микроскопом ткани, ее характера и строения.

Взятие и пересылка материала для исследования на инфекционные болезни. Взятие патологического материала. Патологический материал берут в стерильную посуду стерильным инструментом, строго соблюдая меры личной предосторожности. Место на трупе или органе, от которых необходимо взять материал на исследование, прижигают горячей металлической пластиной (шпателем).

Жидкий материал — кровь, желчь, мочу, экссудат, слизь, гной и пр. — насасывают в стеклянные пастеровские пипетки, которые запаивают с обоих концов. Его можно также взять стерильным шприцем с иглой в стерильный флакон или стерильную пробирку с плотной резиновой или корковой пробкой, залив ее сверху расплавленным парафином или воском. Тот же материал, но для микроскопического исследования наносят тонким слоем на чистое предметное, предварительно обезжиренное и профламбированное на огне стекло, которое затем подсушивают на воздухе; стекла связывают попарно мазками внутрь, вложив между ними перекладины из спичек. Вместо предметного можно использовать кусочек оконного стекла, чисто вымыв его в теплом 2-3%-ном растворе питьевой соды и обезжирив в спирте с эфиром или в бензине. Такое стекло высушивают на воздухе и обжигают пламенем спиртовки, после чего на него наносят тонким слоем подлежащий исследованию материал.

Гной из глубоких полостей берут стерильным ватным тампоном на кусочке тонкой проволоки или на небольшой деревянной палочке, вделанной в ватную пробку стерильной пробирки.

Гной из невскрывшихся глубоких абсцессов берут проколом стенки абсцесса тонкой, длинной иглой, в стерильный 5-20-граммовый шприц. Затем гной сливают через эту же иглу в стерильную пробирку (или флакон), плотно закрыв ее стерильной ватной или корковой пробкой и залив сверху расплавленным парафином или воском. Место прокола предварительно выстригают и дезинфицируют, после взятия гноя .смазывают настойкой йода.

Кал берут из прямой кишки в небольшом количестве в стерильные пробирки или в такие же стеклянные баночки, плотно закрывающиеся пробками.

Мочу у большинства животных берут через катетер в стерильные флакончики емкостью 100-200 мл. Ее можно взять и без катетера, массажируя рукой мочевой пузырь через прямую кишку и вызывая этим мочеиспускание.

Для исследования на бешенство берут аммоновы рога, а на болезнь Ауески — продолговатый мозг. Их кладут в стерильные баночки и консервируют: для бактериологического исследования — 33%-ным водным раствором глицерина, для гистологического исследования — 10%-ным водным раствором формалина.

Если невозможно вскрыть черепную коробку с соблюдением всех мер предосторожности, в лабораторию посылают голову, целиком отделив ее от трупа. Отпрепарированную голову необходимо завернуть в марлю, пропитанную дезинфицирующим раствором, а затем в пергамент или клеенку, запаковать в плотный ящик и срочно отправить с нарочным в ветеринарную лабораторию. Руки необходимо защитить резиновыми перчатками или брезентовыми (кожаными) рукавицами и после этой работы вымыть и тщательно продезинфицировать, помня, что в слюне бешеных животных содержится вирус.

Внутренние органы — сердце, легкие, печень, селезенку, почки, лимфатические узлы, желудок, а также пораженные мышцы и др. ткани — для бактериологического и гистологического исследования берут маленькими кусочками в местах с наиболее типическим поражением на границе со здоровой тканью в стерильные баночки с плотно притертыми пробками. Части пораженного желудка, кишечника или кусочки некротизированных тканей вначале обмывают водой, затем просушивают ватными тампонами и также помещают в стерильные баночки.

Материал, взятый для бактериологического исследования в зимнее время, не консервируют, в теплое же время года заливают 33%-ным водным раствором глицерина; для гистологического исследования — 10%-ным водным раствором формалина.

Материал не следует консервировать при быстрой доставке его в лабораторию. Банки с материалом герметически закупоривают пробками, закрепляя их тонкой проволокой или шпагатом, а затем заливают сургучом или замазывают смесью воска с парафином.

Трубчатые кости отделяют от трупа, стремясь не повредить их концы, освобождают от мышц и сухожилий, заворачивают в марлю, смоченную раствором сулемы или фенола, и упаковывают в плотный ящик.

Ухо (для исследования па сибирскую язву) берут с той стороны, на которой лежал труп. Предварительно ухо перевязывают у основания в двух местах шпагатом и отрезают между перевязками. Участок кожи на трупе, где отрезано ухо, прижигают каленым железом. Отделенное ухо сначала заворачивают в марлю, смоченную раствором сулемы или фенола, а затем в пергаментную бумагу, после чего упаковывают в плотный ящик. Для проведения бактериологического исследования на сибирскую язву вместо уха можно послать кровь, взятую из него толстой иглой. Можно сделать небольшой, но глубокий надрез кожи, взять кровь и нанести ее толстыми мазками на несколько предметных стекол. Мазки высушивают на открытом воздухе и, не фиксируя их пламенем спиртовки, складывают на перекладинки спичек, затем заворачивают в пергамент и упаковывают в плотный ящик или коробку, в которой и отправляют с нарочным в лабораторию. Место надреза (или укола иглой) прижигают раскаленным железом. диагностика инфекционный бактериологический животный

Трупы поросят, ягнят, птиц, телят и жеребят, а также плоды абортировавших животных отправляют в лабораторию в целом виде в тех случаях, когда на месте невозможно стерильно взять материал.

Трупы и плоды животных предварительно обтирают и завертывают в мешковину, смоченную раствором фенола или креолина, а затем упаковывают в металлический или плотный деревянный ящик со стружками и опилками.

Пчелиный сот с погибшим расплодом заворачивают в пергамент или вощеную бумагу и плотно укладывают в деревянный ящик на планки (чтобы сот не соприкасался с дном и крышкой ящика). Погибших пчел и маток пересылают в стеклянных, плотно закрывающихся баночках, наполненных медом.

Патологический материал пересылают в лабораторию с нарочным. Плотный материал (например, трубчатую кость) можно послать почтой, обеспечив надежную упаковку, исключающую возможность рассеивания инфекции. Верх посылки обозначают надписью. При подозрении на особо опасные инфекции (сибирская язва, сап, эмфизематозный карбункул, туляремия, бруцеллез, чума свиней и птиц, инфекционная анемия, инфекционный энцефаломиелит и бешенство) материал, взятый в стеклянную посуду, помещают в металлическую коробку, которую запаивают, пломбируют или опечатывают и упаковывают в деревянный ящик.

При отправке нарочным следует герметически упакованную посуду с патологическим материалом опечатать, завернуть в вату и уложить в деревянный ящик.

В лабораторию отправляют вместе с посылкой сопроводительный документ (направление), в котором указывают:

1) адрес лаборатории;

2) какой материал направляют для исследования и в чем он законсервирован;

3) от какого животного и кому оно принадлежит;

4) клинические признаки у больного животного;

5) основные патологоанатомические изменения, обнаруженные при вскрытии трупов на месте;

6) имеются ли еще в хозяйстве больные животные со сходными признаками (сколько);

7) предполагаемые причины падежа;

8) на какие заболевания необходимо произвести исследование. Сопроводительное письмо подписывает ветеринарный работник, направляющий материал. В письме указывают дату взятия и отправления материала.

Взятие крови для серологического исследования. Кровь животных берут стерильными иглами у лошадей, крупного рогатого скота, верблюдов и у других крупных животных, а также у овец, коз из яремной вены, у свиней — из копчика хвоста или из ушной вены. На месте взятия пробы шерсть выстригают и кожу протирают дезинфицирующим раствором или денатурированным спиртом. При взятии крови следят, чтобы капли ее не попали на землю; для этого на муфту иглы надевают небольшую резиновую трубку, конец которой опускают в пробирку. С этой же целью используют специальный прибор, в который с одного конца вставляют иглу, а с противоположной стороны — пробирку. Струю крови нужно направлять по стенке пробирки, чтобы избежать распада эритроцитов (гемолиза). Гемолизированная кровь для исследования непригодна.

Кровь, взятую зимой, сразу же ставят в теплое место для свертывания кровяного сгустка и отстаивания сыворотки. Кровь доставляют в лабораторию не позднее, чем на 2-3-й день после ее взятия. Сохранять ее следует в темном и прохладном месте. В жаркую погоду при невозможности своевременной отправки крови для исследования ее необходимо консервировать 0,5%-ным раствором карболовой кристаллической кислоты на физиологическом (0,85%-м) растворе поваренной соли. С этой целью отстоявшуюся сыворотку крови пипеткой отсасывают и переносят в чистые пробирки, оставив в первоначальной пробирке кровяной сгусток. К 9 мл сыворотки крови добавляют 1 мл 5%-го раствора карболовой кристаллической кислоты, пробирку тщательно встряхивают, плотно закрыв ватной пробкой. При малом количестве исследуемой сыворотки к 1 мл ее добавляют 0,1 мл указанного раствора карболовой кислоты. Консервированная сыворотка может сохраняться длительное время.

Пробирки с кровью упаковывают в вертикальном положении и отправляют в лабораторию с нарочным, предохраняя от замораживания и встряхивания. Гемолизированная, проросшая и покрытая сверху пленкой плесени кровь, а также помутневшая сыворотка давно взятой крови для серологического исследования непригодны.

На каждой пробирке с кровью ставят номер или кличку животного. Бумажную этикетку надписывают простым карандашом и прикрепляют ее резиновым колечком, плотно надетым на пробирку. Пробы с кровью направляют в сопровождении списка, составленного в 2 экземплярах. Одни из них с обозначением полученных результатов лаборатория возвращает лицу, направившему кровь на исследование.

Размещено на allbest.ru

Подобные документы

Методы диагностики инфекционных болезней животных. Полимеразная цепная реакция. Иммуноферментный анализ, его цели. Диагностика инфекций, вызываемых стафилококками, пневмококками и сальмонелезной инфекции. Возбудитель бруцеллеза, его диагностика.

реферат [20,2 K], добавлен 26.12.2013

Механизм передачи возбудителей инфекционных болезней. Локализация возбудителя в организме человека. Схема инфекционных болезней, сопровождающихся поражениями кожи. Дифференциальная диагностика экзантем и энантем. Классификация инфекционных болезней.

реферат [47,2 K], добавлен 01.10.2014

Питание инфекционных больных. Принципы текущей и заключительной дезинфекции. Основные препараты, используемые для дезинфекции, дезинсекции и стерилизации. Теории о механизме передачи возбудителей инфекционных болезней. Классификация инфекционных болезней.

контрольная работа [74,9 K], добавлен 17.12.2010


Диагностические учреждения государственной ветеринарии. Бактериологические, серологические, паталогоанатомические, биохимические, токсикологические, капроскопические и другие лабораторные методы исследования. Проведение диагностики заболеваний животных.

реферат [22,2 K], добавлен 08.12.2011

Исследование принципов и общая характеристика методов диагностики инфекционных заболеваний. Лабораторная диагностика: иммуноферментный анализ и блоттинг, микробиологический, бактериологический, вирусологический, биологический и иммунологический методы.

реферат [41,1 K], добавлен 23.02.2011

Понятие инфектологии и инфекционного процесса. Основные признаки, формы и источники инфекционных болезней. Виды болезнетворных микроорганизмов. Периоды инфекционной болезни у человека. Методы микробиологических исследований. Методы окраски мазков.

презентация [3,2 M], добавлен 25.12.2011

Политика государства в сфере иммунопрофилактики инфекционных заболеваний. Регулирование добровольного согласия на профилактическую вакцинацию детей или отказа от них. Расширение перечня инфекционных заболеваний. Расследование поствакцинальных осложнений.

контрольная работа [16,9 K], добавлен 13.08.2015

Характеристика эпидемии как заболевания множества людей в относительно короткие сроки. Значение эпидемиологического метода при изучении закономерностей распространения среди населения болезней неинфекционной природы. Опасность инфекционных болезней.

контрольная работа [66,3 K], добавлен 17.06.2011

Актуальность инфекционных заболеваний. Звенья инфекционного процесса. Классификация инфекционных болезней по Громашевскому и Колтыпину. Понятие об иммунитете. Понятие о рецидиве, обострении заболевания. Взаимодействие возбудителя и макроорганизма.

презентация [877,5 K], добавлен 01.12.2015

Обеспечение санитарно-эпидемиологического благополучия населения на всей территории Российской Федерации. Контроль за работой лечебно-профилактических организаций по вопросам иммунопрофилактики инфекционных заболеваний, национальный календарь прививок.

контрольная работа [35,2 K], добавлен 18.11.2013

Работы в архивах красиво оформлены согласно требованиям ВУЗов и содержат рисунки, диаграммы, формулы и т.д.
PPT, PPTX и PDF-файлы представлены только в архивах.
Рекомендуем скачать работу.

Принципы диагностики аллергических заболеваний

Согласно официальной статистике, аллергическими заболеваниями в нашей стране страдают от 10 до 15% населения. Однако истинный показатель заболеваемости много выше, ибо обращаемость населения в аллергологические кабинеты имеет место в случаях сформировавшегося заболевания, ранние же симптомы болезни часто остаются не выявленными. Широкое распространение и неуклонный рост аллергических заболеваний во всем мире, а также значительный процент ошибок диагностики диктуют необходимость ознакомления практических врачей широкого профиля с современными методами диагностики аллергических заболеваний с целью раннего выявления аллергопатологии, своевременной коррекции и профилактики данных состояний.
Диагностика аллергических заболеваний направлена на выявление причин и факторов, способствующих возникновению, формированию и прогрессированию аллергических заболеваний. С этой целью применяют специфические и неспецифические методы обследования.
Эта диагностика всегда начинается со сбора жалоб, особенности которых нередко позволяют предположить предварительный диагноз, сбора и анализа данных истории жизни и болезни пациента.
Клинические неспецифические методы обследования включают врачебный осмотр, клинико-лабораторные методы обследования, рентгенологические, инструментальные, функциональные методы исследования и другие по показаниям.

Таблица 1. Шкала оценки аппликационных кожных тестов

Изменения кожи осутствуют

Наличие эритемы без отека

Эритема и отек в месте аппликации

В месте аппликации эритема, отек, папулы, изолированные везикулы

Очень резко положительный

В месте аппликации гиперемия, отек, папулы, сливающиеся везикулы

Небольшая эритема без отека

Таблица 2. Оценка скарификационных кожных проб

Размеры, как в контроле с разводящей жидкостью

Волдырь диаметром 2–3 мм с гиперемией, заметен только при натягивании кожи

Волдырь диаметром не более 5 мм, окруженный гиперемией, заметен без натягивания кожи

Волдырь диаметром не более 10 мм с гиперемией и псевдоподиями

Очень резко положительный

Волдырь более 10 мм в диаметре с гиперемией и псевдоподиями

В месте скарификации гиперемия без волдыря

Таблица 3. Шкала оценки прик-тестов

Размеры, как в контроле с разводящей жидкостью

Волдырь диаметром 3–5 мм с гиперемией до 10 мм, заметен только при натягивании кожи

Волдырь диаметром 5–10 мм, окруженный зоной гиперемии, диаметром 5–10 мм

Волдырь диаметром 10–15 мм, окруженный зоной гиперемии, диаметром более 10 мм

Очень резко положительный

Волдырь диаметром более 15 мм, с псевдоподиями, гиперемия диаметром более 20 мм

Наличие гиперемии без волдыря


Таблица 4. Шкала оценки внутрикожных тестов

Местная реакция кожи через 20 мин

Реакция замедленного типа через 24–48 ч

Реакция кожи такая же, как в контроле

Реакция кожи такая же, как в контроле

Волдырь 4–8 мм, окруженный гиперемией

Гиперемия, инфильтрат диаметром 5–10 мм

Волдырь 9–15 мм, окруженный гиперемией

Гиперемия, инфильтрат диаметром 11–15 мм

Волдырь 16–20 мм с псевдоподиями, окруженный гиперемией

Гиперемия, инфильтрат диаметром 16–20 мм с псевдоподиями, окруженный гиперемией

Очень резко положительный

Волдырь более 20 мм с псевдоподиями, окруженный гиперемией

Гиперемия, инфильтрат диаметром более 20 мм с псевдоподиями, лимфангитом, дочерними волдырями по периферии и яркой гиперемией

В месте пробы гиперемия

В месте пробы волдырь рассасывается медленнее, чем в контроле

Определение
Термин “специфическая диагностика аллергических заболеваний” подразумевает комплекс методов, направленных на выявление аллергена или группы аллергенов, способных спровоцировать развитие аллергического заболевания. Основным принципом специфической диагностики аллергических заболеваний является выявление аллергических антител или сенсибилизированных лимфоцитов и продуктов специфического взаимодействия аллергенов (АГ) и антител (АТ).
Объем специфического аллергологического обследования определяется после сбора аллергологического анамнеза и включает:

  • проведение кожных тестов;
  • провокационные тесты;
  • лабораторную диагностику.

Сбор аллергологического анамнеза
Правильный сбор анамнеза имеет большое, иногда решающее, значение в диагностике аллергии. При сборе анамнеза осуществляется поиск факторов, способствующих развитию данного заболевания.
При опросе больного особое внимание обращают на особенности развития первых симптомов заболевания, интенсивность и продолжительность проявлений, динамику их развития, результаты предшествующей диагностики и лечения, чувствительность пациента к назначаемым ранее фармакотерапевтическим средствам.
При сборе аллергологического анамнеза ставятся следующие задачи:

  • установление аллергической природы заболевания, предположительно – нозологической формы (одним из вероятных признаков наличия аллергического заболевания является существование четкой связи развития болезни и ее манифестации с воздействием определенного причинного фактора, исчезновение симптомов заболевания в случае прекращения контакта с данным фактором – эффект элиминации – и возобновление проявлений заболевания, нередко более выраженных, при повторном контакте с подозреваемым причинным фактором);
  • предположительное выявление этиологически значимого аллергена;
  • выявление факторов риска, способствующих развитию аллергического заболевания;
  • установление наследственной предрасположенности;
  • оценка влияния факторов окружающей среды (климата, погоды, физических факторов) на развитие и течение заболевания;
  • выявление сезонности проявления симптомов заболевания;
  • выявление влияния бытовых факторов (перенаселенность, сырость в помещении, наличие в квартире мягкой мебели, ковров, домашних животных, птиц и т. д.) на характер развития и течение заболевания;
  • установление связи начала заболевания и его обострений с приемом пищи и медикаментов;
  • выявление сопутствующей соматической патологии;
  • выявление имеющихся у больного других аллергических заболеваний;
  • выявление наличия профессиональных вредностей;
  • оценка клинического эффекта от применения антиаллергических средств и/или элиминации аллергена.

При сборе анамнеза обращается особое внимание на семейную предрасположенность: наличие у близких родственников пациента таких заболеваний, как бронхиальная астма, круглогодичный или сезонный ринит, экзема, крапивница, отек Квинке, непереносимость пищевых продуктов, лекарственных, химических или биологических препаратов. Известно, что у страдающих аллергическими заболеваниями отягощенный аллергологический анамнез (т.е. наличие у родственников аллергических заболеваний) встречается в 30–70% случаев. Необходимо также выяснить, были ли отмечены случаи туберкулеза, ревматизма, диабета, психических заболеваний у членов семьи или близких родственников больного.
Рис. 1. Схема иммуноферментного анализа.

Рис. 2. Схема проведения радиоаллергосорбентного теста.

Рис. 3. Схема MAST-CLA-теста

Рис. 4. Схема ELISA-теста

Рис. 5. Схема реакции бласттрансформации лимфоцитов

При сборе анамнеза отмечают наличие или отсутствие сезонности заболевания, его связь с простудой, с изменением климатических, жилищных или рабочих условий.
Знание клинических особенностей повышенной чувствительности организма к различным аллергенам часто является решающим фактором для правильной постановки предварительного диагноза.
Например, если пациент указывает на ежегодное развитие в одни и те же временные периоды (весенние или летние месяцы), в сезон поллинации (цветения) определенных растений, респираторных проявлений (ринорея, заложенность носа, приступы удушья и др.), ухудшение самочувствия в сухую ветренную погоду, когда создаются оптимальные условия распространения пыльцы, то это свидетельствует о наличии поллиноза (т.е. повышенной чувствительности к пыльце растений), и в план обследования таких больных включают методы тестирования с пыльцевыми аллергенами.
Для больных инфекционно-аллергической формой бронхиальной астмы характерно обострение аллергического заболевания на фоне течения острых респираторных вирусных или бактериальных инфекций, особенно в холодное время года.
Необходимо также расспросить пациента о жилищно-бытовых условиях, наличии в квартире мягкой мебели, книг, домашних животных, рыб, птиц.
Правильно собранный анамнез позволит не только выяснить характер заболевания, но и предположить его этиологию, т.е. выявить предположительный аллерген или группу аллергенов. Если обострения заболевания возникают в любое время года, но чаще в ночное время суток, при уборке квартиры, пребывании в пыльных помещениях, имеющих много «пылесборников» (мягкая мебель, ковры, шторы, книги и т.д.), то можно предположить наличие у больного повышенной чувствительности к бытовым аллергенам (домашняя пыль, библиотечная пыль). Домашняя пыль и пироглифидные клещи, обитающие в ней, могут вызывать развитие бронхиальной астмы и круглогодичного аллергического ринита, реже – поражений кожи (дерматит). Круглогодичное течение заболевания с обострениями в холодное время года (осень, зима, ранняя весна) связано с насыщенностью пылью жилищ и увеличением численности в них клещей в этот период. Если же симптомы заболевания регулярно появляются при контакте с животными (птицами, рыбками), в частности в цирке, в зоопарке, после приобретения домашних животных, а также при ношении одежды из шерсти или меха, это может свидетельствовать о наличии аллергии к шерсти или перхоти животных. Данные пациенты могут плохо переносить введение препаратов, содержащих белки крови животных (гетерологичные сыворотки, иммуноглобулины и т.д.). План обследования таких больных предполагает включение методов тестирования с пылевыми и эпидермальными аллергенами.
Возникшие предположения должны быть обязательно подтверждены специфическими методами обследования – кожными, провокационными и другими тестами.

Кожные тесты
Постановка кожных тестов является диагностическим методом выявления специфической сенсибилизации организма путем введения через кожу аллергена и оценки величины и характера развившегося при этом отека или воспалительной реакции. Существуют разные методы кожного тестирования с аллергенами: прик-тесты, скарификационные, аппликационные, внутрикожные тесты.
Для проведения кожного тестирования используются стандартные серийные аллергены, содержащие 10 000 единиц белкового азота (PNU) в 1 мл, изготовленные из пыльцы растений, домашней пыли, шерсти, пуха, эпидермиса животных и птиц, пищевых продуктов и другого сырья.
Техника постановки кожных тестов, показания и противопоказания к их применению, а также оценка результатов кожного тестирования проводится согласно общепринятой методике, предложенной А.Д.Адо (1969) [1].
Показанием для проведения кожных тестов являются данные анамнеза, указывающие на причинную роль того или иного аллергена или группы аллергенов в развитии заболевания.
В настоящее время известно большое количество неинфекционных и инфекционных диагностических аллергенов.
Противопоказанием для проведения кожного тестирования является наличие:

  • обострения основного заболевания;
  • острых интеркуррентных инфекционных заболеваний;
  • туберкулеза и ревматизма в период обострения процесса;
  • нервных и психических заболеваний в период обострения;
  • болезни сердца, печени, почек и системы крови в стадии декомпенсации;
  • анафилактического шока в анамнезе;
  • беременности и периода лактации.

Не рекомендуется проведение аллергологического обследования в полном объеме детям до 3-летнего возраста.
Рекомендуется воздержаться от проведения кожных проб больным в период лечения стероидными гормонами, бронхоспазмолитическими средствами и антигистаминными препаратами (эти медикаменты могут снижать кожную чувствительность), а также после острой аллергической реакции, так как в этот период пробы могут оказаться отрицательными за счет истощения кожно-сенсибилизирующих антител.
Принцип постановки кожных тестов основан на том, что нанесенный на(в) кожу причинно-значимый аллерген вступает во взаимодействие с антиген-презентирующими клетками и Т-лимфоцитами. В коже антиген-презентирующими клетками являются клетки Лангерганса и макрофаги. Результатом такого взаимодействия при наличии сенсибилизации является высвобождение медиаторов аллергии и развитие местной аллергической реакции, интенсивность которой фиксируется врачом-аллергологом в листе специфического аллергологического обследования.
Кожные пробы ставят обычно на внутренней поверхности предплечий, отступив на 5 см от лучезапястного сустава. На расстоянии 3–5 см ставят пробы с тест-контрольной жидкостью, гистамином и стандартными водно-солевыми экстрактами аллергенов для диагностики.
При аллергических заболеваниях кожи пробы ставят на участках, не затронутых повреждением (спине, животе, бедре).

Капельные и аппликационные пробы
Показания к применению капельных и аппликационных тестов:

  • подозрение на очень высокую степень чувствительности;
  • диагностика контактного дерматита;
  • диагностика профессиональных заболеваний у работников химической и нефтеперерабатывающей промышленности;
  • диагностика фотодерматозов.

Аллергены при аппликационных тестах применяют в чистом виде или в растворах, в концентрациях, не вызывающих раздражения кожи у здоровых людей.
При постановке теста на предварительно обработанную 70% спиртом кожу предплечья наносят каплю аллергена (капельная проба) или накладывают кусочек марли размером около 1 см, смоченный раствором аллергена (аппликационная проба), фиксируют ее лейкопластырем и через 24–48 ч оценивают реакцию (измеряют волдырь или гиперемию). Если реакция появляется раньше 24 ч и появляются такие симптомы, как зуд, жжение, отек, местное повышение температуры и др., марлю с аллергеном снимают раньше (при появлении выраженных симптомов реакции).
При отсутствии реакции через 48 ч, проба считается отрицательной.

Прик–тесты
Основным методом кожного тестирования при специфической аллергодиагностике является проба уколом (prick-укол), или прик-тест. Этот метод аллергодиагностики принят везде и имеет ряд преимуществ перед другими кожными пробами.
Он менее травматичен по сравнению со скарификационными пробами; требует меньшей поверхности кожи, в силу чего больным ставят большее число проб и при этом в организм поступает минимальное количество аллергенов. Техника постановки сходна с техникой постановки скарификационных проб. Вместо царапины производится укол в кожу на глубину не более 1–1,5 мм через каплю аллергена или тест-контрольной жидкости.
Для постановки прик-тестов используют специальные прик-ланцеты. Для каждого аллергена, тест-контрольной жидкости и гистамина используется отдельный ланцет. Оценку проб производят через 20 мин, измеряя образовавшийся волдырь по максимальному диаметру. По сравнению со скарификационными пробами в ответ на prick-тест значительно реже возникают ложноположительные реакции.

Скарификационные тесты
В настоящее время эксперты Европейской академии аллергологии и клинической иммунологии не рекомендуют использовать скарификационные кожные тесты для диагностики аллергии (HJ.Malling, 1993) ввиду их низкой информативности.
Хотя скарификационные тесты отличаются довольно высокой специфичностью, при их постановке могут достаточно часто возникать ложноположительные реакции. На одном предплечье одновременно можно ставить пробы с 5–6 аллергенами.
Параллельно ставят пробу с тест-контрольной жидкостью (отрицательный контроль) и со свежеприготовленным раствором гистамина 1:10 000 (положительный контроль) для суждения о реактивности кожи.
Через 10 мин капли промокают отдельными для каждой капли аллергена и контролей стерильными ватными шариками. Реакцию оценивают через 20 мин.
Шкала оценки результатов разных видов кожного тестирования представлена в табл. 1–3.

Внутрикожные тесты
Внутрикожные тесты более чувствительны, чем скарификационные, но менее специфичны. Применяют их, главным образом, для выявления сенсибилизации к аллергенам бактериального и грибкового происхождения. С неинфекционными аллергенами их проводят только в том случае, когда аппликационные или скарификационные тесты отрицательны или сомнительны, а анамнез четко положительный.
Обследованию с инфекционными аллергенами подлежат больные с подозрением на инфекционно-аллергическую форму бронхиальной астмы, крапивницы и т.д. Специфическое обследование таких пациентов представляет определенные трудности в связи с тем, что основное заболевание часто имеет непрерывно рецидивирующее течение, а также в связи с наличием множественных очагов хронической инфекции.
Прежде чем приступить к аллергологическому обследованию с инфекционными аллергенами необходимо добиться ремиссии заболевания. С этой целью предварительно проводится санация очагов хронической инфекции.
При подозрении на наличие сенсибилизации к грибкам необходимо за 2 дня до постановки внутрикожных проб с аллергенами грибков исключить из питания продукты, содержащие микроскопические грибы. К таким продуктам относятся плесневые сорта сыров, кефир, творог, пиво, шампанское, квас и др. Нельзя употреблять эти продукты в день постановки проб и на следующий день, так как при этом возможна активация местных реакций спустя 24 ч. Нежелательно также проводить постановку проб на фоне приема антибактериальных препаратов.
Техника постановки такова: кожу сгибательной поверхности предплечья или на спине обрабатывают 70% спиртом, после чего туберкулиновым или инсулиновым шприцем вводят 0,02 мл инфекционного или грибкового аллергена на расстоянии 5 см друг от друга. Вводимый внутрикожно аллерген должен быть 10-кратно меньшей концентрации, чем при скарификационном тестировании. В качестве контроля вводят внутрикожно тест-контрольную жидкость и скарификационно раствор гистамина.
Аллергия к инфекционным агентам и грибкам может протекать по немедленному и замедленному типу, поэтому результат постановки проб оценивают через 20 мин, 24 ч и 48 ч. Кроме того, у части больных наблюдаются так называемые отсроченные реакции (через 6–8 ч), которые также должны быть учтены (табл. 4).
Внутрикожные пробы отличаются меньшей специфичностью и довольно часто дают ложноположительные результаты, кроме того, они могут спровоцировать нежелательные осложнения, поэтому количество аллергенов при внутрикожном тестировании не должно превышать 3–5.
Информативность кожных тестов зависит от многих факторов, в связи с чем возможны как ложноположительные, так и ложноотрицательные результаты кожного тестирования.
Основные причины ложноотрицательных результатов кожных тестов:

  • инактивация аллергена в результате неправильного его хранения;
  • использование аллергенов с истекшим сроком годности;
  • снижение реактивности кожи (пожилой и старческий возраст, заболевания нейроэндокринной системы и др.);
  • прием пациентом в период проведения кожного тестирования антигистаминных и глюкокортикостероидных препаратов, антимедиаторных средств и других медикаментов, тормозящих высвобождение гистамина из клеток-мишеней или снижающих реактивность кожи;
  • нарушение техники проведения кожного тестирования;
  • постановка кожных тестов ранее, чем через 4 нед после системной реакции (истощение антител);
  • ранний детский возраст.


Основные причины ложноположительных результатов кожного тестирования:

  • нарушение техники проведения кожного тестирования;
  • загрязнение аллергена посторонними примесями при неправильном его хранении;
  • уртикарный дермографизм.

Результаты кожного тестирования записываются в специальный лист специфического аллергологического обследования, где указываются не только дата проведения теста и вид аллергена, но обязательно и номер серии, и изготовитель аллергена.

Провокационные тесты
Провокационные тесты являются достаточно достоверным методом диагностики. Их используют в случае расхождения данных анамнеза и результатов кожного тестирования. В зависимости от вида аллергена и способа его введения в организм различают конъюнктивальный, назальный, ингаляционный, подъязычный провокационные тесты. Противопоказания для их проведения те же, что и для кожного тестирования.
Конъюнктивальный провокационный тест применяют для диагностики аллергического конъюнктивита и выявления аллергенов, вызывающих его развитие.
Техника проведения такова: в конъюнктивальный мешок, отодвинув нижнее веко, закапывают 1–2 капли тест-контрольной жидкости. При отсутствии изменений конъюнктивы через 15–20 мин переходят к исследованию с аллергеном. Аллерген (1–2 капли) закапывают в концентрации, которая дала слабоположительную кожную пробу. При положительной реакции проявляются слезотечение, гиперемия конъюнктивы, зуд век.
Назальный провокационный тест применяют для диагностики аллергического ринита.
Техника его проведения: в одну половину носа пипеткой вводят 2 капли тест-контрольной жидкости. При отсутствии симптомов аллергического воспаления через 15–20 мин закапывают 2 капли аллергена в разведении 1:100 (100 РNU) или при подозрении на очень высокую степень сенсибилизации – 1:1000 (10 PNU). При положительной реакции появляются чиханье, зуд в носу, ринорея.
Ингаляционный провокационный тест обычно применяют для выявления бронхиальной астмы, в основном с целью дифференциальной диагностики (бронхиальная астма, обструктивный бронхит и т.п.), только в фазе ремиссии в стационарных условиях. Перед постановкой теста предварительно регистрируют параметры функции внешнего дыхания (объем форсированного выдоха в течение первой секунды – ОФВ1, ФЖЕЛ, коэффициент Тиффно). Исходный уровень ОФВ1 должен быть не менее 70% от должного значения.
Затем испытуемый вдыхает сначала контрольный раствор, а затем раствор аллергена, начиная с дозы минимальной концентрации, до той, которая даст заметную реакцию. Тест считается положительным при снижении ФЖЕЛ и индекса Тиффно более чем на 20%.
По рекомендации, предложенной экспертами Европейского респираторного общества, ингаляционный провокационный тест при бронхиальной астме проводится с помощью дозирующего струйного небулайзера по следующей методике: сначала проводятся последовательные ингаляции разводящей жидкости, затем – двукратные разведения аллергена: 1:1024; 1:512 … 1:16. Через каждые 10 мин после очередной ингаляции аллергена трехкратно регистрируют ОФВ1. После последнего введения аллергена ОФВ1 измеряют в течение часа каждые 10 мин, затем через 90, 120 мин и далее каждый час, в течение 7 часов. Тест считают положительным при снижении ОФВ1 на 20% и более от исходного значения.
Провокационный ингаляционный тест с карбахолином (ацетилхолином) используется для подтверждения диагноза бронхиальной астмы.
Провокационный ингаляционный тест с холодным воздухом применяется для исследования неспецифической гиперреактивности бронхов.
Подъязычный провокационный тест используется для диагностики пищевой и лекарственной аллергии. Аллерген наносится на слизистую оболочку подъязычной области. При пищевой аллергии применяются натуральные продукты в разведении 1:10, при лекарственной — 1/8–1/4 разовой дозы растворенного вещества. Тест считается положительным при появлении в подъязычной области гиперемии, отека, зуда, а также при учащении пульса, чиханье, кашле.
Для диагностики лекарственной аллергии применяется также тест торможения естественной эмиграции лейкоцитов (ТТЕЭЛ). Данный тест высокоспецифичен и безопасен.
Показания к применению ТТЕЭЛ in vivo:

  • для специфической диагностики лекарственной аллергии у больных с указаниями в анамнезе на непереносимость медикаментов и показаниях к их применению;
  • у больных с атопическими заболеваниями (бронхиальная астма, поллиноз, атопический дерматит) при показаниях к применению антибактериальных и других препаратов;
  • для подтверждения лекарственной аллергии в клинике профессиональных заболеваний.

Абсолютные противопоказания к применению ТТЕЭЛ in vivo:

  • полное отсутствие зубов в полости рта;
  • острая стадия воспалительных заболеваний в полости рта (острый парадонтит, ангина, стоматит и др.);
  • острые аллергические заболевания.

Для исследования используются водорастворимые формы медикаментов. Начальная концентрация препарата – 1 мкг/мл. В один день можно проводить только одно исследование с одним препаратом и одной его концентрацией. Проведение теста не рекомендуется на фоне приема антигистаминных и глюкокортикостероидных препаратов, иммунодепрессантов. Обследование рассчитано на 1,5 ч и состоит из 2 этапов. При подсчете лейкоцитарных клеток в собранном для исследования материале снижение числа лейкоцитов (нейтрофилов) более чем на 30% оценивается как положительный тест. Результаты теста фиксируются на специальном бланке, который вкладывается в историю болезни пациента.

Методы лабораторной диагностики
Основными показаниями для назначения лабораторных методов аллергодиагностики, которые проводятся in vitro, являются:

  • ранний детский возраст;
  • пациенты с высокой степенью сенсибилизации;
  • непрерывно рецидивирующее течение заболевания без периодов ремиссии;
  • невозможность отмены антигистаминных и других препаратов;
  • поливалентная сенсибилизация, когда отсутствует возможность проведения тестирования in vivo сразу со всеми предполагаемыми аллергенами в ограниченные сроки обследования;
  • резко измененная реактивность кожи;
  • ложноположительный или ложноотрицательный результат при кожном тестировании;
  • уртикарный дермографизм.

Основными преимуществами методов специфической диагностики in vitro являются:

  • безопасность для больного;
  • возможность проведения исследования в случае, когда пациент находится от аллерголога на большом расстоянии и доставлена лишь сыворотка больного;
  • недостаточное количество крови для исследования.

В клинической практике наиболее широко используются следующие методы специфической диагностики, проводимые in vitro:

  • метод иммуноферментного анализа (ИФА) для определения специфических IgE (рис. 1);
  • радиоаллергосорбентный тест (РАСТ) для выявления специфических IgE (рис. 2);
  • непрямой базофильный тест (тест Шелли);
  • прямой базофильный тест (тест Шелли);
  • реакция специфического высвобождения гистамина из базофилов периферической крови больного(по P.Scov, S.Norne, B.Weeke).
  • ИФА, радиоаллергосорбентный тест, непрямой и прямой базофильные тесты являются вспомогательными методами специфической аллергодиагностики при реакциях немедленного типа.

Иммуноферментный анализ в настоящее время является одним из распространенных методов исследования. С помощью ИФА производится количественное определение аллергенспецифических IgE в крови больного.
Принцип метода заключается в том, что на первом этапе исследования испытуемый аллерген ковалентно связывается с твердой фазой (бумажный диск, активированный полимер и др.).
При добавлении сыворотки больного происходит связывание аллергена, фиксированного на твердой фазе, с антителом, если в сыворотке присутствуют соответствующие данному аллергену антитела. После отмывания несвязавшихся IgE добавляются антитела против IgE, меченные флуорохромом (пероксидазой хрена, бета-галактозидазой и др.). Происходит образование комплекса: аллерген на твердой фазе + специфический IgE + антитела анти-IgE (антитела против IgE). Несвязавшиеся антитела удаляются.
Уровни специфического IgE-связывания определяются по интенсивности свечения (реакция оценивается в интервале 1–4 класса). Чем выше показатель свечения по отношению к негативному контролю (сыворотка, в которой отсутствуют специфические IgE-антитела), тем больше специфических IgE в сыворотке пациента. Специфический характер реакции учитывается на основе позитивного контроля (IgE-связывание интенсивностью 4 класса). Ценность этого метода состоит в том, что для его проведения сразу с большим количеством аллергенов требуется небольшое количество сыворотки.

Радиоаллергосорбентный тест (РАСТ)
С помощью этого метода также производится количественное определение аллергенспецифических IgE в крови. Аллерген, соединенный ковалентно с бумажным диском, реагирует со специфическим IgE крови больного. После отмывания неспецифического IgE добавляют радиоактивно меченный (125I) анти-IgE. Образуется комплекс специфический IgE + меченый анти-IgE. Радиоактивность этого комплекса измеряют с помощью гамма-счетчика. Чем больше радиоактивность, тем выше содержание специфического IgE в крови больного.
Для измерения общего и аллерген-специфических IgE используют стандартные наборы (панели) аллергенов.
Для определения IgE в сыворотках крови больных применяют методы, основанные на эффекте хемилюминесценции. Принцип постановки теста такой же, как и при ИФА и радиоаллергосорбентном тесте, однако в качестве индикатора реакции используются фотореагенты (А, B, C, D), свечение которых (тест MAST-CLA(Cl1)) регистрируется на пленке Polaroid, на люминометре, на фотометре (рис. 3).
Специфические антигены обнаруживают при помощи ELISA-теста (рис. 4).
Для диагностики аллергических реакций, протекающих по механизмам гиперчувствительности замедленного действия, например при пищевой и лекарственной аллергии, применяют тест бласттрансформации лимфоцитов (рис. 5).

Непрямой базофильный тест (тест Шелли)
Этот тест основан на изучении морфологических изменений базофилов в результате взаимодействия сыворотки больного и специфического аллергена. Краситель нейтральный красный избирательно окрашивает гранулы базофилов в кирпично-красный цвет, что позволяет их отличать от других клеток. Реакцию наблюдают под микроскопом с иммерсионной системой.
Неизмененные базофилы имеют округлую форму; гранулы, окрашенные краской, располагаются внутри клетки.
Положительная реакция проявляется в деформации клеток, образовании псевдоподий, усиленном движении гранул и в редких случаях – выходом гранул из клетки с разрывом ее. В каждом препарате насчитывают 40 базофилов, вычисляют процент морфологически измененных клеток и в опыте, и в контроле.
Условно выделяют 3 степени реакции: слабую (процент измененных базофилов в опыте превышает таковой в контроле на 10%), умеренную (на 15%), резко положительную (на 20% и более). Во всех случаях имеются в виду результаты контроля с наивысшей неспецифической реакцией базофилов.

Прямой базофильный тест (тест Шелли)
Данный тест основан на изучении морфологических изменений базофилов периферической крови пациента с аллергическим заболеванием при взаимодействии со специфическим аллергеном. Оценка реакции проводится аналогично оценке при непрямом базофильном тесте.
Реакция высвобождения гистамина (по P.Scov и соавт.) из базофилов периферической крови человека основана на учете процента высвобождения гистамина после обработки базофильных клеток специфическими аллергенами.
Данные методы выявляют только состояние сенсибилизации, т.е. наличие антител при немедленном типе гиперчувствительности свидетельствует о том, что у обследуемого имел место контакт с данным аллергеном. Указанные тесты не могут являться бесспорным доказательством того, что на данный аллерген разовьется аллергическая реакция, так как для возникновения и проявления аллергической реакции недостаточно лишь наличия сенсибилизации и аллергена. Необходим еще ряд дополнительных условий. Методы лабораторной диагностики рассматривают в качестве дополнительных мер, позволяющих уточнить сомнительные результаты тестирования in vivo. Постановка диагноза должна основываться в основном на данных аллергоанамнеза, осмотра больного, результатах постановки кожных проб и провокационных тестов, а также данных общеклинического обследования пациента.

Клинико-лабораторные методы исследования
Клинико-лабораторные методы исследования должны включать: клинический анализ крови (количество эритроцитов и лейкоцитов, Hb, цветной показатель, СОЭ, гемограмму с подсчетом ретикулоцитов, тромбоцитов, базофилов, эозинофилов, палочкоядерных лейкоцитов, сегментноядерных лейкоцитов, лимфоцитов, моноцитов), биохимический анализ крови по показаниям (общий белок, белковые фракции, фибриноген, остаточный азот, мочевина, мочевая кислота, креатинин, билирубин общий, прямой, непрямой, АСТ, АЛТ, холестерин, ЛДГ, бета-липопротеиды, тимоловая проба, сулемовая проба, С-реактивный протеин, серомукоид, альфа-амилаза, фосфолипиды и др. по показаниям), анализ мочи, бактериологические исследования (посевы флоры из очагов инфекции с определением чувствительности флоры к антибактериальным средствам, определение микрофлоры кишечника и др. по показаниям), осмотр специалистов, а также рентгенологические, функциональные и инструментальные (ЭКГ, ФВД, УЗИ органов брюшной полости и малого таза и др. по показаниям) методы исследования.
В заключение следует отметить, что для успешной диагностики аллергических заболеваний важнейшее значение имеют правильный анализ и адекватная оценка результатов сбора данных истории жизни и болезни пациента, сбора аллергологического, фармакологического и пищевого анамнеза, нередко позволяющие после первой встречи с больным установить правильный диагноз.
В сложных случаях только комплексное обследование, назначенное с учетом особенностей клинического течения и возможных механизмов формирования аллергического заболевания, сможет разрешить проблемы, возникшие при его диагностике.

Литература
1. Адо А.Д. и др. Применение аллергенов неинфекционного происхождения для специфической диагностики и десенсибилизации больных аллергическими заболеваниями. Методическое письмо. М.: МЗ СССР, 1969.
2. Дранник Г.Н. Клиническая иммунология и аллергология. Одесса: АстроПринт, 1999; 416–23.
3. Пыцкий В.И., Адрианова Н.В, Артомасова А.В. Аллергические заболевания. М.: Триада – Х, 1999; 102–12.
4. Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д. Иммунология. М.: Мир, 2000; 424–7.
5. Соколова Т.С., Рошаль Н.И. М.: Медицина. 1990; 17–40.
6. Федосеева В.Н., Порядин Г.В. и др. Руководство
по аллергологии и клинической иммунологии. Львов, 1997; 189–93.

Диагностика инфекционных заболеваний

Диагностика инфекций (infectio – перевод с латинского – заражение). Инфекционные заболевания человека представляют собой группу болезней, вызываемых специфическими болезнетворными возбудителями, которые могут передаваться от зараженного человека здоровому. Нередки и случаи передачи патогенных агентов человеку от носителей инфекций или заболевших животных (зоонозные заболевания). Следует отметить, что большинство зоонозных инфекционных заболеваний не передается от человека к человеку. У человека и животных (домашних и диких плотоядных) насчитывают более 300 общих инфекционных возбудителей, из которых более 80 заболеваний вызываются бактериями, свыше 100 – вирусами, около 20 — грибами, 80 заболеваний связано с заражением гельминтами и около 20 — простейшими.

Известны инфекционные болезни, вызываемые, так называемыми арбовирусами – вирусами, передающимися людям через укусы насекомых, например клещей, комаров, блох и др., которые инфицируются от домашних или диких животных. Самая распространенная известная арбовирусная инфекция – клещевой энцефалит. Вирус геморрагической лихорадки также передается клещами. Как известно, клещи являются переносчиками и бактериальных инфекций, например клещевого боррелиоза (болезнь Лайма) или туляремии, хотя туляремию относят к зоонозным заболеваниям, передающимся человеку при непосредственном контакте с больными животными (грызунами), а также при употреблении зараженных продуктов или воды (алиментарный путь заражения). Таким образом, для каждой инфекции у человека характерен свой возбудитель и определенный путь передачи. Возбудителями инфекций могут быть бактерии, вирусы, риккетсии (микроорганизмы, сочетающие в себе особенности бактерий и вирусов), спирохеты, грибки, протозойные (паразитирующие простейшие, одноклеточные), глисты, которые выводятся из организма больного человека или животного при выдохе, мочеиспускании, дефекации, кашле, рвоте, и когда при определенных условиях этот биологический патологический материал становится источником заражения здорового человека.

Согласно литературным данным в настоящее время известно 1415 возбудителей инфекционных и паразитарных болезней. Наиболее обширную группу составляют болезни, вызываемые бактериями и риккетсиями (538 нозологий). Второе место принадлежит паразитарным болезням — 353 нозологии. Вирусные инфекции составляют 217 нозологий. Постоянно возникают новые или впервые выявленные инфекционные заболевания. Так, начиная, с 1970-х голов ежегодно регистрируется, по крайней мере, одно инфекционное заболевание. За последние годы стали известны более 30 инфекционных заболевании, это и ВИЧ, легионеллез, эпидемический ротавирусный гастроэнтерит и ряд африканских лихорадок (например лихорадка Эбола).

В настоящее время существенную роль в распространении инфекционных болезней играет развитие туризма, а также миграционные процессы.

Классификация инфекционных заболеваний

Что касается классификации основных инфекционных болезней человека, то существуют разные системы группировки инфекционных заболеваний. В нашей стране одной из наиболее распространенных является классификация Л.В. Громашевского, построенная в зависимости от локализации возбудителя в организме и механизме его передачи, таких групп насчитывается 5:

  • кишечные инфекции;
  • инфекции дыхательных путей;
  • кровяные инфекции;
  • инфекции наружных покровов;
  • инфекции с различными механизмами передачи, например передающиеся половым путем, воздушно-капельным путем (один из самых распространенных), фекально-оральный, контактный, трансмиссионный, вертикальный от матери к плоду, от матери к новорожденному в родовом акте, внесенные при операциях, инъекциях и т.п.)

Кроме того в РФ принята также международная более многоступенчатая классификация инфекционных заболеваний:

  • кишечные инфекции;
  • туберкулез;
  • бактериальные зоонозы;
  • другие бактериальные заболевания;
  • полиомиелит и энтеровирусные болезни центрально нервной системы;
  • вирусные заболевания, сопровождающиеся высыпаниями;
  • вирусные заболевания,которые передаются членистоногими;
  • другие вирусные заболевания;
  • риккетсиозы и другие инфекции, передаваемые членистоногими;
  • сифилис и другие венерические инфекции;
  • заболевания. которые вызываются спирохетами;
  • грибковые заболевания (микозы);
  • гельминтозы;
  • другие инфекции и паразитарные заболевания.

Инфекционные заболевания вызывают у пациента значительные изменения в картине крови, при многих инфекционных болезнях изменяется функция различных внутренних органов – печени, сердца, легких, мозга, почек, кишечника, практически все инфекционные заболевания протекают с изменениями широкого спектра биохимических параметров, отражающих различные стороны патогенеза. Установлено также, что, к примеру, вирусы краснухи, герпеса, коксаки, полиомиелита, цитомегаловирус и эховирусы (род энтеровирусов) могут вызывать серьезные нарушения в развитии плода и новорожденного. Кроме того в настоящее время есть основания считать, что некоторые группы вирусов могут быть виновниками возникновения диабета первого типа, к ним относят вирус Коксаки, вирус краснухи, реовирус 3 типа, вирус энцефаломиокардита, вирус эпидемического паротита, цитомегаловирус, вирус гепатита А.


Диагностика инфекций

Диагноз инфекционного заболевания основывается на анамнезе больного, эпидемиологическом анамнезе, включает инструментальные методы обследования и, как правило, диагностика инфекционных заболеваний не обходится без использования комплекса лабораторных методов. Диагностика инфекционного заболевания начинается с базовых лабораторных методов исследования: это – клинический анализ крови. Известно, например, что в клиническом анализе крови лейкоцитоз чаще всего выявляется в результате инфекционного заболевания, что многие вирусные, бактериальные и рикетсиозные болезни приводят к нейтропении (снижение нейтрофилов), а частой причиной лимфоцитоза и/или моноцитоза является инфекционный мононуклеоз.

Такой показатель крови, как скорость оседания эритрорцитотв (СОЭ), не являясь самостоятельным диагностическим показателем в силу своей неспецифичности, является индикатором общего неблагополучия и продолжает активно использоваться в медицинской практике для выявления и мониторирования инфекционных и воспалительных заболеваний различного происхождения.

Общий анализ мочи является лабораторным тестом, который часто используется при исследования инфекционных заболеваний не только почек, но и инфекций другой локализации.

Так некоторые инфекционные заболевания сопровождаются протеинурией нефротического типа (количество белка в моче не менее 3г/л). Например хронические инфекционные заболевания могут стать причиной нефротического синдрома. Развитие протеинурии нефротического типа могут вызвать, например, бактериальный эндокардит, туберкулез, сифилис, лепра, гепатит В и С, мононуклеоз, цитомегаловирусная инфекция, ветряная оспа, малярия, токсоплазмоз, шистосомиаз. Появление в моче бактерий и возникновение воспаления указывает на наличие инфекционного заболевания мочеполовой системы.

Достаточно эффективным при инфекционных заболеваниях является использование комплекса биохимических тестов, поскольку количественные и качественные изменения биохимических показателей в крови происходящие во время болезни, отражают происходящие при заболевании биохимические нарушения и позволяют следить за динамикой патологического процесса и адекватностью лечения.

К таким эффективным биохимическим параметрам, которые исследуются при инфекционных и воспалительных заболеваниях другого происхождения, например, относится – спектр белков сыворотки крови (белки острой фазы), ферменты и некоторые другие биохимические показатели. Использованием специфических лабораторных методов, например, при диагностике причин лихорадки неясного генеза, хронических инфекций выполняют ис.

В практической медицине часто требуется более глубокое лабораторное исследование с следования мазков из горла, посевы крови, мочи и других жидкостей и выделений организма для выявления бактерий, грибков, иногда, при изменениях характера стула, назначают исследования кала на яйца глист.

В настоящее время в лабораторной диагностике для выявления инфекционных возбудителей широко используются следующие специфические лабораторные методы:

  • микроскопические методы, позволяющие идентифицировать инфекционного возбудителя в биологическом патологическом материале с помощью разнообразных типов микроскопов после приготовления окрашенных или нативных мазков.
  • Культуральный (бактериологический) метод, который заключается в выделении чистой культуры возбудителя из патологического материала, с дальнейшей его идентификацией по морфологическим, культуральным, биохимическим, антигенным, токсикогенным (применяя специфические методы) свойствам и определение его чувствительности к антибиотикам и другим химиотерапевтическим препаратам. Эти исследования часто проводят при подозрении на гнойно-воспалительные заболевания.
  • Серологические исследования, в основе которых лежит специфическое взаимодействие антигена и направленных к нему антител. Эти исследования позволяют с диагностической целью определять (качественно и количественно) как антигены так и антитела к ним. Использование в лабораторной практике таких серологических методов как: ИФА(иммунофементный анализ), иммунофлюоресцентный, иммунофлюоресцентныф анализ — позволяет определять в крови больного антитела, относящиеся к различным классам иммуноглобулинов (ИГ А, ИГ М, ИГ Ж). Существование определенной закономерности в динамике выработки специфических антител различных классов при инфекционном заболевании позволяет судить как о стадии так и об интенсивности инфекционного процесса.
  • Молекулярно-биологические методы, к которым относится полимеразная цепная реакция (ПЦР-метод).

В основе ПЦР-диагностики лежит молекулярно-биологический метод амплификации (многократное копирование) малых фрагментов нуклеиновых кислот бактерий, вирусов, хламидий, микоплазменных и др. с помощью фермента ДНК- полимереразы. ПЦР-диагностика позволяет провести прямую идентификацию нуклеиновых кислот(РНК или ДНК), то есть генетического материала, инфекционного агента в различном биологическом материале.

Современные методы диагностики аллергических заболеваний. — презентация

Презентация была опубликована 5 лет назад пользователемПолина Гордеева

Похожие презентации

Презентация на тему: » Современные методы диагностики аллергических заболеваний.» — Транскрипт:

1 Современные методы диагностики аллергических заболеваний

2 Аллергия Аллергия ( allos – другой, иной) — измененная форма реакции организма при повторном контакте с антигеном (Пирке 1906 г.). Используется как синоним понятия «гиперчувствительность». 1. Иммунные реакции чрезмерной интенсивности — неадекватные тому нарушению, которое может вызывать антиген. 2. Иммунные реакции на безвредные в норме антигены, например, на питательные вещества.

3 Аллергены Это антигены, вызывающие аллергические реакции. Особые свойства: Чаще белки (протеазы). Если не белки, то вещества, способные соединяться с белками организма. Невысокая молекулярная масса. Способны сорбироваться или аггрегироваться в мелкие частицы и проникать в покровные ткани без их травмирования Химически стабильны in vivo

4 Наиболее распространённые аллергены Белки Пищевые – яйца, молоко, орехи, ракообразные, бобовые Яды пчел, ос Компоненты вакцин (кори, гриппа, столбнячного токсоида) Гормоны (инсулин, АКТГ, ТСГ) Сыворотки и препараты крови Ферментные препараты Латекс (хирургические перчатки, презервативы и т.д.) Белковые компоненты клещей, пыльцы трав и т.д. Гаптены Антибиотики (пенициллин, цефалоспорин) Миорелаксанты Витамины Цитостатики Нестероидные противовоспалительные препараты Опиаты Полисахариды (декстран, декстран-железо).

5 Сравнительная частота аллергических реакций в различных социальных слоях ПоказательАборигеныЦивилизованные жители Частота гельмитозов 88%Менее 10% Частота аллергичес- ких реакций Менее 2%Более 43%

6 Гиперчувствительность I типа Клинические проявления: астма, сенная лихорадка, крапивница, пищевая аллергия. Диагностика: определение IgE, реакций ТК.

7 Патогенетические факторы атопии:

8 Нарушения Т-клеточной регуляции

9 Гиперчувствительность II типа (цитотоксичекая) Клинические проявления: лекарственная аллергия, ГБН, постранфузиологические реакции, системные заболевания соединительной ткани. Диагностика: определение АТ к эритроцитам, тромбоцитам и т.д.

10 Гиперчувствительность III типа (иммунокомплексная) Клинические проявления: персистирующие инфекции, аутоиммунные заболевания, вдыхание антигенного материала. Диагностика: определение ИК в тканях!

11 Гиперчувствительность IV типа (замедленная) Клинические проявления: контактная аллергия, хронические инфекции (внутриклеточный тип паразитирования) Диагностика: РБТЛ

12 Следует запомнить: 1.Аллергия является частным проявлением реакций гиперчувствительности. 2.Аллергия может развиваться по любому из механизмов гиперчувствительности, возможен сочетанный механизм. 3.Атопия – это только аллергическая реакция I типа. Встречается наиболее широко. 4.Диагностика аллергических реакций основана на учете механизмов их развития

13 Общие подходы к диагностике аллергии: Задачи: 1. Подтвердить аллергический характер процесса 2. Выявить причинный аллерген Основные этапы: 1. Сбор аллергоанамнеза 2. Физикальное обследование 3. Проведение кожных проб 4. Провокационные тесты 5. Лабораторное обследование

14 Кожные пробы Кожные пробы проводят для выявления роли того или иного аллергена в генезе заболевания при условии отсутствия противопоказаний (острая фаза аллергии, обострение хронического заболевания, декомпенсированные состояния, судорожные синдромы, беременность и др.). Виды кожных проб: Накожные (чаще для выявления сенсибилизации к химическим веществам). Скарификационные — (чаще для выявления сенсибилизации к инфекциям, пищевым АГ). Тест-уколом (prik-test) – самый распространённый Внутрикожные — (чаще с инфекционными АГ). Выбор теста зависит от предполагаемой этиологии и степени сенсибилизации больного.

15 Провокационные тесты Различают: ( в зависимости способа введения) – назальный, коньюктивальный, ингаляционный, подъязычный, оральный. Применение: при расхождении данных анамнеза и результатов кожного тестирования. Преимущество: большая достоверность результатов. Недостаток: высокий риск осложнений. Используют чаще всего при пищевой аллергии.

16 Пищевая аллергия Распространённость: 0,1-7%. Мужчины чаще. Наиболее аллергенны белки (яйца, коровье молоко, ракообразные, орехи и т.д.). Жиры, углеводы и микроэлементы чаще дают ложные аллергические реакции. Механизм развития – чаще I типа. Возможны перекрёстные аллергические реакции.

17 Особенности сбора анамнеза при подозрении на пищевую аллергию 1.Определяют характер (поражение ЖКТ, кожи, органов дыхания и др.) и тяжесть пищевой аллергии. Выясняют, в каком возрасте эти реакции возникли впервые. Выявляют провоцирующие факторы, связь между употреблением отдельных продуктов и появлением симптомов аллергии. 2.Определяют, какие пищевые добавки входят в рацион больного. Страдает ли больной другими аллергическими заболеваниями. Обращают внимание на наличие атопических заболеваний в семейном анамнезе. 3.При желудочно-кишечных нарушениях выясняют, какие продукты употреблял больной в последнее время. Исключают кишечные инфекции. У детей и подростков регулярно измеряют вес и рост и сравнивают эти показатели с возрастными нормами.

18 Клинико-лабораторное обследование при пищевой аллергии. 1.Провокационные пробы и элиминационные диеты. 2.Prik-тест или скарификационные пробы с экстрактами пищевых АГ (частые ложноположительные результаты). Большее значение имеют отрицательные пробы. 3.Определение IgE в сыворотке: Общий IgE — признак атопии, но не патогномоничный Специфический IgE — позволяет выявить причинный АГ, но менее чувствителен, чем кожные пробы. Общий анализ крови – эозинофилия ФГДС Исследование печени

19 Лечение пищевой аллергии Лечение начинают только после окончательного подтверждения диагноза. А. Основной метод лечения исключение из рациона продуктов, вызывающих аллергию и перекрестные реакции. 1. Если аллергию вызывают сразу несколько продуктов – элиминационная диета. 2. К некоторым продуктам пищевая аллергия может исчезнуть, что позволяет приблизительно через 2 года вернуть исключенные продукты в рацион. N.B! При системных аллергических реакциях в анамнезе на какой- либо пищевой продукт вводить его в рацион нельзя. Пищевая аллергия, возникшая в старшем детском и зрелом возрасте, а также аллергия арахису, рыбе и ракообразным, как правило, не исчезает. Б. Медикаментозное лечение 1) при аллергии сразу к нескольким пищевым продуктам и неэффективности элиминационной диеты, 2) при невозможности избежать употребления аллергенных продуктов, 3) при невозможности определить причину пищевой аллергии. В. Десенсибилизация ?

20 Классификация осложнений медикаментозного лечения У стационарных больных осложнения лекарственной терапии наблюдаются в 1530% случаев. Осложнения, обусловленные действием лекарственных средств 1. Осложнения, не связанные с измененной чувствительностью к лекарственным средствам а. Токсическое действие — при передозировке препарата, дозозависимо. б. Побочное действие – при применении препаратов в терапевтических дозах. в. Побочные действия вследствие взаимодействия лекарств. 2. Осложнения, связанные с измененной чувствительностью к лекарственным средствам а. Непереносимость появление побочных эффектов при назначении лекарственных средств в низких дозах. б. Идиосинкразия качественно измененная реакция на препарат. Обусловлена неиммунными механизмами, хотя клинически может быть сходна с аллергией. в. Лекарственная аллергия — обусловлена выработкой антител или появлением T-лимфоцитов, специфичных к препарату или его метаболитам.

21 Основные признаки лекарственной аллергии 1) Наблюдается у незначительной части больных и возникает даже при назначении препарата в низких дозах. 2) Развивается только при повторном применении препарата. (помнить! больные могут не знать о том, что они уже принимали какой-либо препарат). 3) Между первым применением препарата и появлением лекарственной аллергии обычно проходит несколько суток. 4) Проявления лекарственной аллергии не схожи с терапевтическим и побочным действиями лекарственных средств или симптомами основного заболевания. 5) Через 35 сут после отмены препарата все проявления исчезают или становятся менее выраженными. 6) При повторном применении препарата аллергическая реакция развивается вновь. 7) Наиболее часто возникает на пенициллины и препараты, содержащие сульфонамидную группу: сульфаниламиды, производные сульфанилмочевины, тиазидные диуретики, ингибиторы карбоангидразы.

22 Механизмы лекарственной аллергии Лекарственная аллергия может развиваться по любому типу гиперчувствительности: Немедленного типа крапивница, отек Квинке, бронхоспазм, анафилактические реакции. Развиваются в течение 30 мин после введения препарата. Наиболее частая причина – пенициллины. Анафилактоидные реакции сходны с анафилактическими, но развиваются без участия иммунных механизмов. Наиболее частая причина — рентгеноконтрастные средства, полимиксины, аспирин, местные анестетики. Цитотоксические аллергические реакции: а. Гематологические нарушения аутоиммунные гемолитическая анемия, тромбоцитопения, агранулоцитоз. б. Поражение почек интерстициальный нефрит (вызывают метициллин, фенитоин)

23 Иммунокомплексные аллергические реакции Чаще всего вызывают пенициллины. Проявления — крапивница, пятнисто- папулезная сыпь, лихорадка, артралгия (крупные суставы), реже увеличение лимфоузлов, гломерулонефрит, периферическая нейропатия, системный васкулит. Лекарственный волчаночный синдром чаще всего возникает при применении гидралазина и прокаинамида. Проявления сходны СКВ. Васкулиты кожи (и других органов) — обычно проявляются геморрагической сыпью на ногах, лихорадкой, артралгией. Часто при применении сульфаниламидов.

24 Аллергические реакции замедленного типа: A.Аллергический контактный дерматит развивается после местного применения лекарственных средств. Может быть вызван действующим веществом препарата или содержащимися в нем консервантами. B.Интерстициальный пневмонит вызывают препараты золота, нитрофурантоин. C.Энцефаломиелит и интерстициальный нефрит, развивающиеся после вакцинации живыми вирусными вакцинами.

25 Клинические признаки лекарственной аллергии Сыпь, обычно пятнистая или пятнисто- папулезная, самый частый признак лекарственной аллергии. Характерны: внезапное появление, симметричное расположение, преобладающее поражение туловища, яркий цвет, выраженный зуд. На фоне сыпи может развиться эритродермия, нередко сопровождающаяся вторичной инфекцией.


26 Диагностика лекарственной аллергии А. Анамнез. Чрезвычайно важен. Лабораторные методы диагностики неспецифичны. При сборе анамнеза обратить внимание. 1. Какие лекарственные средства принимает больной (учесть все препараты, даже редко вызывающие аллергию и ранее применявшиеся больным в отсутствие побочного действия). 2. Время между применением препарата и появлением побочных действий (лекарственная аллергия — через 7 10 сут после начала лечения). 3. Путь введения препарата, продолжительность лечения, применялся ли раньше. Риск лекарственной аллергии повышается при частом назначении препаратов для парентерального введения в высоких дозах. Быстрое улучшение состояния после отмены препарата подтверждает диагноз лекарственной аллергии.

27 Б. Иммунологические исследования. Необходимо Выявить сенсибилизацию к препарату или его метаболитам. Проблема! Большинство лекарственных средств сами по себе не вызывают иммунный ответ. При аллергических реакциях немедленного типа Кожные пробы 1) Учет – в ответ на внутрикожное введение антигена гиперемия и волдырь в месте инъекции. 2) Возможны с небольшим количеством препаратов, имеющим не менее двух антигенных детерминант, например, пенициллин. 3) Частые ложноположительные реакции. При аллергических реакциях замедленного типа 1. Аппликационные пробы при подозрении на контактную аллергию. 2. В остальных случаях неинформативны.

28 Лабораторные исследования в диагностике лекарственной аллергии 1. Определение уровня специфических IgE (РАСТ), реакции высвобождения гистамина тучными клетками – позволяет выявлять реакции 1 типа. РАСТ менее чувствителен, чем кожные пробы. 2. Выявление специфических IgG и IgM — при лекарственной аллергии, обусловленной цитотоксическими аллергическими реакциями. 3. РБТЛ — для диагностики лекарственной аллергии, обусловленной аллергическими реакциями замедленного типа. Малоинформативна при аллергии, вызванной гаптенами. 4. Оценка продукции цитокинов.

29 Профилактика лекарственной аллергии Основные принципы профилактики: 1) избегать применения лекарственных средств, которые часто вызывают аллергию, 2) тщательно собирать аллергологический анамнез, 3) помнить о перекрестных реакциях на лекарственные средства со сходными антигенными свойствами. Чаще всего перекрестные реакции наблюдаются между: 1) пенициллинами и цефалоспоринами, 2) разными аминогликозидами (стрептомицином, канамицином, неомицином и гентамицином), 3) производными парааминобензола (сульфаниламидами, производными сульфанилмочевины, тиазидными диуретиками, прокаином, прокаинамидом). Профилактика особенно важна у больных с лекарственной аллергией в анамнезе.

30 Лечение лекарственной аллергии A.Отмена препарата, который вызвал аллергическую реакцию, наиболее эффективный способ лечения лекарственной аллергии. Если аллергия вызвана приемом нескольких препаратов — сначала прекращают применение тех препаратов, отмена которых не приведет к существенному ухудшению состояния и которые чаще всего вызывают аллергию. B.Симптоматическое лечение.

Принципы диагностики аллергических заболеваний

Общие положения

Диагностику необходимо проводить с целью выяснения факторов и причин, способствующих возникновению аллергических заболеваний.

Для диагностики аллергических заболеваний применяются следующие методы обследования:

Клинические методы обследования и исследования включают:

  • сбор анамнеза;
  • врачебный осмотр;
  • инструментальные методы;
  • клинико-лабораторные методы;
  • функциональные методы и др.

Основу специфической диагностики составляет выявление аллергена. С этой целью определяют:

  • специфические $IgE$ – аллергические антитела;
  • сенсибилизированные лимфоциты;
  • продукты специфического взаимодействия антител и антигенов.

Сбор аллергологического анамнеза

Во время опроса особенно обращают внимание на:

  • семейный анамнез аллергии;
  • особенности появления первых симптомов заболевания;
  • динамику развития симптомов;
  • интенсивность проявления;
  • длительность и чувствительность к медицинским препаратам;
  • сезонность заболевания;
  • связь с острыми респираторными вирусными или бактериальными инфекционными заболеваниями;
  • связь заболевания с изменением жилищных, климатических, рабочих условий;
  • жилищно-бытовые условия (наличие ковров, мягкой мебели, домашних животных, птиц, рыб, книг и др.).

Попробуй обратиться за помощью к преподавателям

  • фармакологический анамнез (развитие аллергической реакции в зависимости от приема медицинского препарата, ее продолжительность, объем предоставленного лечения и его эффективность);
  • пищевой анамнез (развитие аллергической реакции в зависимости от употребления определенного продукта – мед, яйца, рыба, некоторые фрукты и овощи и др.).

Кожные тесты

Существуют разнообразные методы кожного тестирования с аллергенами:

  • рrick-тесты;
  • скарификационные тесты;
  • внутрикожные тесты;
  • аппликационные тесты.

С ингаляционными и пищевыми аллергенами кожное тестирование проводят с целью диагностики исключительно $IgE$-зависимых аллергических заболеваний.

При кожном тестировании применяют стандартные серийные водно-солевые экстракты аллергенов. Их приготавливают из:

  • домашней пыли,
  • пыльцы растений,
  • шерсти,
  • клещей домашней пыли,
  • пуха,
  • пищевых продуктов,
  • эпидермиса птиц и животных и др.

Противопоказаниями для проведения тестов являются:

  • беременность и период лактации;
  • острые интеркуррентные инфекции;
  • заболевания в период обострения (ревматизм и туберкулез, нервные и психические заболевания);
  • болезни сердца, системы крови, печени и почек в стадии декомпенсации;
  • анафилактический шок в анамнезе.

Задай вопрос специалистам и получи
ответ уже через 15 минут!

Не рекомендуется проводить в полном объеме аллергологическое обследование детям до трех лет, в период острой аллергической реакции, больным в период лечения глюкокортикоидами.

При расхождении данных кожного тестирования и анамнеза используют провокационные тесты.

Провокационные тесты делят в зависимости от вида аллергена и способа его попадания в организм на:

  • назальный;
  • конъюнктивальный;
  • подъязычный;
  • ингаляционный;
  • пероральный.

Методы лабораторной диагностики

Показаниями для назначения методов специфической лабораторной аллергодиагностики служат:

  • ранний детский возраст;
  • противопоказание к проведению кожного тестирования;
  • высокий уровень сенсибилизации пациента;
  • рецидивирующее течение заболевания без периодов ремиссии;
  • невозможность отмены препаратов, влияющих на кожную чувствительность;
  • измененная реактивность кожи;
  • поливалентная сенсибилизация;
  • ложнопозитивный или ложнонегативный результат при кожном тестировании;
  • уртикарный дермографизм.

В настоящее время в клинической практике применяют следующие методы специфической лабораторной аллергодиагностики:

  • радиоаллергосорбентный тест для выявления специфических $IgE$;
  • иммуноферментные методы анализа для выявления специфических $IgE$ с флюориметрическим, колориметрическим, хемилюминесцентным способом регистрации результатов;
  • прямой базофильный тест;
  • непрямой базофильный тест;
  • реакция специфического высвобождения гистамина из базофилов периферической крови пациента.

Так и не нашли ответ
на свой вопрос?

Просто напиши с чем тебе
нужна помощь

Лучшая статья за этот месяц:  Аллергия на щенка пройдет или нет
Добавить комментарий