Аллерген 6p

Аллерген 6p

Автор: Кочиш Людмила Тихоновна,

Руководитель лаборатории аллергологии

ООО «Вега» ГК Алкор Био

Широкая распространенность аллергических заболеваний, охвативших от 20 до 60 % населения промышленно развитых стран, ежегодный повсеместный рост аллергопатологии и усиление тяжести клинического течения различных ее форм превратили аллергию в глобальную медико-социальную проблему. В связи с этим большое значение имеет своевременная достоверная диагностика аллергопатологии, являющаяся основой профилактики и адекватного лечения аллергических заболеваний.

Диагностика осуществляется комплексно и включает ряд последовательных этапов: сбор аллергологического анамнеза, общее клинико-лабораторное обследование, специфическая клиническая аллергодиагностика in vivo (проведение кожных проб и/или провокационных тестов с аллергенами), иммунологическое и аллергологическое лабораторное обследование in vitro. И если за последние десятилетия сбор анамнеза, методы клинического обследования, методики кожных и провокационных тестов изменились незначительно, то в области лабораторной диагностики аллергии произошли революционные изменения. Стали совершенствоваться методы аллергодиагностики in vitro, прежде всего определение специфических иммуноглобулинов Е (IgE).

Одной из важнейших диагностических проблем является сопоставление клинической и лабораторной информации о больном аллергией. Данное сравнение выявляет достаточно большой процент несовпадений, который иногда трактуется односторонне: как «правильность» данных клинической специфической диагностики и ошибку при лабораторной специфической диагностике, либо наоборот – «правильность» лабораторных данных и неспецифичность клинических.

Хотя данная проблема регулярно становится темой для обсуждения, тем не менее этот вопрос возникает неоднократно как у врачей-специалистов, так и у пациентов, и требует пояснения.

Во-первых, одним из важных методических аспектов является правильное сопоставление результатов кожного и лабораторного тестирования. Что значит правильное? Результаты можно сравнивать, если они получены в отношении идентичных, либо очень сходных аллергенов. Характеристики аллергенов, полученных различными способами, из различного исходного сырья, с различной степенью очистки и т. д., могут в некоторой степени отличаться друг от друга и, соответственно, существенным образом влиять на результаты. Несмотря на определенные достижения в стандартизации аллергенов остается проблема в создании стандартов и унификации аллергенов на основе единых эталонов.

Также на частоту возникновения ложноотрицательных/ложноположительных результатов безусловно влияет правильность выполнения методики проведения теста, например, нарушение техники введения при кожном тестировании, повышение дозы аллергена, расстояние между аллергенами менее 2,5 см и изменение свойств аллергенов при неправильном хранении или изготовлении, использованных при тестировании, как in vivo, так и in vitro.

Во-вторых, несовпадение результатов кожных проб и содержания специфических IgE связано с более сложными механизмами формирования кожной реакции. IgE в крови присутствуют в низких концентрациях, достаточно быстро выводятся, и их повышенный уровень обычно наблюдается при текущем контакте с аллергеном. В тканях же (в частности, в коже), напротив, связанные с тучными клетками IgE сохраняются в течение срока жизни клеток — от нескольких дней до нескольких месяцев. С этим фактором также могут быть связаны некоторые случаи расхождения результатов серологических тестов и кожных проб при тестировании реактивности к идентичным аллергенам.

В-третьих, клинические реакции у больного могут быть обусловлены высоким местным синтезом специфических IgE, при этом их содержание в периферической крови может измениться незначительно. Кроме этого специфические IgE могут быть частично блокированы анти-IgE-антителами класса IgG, образуя иммунные комплексы. Специфические Ig E из этих комплексов становятся недоступны при определении рутинными методами ИФА, что естественно может сопровождаться ростом ложноотрицательных результатов.

Вышеперечисленные причины безусловно не единственные, влияющие на расхождение результатов клинических и лабораторных тестов.

Одной из причин расхождения результатов как при тестировании in vivo, так и in vitro может быть в связи с иммунным ответом (до 10%) на минорные аллергены, входящих в сложный состав нативных экстрактов. Cенсибилизация к минорным аллергенам и низкий уровень свободных специфически реагирующих IgE могут обуславливать повышение частоты возникновения ложноотрицательных результатов.

Причиной ложноположительных результатов при тестировании in vitro могут быть перекрестные реакции между аллергенами различных групп (особенно часто ингаляционными и пищевыми), повышенный уровень общегоIgE, создающий возможность низкоаффинного связывания части общих IgE, имеющих гомологичные эпитопы, сходные с таковыми у специфических к определенному аллергену Ig E.

Ряд перекрестных реакций между аллергенами также может привести к повышению уровня ложнопозитивных результатов кожного тестирования при клинической диагностике сенсибилизации к некоторым пищевым аллергенам (реакции на пшеницу, рыбу, сою).

Важную роль, например, при постановке кожных тестов играет возраст пациента, общее состояние и наличие сопутствующих заболеваний, прием антигистаминных препаратов, индивидуальная реактивность кожи, а также изменение иммунореактивности при развитии острых и активации хронических заболеваний. Все эти факторы также могут стать причиной несовпадения с результатами лабораторных тестов.

Но всегда нужно помнить, что обнаружение аллергенспецифических IgE (к какому-либо аллергену или антигену) выявляет только сенсибилизацию и еще не доказывает, что именно этот аллерген является причиной аллергического заболевания.

Окончательное заключение и интерпретация лабораторных данных должны быть сделаны только специалистом-аллергологом на основании сопоставления результатов лабораторных исследований с клинической картиной, данными аллергологического анамнеза и дополнительных методов исследований.

Аллергены пыльцы полыни и пищевые аллергены растительного происхождения

Автор: Надежда Сейлиева

ООО «Вега» ГК Алкор Био

Перекрестные реакции между пыльцой и пищей встречаются как у пациентов с чувствительностью к пыльце трав и деревьев, так и у пациентов с пищевой аллергией. У пациентов с респираторной аллергией кросс-реактивность между пыльцевыми и пищевыми аллергенами может вызывать пищевую аллергию с симптомами различной тяжести при употреблении в пищу сырых фруктов и овощей, в то время как у пациентов с пищевой аллергией наблюдается высокий риск одновременного проявления симптомов аллергического ринита и астмы. Молекулярная диагностика позволяет определять специфические IgE к аллергокомпонентам у полисенсибилизированных пациентов, что крайне важно для выявления истинной аллергии.

Разнообразие перекрестных реакций пыльца-пища

Клинические проявления сенсибилизации к перекрестно-реагирующим пыльцевым и пищевым аллергокомпонентам описаны для многих источников растительного происхождения. Перекрестные реакции между пыльцой и пищей описаны для таких аллергенов как береза-яблоко, сельдерей-полынь-специи, полынь-персик, полынь-горчица, амброзия-арбуз-банан, лебеда-дыня.

В основе реакций сельдерей-полынь-специи лежит респираторная сенсибилизация к полыни и перекрестные реакции к растительной пище на такие продукты как сельдерей, морковь, петрушку, семена тмина, фенхеля, кориандра, аниса, паприку, лук, чеснок, лук-порей, перец.

Наблюдаются перекрестные реакции полынь-горчица при аллергии к полыни и пищевой аллергии к предствителям семейства Крестоцветные: горчица белая, горчица русская, капуста кочанная, капуста брокколи, цветная капуста. Возможны случаи аллергических реакций на семена подсолнечника, ассоциированные с аллергией к пыльце полыни.

Описаны клинические случаи тяжелых аллергических реакций на мед и маточное молочко у пациентов с аллергией на полынь и амброзию. Причина таких реакций в том, что продукты пчеловодства могут содержать как пыльцу растений опыляемых насекомыми, так и пыльцу ветроопыляемых растений.

Компоненты пыльцы полыни

Сенсибилизация к компоненту Art v 1 пыльцы полыни варьирует от 70 до 95% среди пациентов с аллергией на полынь, что делает этот белок основным аллергеном. Определение иммуноглобулинов класса E к Art v 1 позволяет прогнозировать эффективность аллерго-специфической иммунотерапии и предполагать наличие перекрестных реакций. Гомологичные аллергены представлены в пыльце амброзии и подсолнечника.

Липид-переносящие белки (LTP, lipid transfer proteins), которые встречаются в пыльце растений и фруктах, вовлечены в перекрестные реакции между этими двумя источниками аллергенов. Пыльцевые LTP описаны как аллергены в 6 различных растениях (амброзии, полыни, японском кедре, оливе, платане и постеннице) и могут вызывать не только респираторные симптомы, но и симптомы пищевой аллергии. Исследования показывают связь между сенсибилизацией к компоненту пыльцы полыни Art v 3 и аллергическими реакциями на фрукты семейства Розоцветные, например персик. Белок Art v 3 является важным диагностическим маркером пищевой аллергии, поскольку аминокислотная последовательность этого аллергокомпонента и липид-переносящего белка персика Pru p 3 совпадает более чем на 40%. Гомологичность этих аллергенов лежит в основе кросс-реактивности полынь-персик.

С развитием молекулярной диагностики и описанием молекулярных особенностей пищевых аллергенов, появились данные о кросс-реактивности между различными источниками аллергенов. Понимание аллергических реакций, связанных с перекрестной активностью аллергенов крайне необходимо врачу аллергологу. Это позволяет клиницистам обеспечить соответствующий подход к лечению и профилактике аллергии, оценить виды и тяжесть аллергических реакций. Пациенты с аллергией на определенные компоненты пыльцы и пищевых продуктов должны быть тщательно проинформированы о возможных аллергических реакциях. Рекомендации по соблюдению диеты и отказа от продуктов питания, имеющих потенциально кросс-реактивные белки, должны даваться в соответствии с учетом риска перекрестных реакций.

Компонент-специфическая аллергодиагностика является методом исследования, который дает возможность различать перекрестные реакции, происходящие после приема пищи у пациентов с пищевой аллергией. Использование молекулярной диагностики аллергии улучшает понимание роли клинически значимых кросс-реактивных компонентов в аллергии на пыльцу и продукты питания.

Аллергокомпоненты пыльцы тимофеевки

Автор: Надежда Сейлиева

ООО «Вега» ГК Алкор Био

Пыльца растений является основной причиной IgE-опосредованных аллергических заболеваний по всему миру. Тимофеевка луговая (Phleum pratense) — одна из самых широко распространенных трав и важнейший источник пыльцевых аллергенов. До 20% пациентов с аллергией по всему миру сенсибилизированы к тимофеевке и родственным видам трав.

Компоненты пыльцы тимофеевки

Пыльца тимофеевки состоит из различных аллергенных компонентов (Phl p 1, Phl p 2, Phl p 4, Phl p 5, Phl p 6, Phl p 7, Phl p 11 and Phl p 12), среди которых есть как видоспецифичные, так и перекрестно-реагирующие аллергенные молекулы. Мажорным аллергеном является Phl p 1, который относится к семейству пыльцевых аллергенов с названием «группа I». Эта группа содержит аллергены таких перекрестно-реагирующих растений как райграс, ежа сборная, овсяница, колосок душистый. Количество пациентов с аллергией к тимофеевке и чувствительностью к аллергенам группы I насчитывает от 70 до 100% в различных странах Европы. Из-за широкого распространения и высокой кросс-реактивности аллергенов группы I, наличие IgE к Phl p 1 можно использовать как диагностический маркер аллергии на пыльцу трав.

Ещё одной большой группой аллергенов пыльцы трав является группа V, на аллергены которой реагируют от 60 до 93% пациентов. К группе V относится аллерген тимофеевки Phl p 5, вызывающий аллергические и астматические проявления у 90% пациентов.

Phl p 1 и Phl p 5 охарактеризованы как мажорные, видоспецифичные белки, тогда как Phl p 12 и Phl p 7 описаны как минорные, перекрестно-реагирующие.

Phl p 7 относится к семейству кальций-связывающих белков. Антитела против белков этого семейства обнаруживаются по различным данным у 5 — 10% пациентов с пыльцевой аллергией и отвечают за перекрестные реакции между пыльцой растений. Пациенты со специфическими IgE к белкам этого семейства демонстрируют полисенсибилизацию к пыльце трав и деревьев. Одним из родственных Phl p 7 белков является аллерген пыльцы березы Bet v 4.

Компонент пыльцы тимофеевки Phl p 12 относится к профилинам. Это крайне консервативные молекулы с большим числом гомологов, отвечающие за кросс-реактивность между различными видами растений. Количество пациентов в Европе с IgE к профилинам колеблется от 8 до 15%. Phl p 12 может давать перекрестные реакции с профилинами пыльцы растений (олива европейская, свинорой пальчатый, постенница, подсолнечник однолетний, береза бородавчатая, финик пальчатый) и растительной пищи (банан, ананас и другие экзотические фрукты).

Пациенты, имеющие антитела как к основным, так и к кросс-реагирующим аллергокомпонентам тимофеевки, чаще реагируют с проявлениями анафилаксии, крапивницы и отеком Квинке на арахис, томат и фрукты.

Прогноз эффективности АСИТ

Определение профиля сенсибилизации к аллергенным молекулам позволяет прогнозировать эффективность аллерген-специфической иммунотерапии (АСИТ). АСИТ будет эффективной в случае наличия специфических IgE к мажорным компонентам (Phl p 1 и Phl p 5) и отсутствии к минорным (Phl p 12 и Phl p 7). В случае наличия специфических IgE как к мажорным, так и к минорным компонентам, эффективность будет средней. АСИТ будет малоэффективна в случае отсутствия IgE к мажорным компонентам Phl p 1 и Phl p 5.

Часто задаваемые вопросы

Почему для диагностики аллергических реакций лучше использовать аллерген эпителия животного, а не его шерсти? Что входит в состав аллергена эпителия?

Аллергия на домашнюю пыль — одна из самых распространенных видов аллергии. Самой частой причиной развития аллергической бронхиальной астмы и круглогодичного ринита является аллергия на домашнюю пыль.

Домашняя пыль – это естественный продукт человеческого быта. По своему составу она неоднородна и является сложным аллергеном, состоящим из множества различных элементов, таких как микроклещей, которые питаются частицами эпидермиса людей и животных, фрагменты перьев, шерсти и перхоти животных, волосы и эпидермис человека, споры плесневых грибов и бактерии, частицы насекомых и т.д. Экстракты домашней пыли обладают высокой аллергенной активностью.

Greer Labs., Inc – лаборатория-производитель экстракта аллергена домашней пыли, известном во всем мире под шифром h1. Ее наиболее важными компонентами являются клещи семейства Pyroglyphidae (Dermatophagoides farinae, Dermatophagoides pteronyssinus и т.д.), частицы эпидермиса и шерсти животных, элементы насекомых. Компания «Алкор Био» производит еще три вида пылевых аллергенов, таких как h0, h2, h3. Все они также являются сложными многокомпонентными аллергенами.Но, например, h в отличие отh1 в большей степени содержит элементы плесневых грибов и их споры и в меньшей частицы насекомых. А вот h2 помимо всех основных компонентов в своем составе содержит значительное количество текстильных элементов, в частности, набивок для матрацев, одеял и материалов, использующихся для обивки мебели. Что касается аллергена библиотечной пыли h3, то в его состав входят элементы древесной целлюлозы использующейся для производства бумаги и, соответственно, сами частицы «старой» бумаги, а также элементы плесневых грибов, тараканов и др. насекомых.

Конечно, любой из предложенных аллергенов домашней пыли может служить хорошим маркером аллергической реакции. Тем не менее, для определения повышенной чувствительности к домашней или библиотечной пыли, можно при назначении врачом руководствоваться этими различиями в составе аллергенов для выявления специфической реакции преимущественно к определенной группе элементов.

В чем различие между аллергенами домашней пыли? Для чего они предназначены?

Аллергия к домашним животным — актуальная проблема современной аллергологии и клинической иммунологии. Домашние животные являются одним из сильнейших источников аллергенов. Ученые объясняют увеличение распространенности аллергии к домашним животным тремя основными причинами: значительным ростом семей, имеющих дома животных, тесным контактом человека с сельским/агропромышленным хозяйством и его профессиональной деятельностью. Немаловажное значение имеет также существенный рост численности грызунов повсеместно.

Аллергены животных включают белки следующего происхождения: шерсть, эпителий, перхоть, слюну, мочу и перья (у птиц).

Существует огромное заблуждение, что аллергию вызывает исключительно шерсть животных. Но это не совсем так. Сама шерсть животных не обладает значительными аллергенными свойствами, однако выраженная аллергенность связана с прикреплёнными к шерсти белками эпидермиса и слюны.

Эпителий животных, представляющий собой клетки наружного кожного слоя, является основным аллергеном этого животного и выступает как важный источник большого количества высокоантигенных и аллергенных частиц.

Чешуйчатое шелушение (отслаивание) эпителия, происходящее либо в норме, либо вследствие различных патологических процессов, это постоянный процесс у всех животных. Для обозначения слущенного эпителия употребляют термин перхоть. Перхоть также является источником высокоактивных аллергенов.

Значительные количества белков, прежде всего ферменты, содержит слюна животных.

Что же лучше использовать для диагностики аллергических реакций — эпителий или шерсть животных, рассмотрим на примере аллергенов кошки и собаки.

Самыми мощными аллергенами являются аллергены кошек. На сегодняшний день описано более 12 аллергенных белков кошек. Так называемый главный аллерген белок Fel d 1 обнаружен в эпителии кожи, а также в секрете сальных желез, но не в слюне кошек. Более 80% больных с аллергией на кошек имеют специфические IgE-антитела именно к этому гликопротеину. Тогда как к сывороточному альбумину Fel d 2, который содержится в сыворотке крови, перхоти и слюне, только около 25% людей чувствительны к данному белку.

По некоторым данным результатов кожных проб у детей с бронхиальной астмой и аллергическим ринитом по определению сенсибилизации к аллергенным белкам кошки на примере использования аллергенов из шерсти и эпителия производства компании Allergopharma было выявлено, что диагностическая значимость аллергена из эпителия кошки существенно выше (55%), чем у аллергена шерсти (11%).

Такая же тенденция наблюдается и относительно аллергенов собаки. Многие люди ошибочно полагают, что у них имеет место аллергия на собачью шерсть, однако на самом деле виновником является не шерсть, а мелкие частички омертвевшей кожи или эпителия собаки.

Основные аллергены собак Can f 1 и Can f 2 выделены из собачьей перхоти и эпителия. Но тем не менее для диагностики аллергии к собаке важно определить три аллергена: перхоть, эпителий и сывороточный альбумин Can f 3.

Эпителий животных с диагностической целью получают путем соскабливания эпителиального слоя кожи.

Аллергия может возникать как при прямом контакте с этим аллергеном, так и при косвенном, например, вдыхание аллергенов с частичками пыли. Так же эпителий животных может переноситься с обувью и одеждой человека, поэтому аллергены присутствуют даже в тех местах, в которых никогда не было животных (офисы, больницы, школы, и т.д.). Именно поэтому люди, которые чрезмерно чувствительные к эпителию кошек, собак и т.д., могут страдать от данной аллергии, даже не имея малейшего контакта с ними.

88 пищевых аллергенов (IgE)

Стоимость услуги: 21590 руб.* Заказать
Срок исполнения: 1 — 2 к.д. Заказать Указанный срок не включает день взятия биоматериала

Не менее 3 часов после последнего приема пищи. Можно пить воду без газа.

Главная особенность гуморального иммунного ответа на аллергены — образование IgE-антител. Определение специфических IgE на индивидуальные аллергены является одним из этапов в диагностике аллергических заболеваний детей и взрослых. При повышенном уровне IgE следует исключить контакт с аллергеном или прием того или иного продукта.

Яичный белок, яичный желток, молоко коровье, бета-лактоглобулин, казеин, сыр с плесенью, козье молоко, йогурт, мягкий сыр, треска, сельдь, форель, креветки, лосось (семга), кальмар, скумбрия, карп (сазан), судак, икра (черная и красная), пшеничная мука, ржаная мука, овсяная мука, рис, гречневая мука, кукуруза (зерно), глютен, пшено (просо), шампиньон, горох, кунжут (семена), соевые бобы, свинина, говядина, мясо курицы, баранина, апельсин, мандарин, чеснок, лук репчатый, сельдерей, горчица, томат, морковь, картофель, капуста белокочанная, цветная капуста (отварная), огурец, свекла, баклажан, тыква, капустная смесь (зеленая, белокочанная, краснокочанная, савойская), оливки и маслины, арахис, грецкий орех, фундук, миндаль, фисташки, банан, груша, яблоко, персик, ананас, киви, абрикос, земляника, вишня/черешня, малина, смородина (красная и черная), дыня и арбуз, виноград (белый и черный), черный чай, зеленый чай, плоды шиповника, дрожжи пивные, хмель и солод, дрожжи пекарские, шоколад, кофе, лецитин, глутамат, аспартам, мёд, свекольный сахар, смесь специй №1 (жгучий красный перец, паприка — молотый сладкий перец, перец чили, душистый перец, перец пеперони – зеленый кайенский перец), смесь перцев горошком (белый, зеленый, черный), смесь специй №2 (лавровый лист, укроп, зелень петрушки, корень петрушки), кандида (candida albicans), аскарида (ascaris).

  • Диагностика аллергических заболеваний.

Референсные значения. 0,7-3,5 МЕ/мл — средняя концентрация антител — сlass 2;

  • > 3,5-17,5 МЕ/мл — высокая концентрация антител — сlass 3;
  • >17,5 МЕ/мл – очень высокая концентрация антител — сlass 4.
  • » [«serv_cost»]=> string(5) «21590» [«cito_price»]=> NULL [«parent»]=> string(2) «30» [10]=> string(1) «1» [«limit»]=> NULL [«bmats»]=> array(1) < [0]=>array(3) < ["cito"]=>string(1) «N» [«own_bmat»]=> string(2) «12» [«name»]=> string(51) «Кровь (сыворотка, 3 пробирки)» > > >

    Биоматериал и доступные способы взятия:
    Тип В офисе
    Кровь (сыворотка, 3 пробирки)
    Подготовка к исследованию:

    Не менее 3 часов после последнего приема пищи. Можно пить воду без газа.

    Главная особенность гуморального иммунного ответа на аллергены — образование IgE-антител. Определение специфических IgE на индивидуальные аллергены является одним из этапов в диагностике аллергических заболеваний детей и взрослых. При повышенном уровне IgE следует исключить контакт с аллергеном или прием того или иного продукта.

    Яичный белок, яичный желток, молоко коровье, бета-лактоглобулин, казеин, сыр с плесенью, козье молоко, йогурт, мягкий сыр, треска, сельдь, форель, креветки, лосось (семга), кальмар, скумбрия, карп (сазан), судак, икра (черная и красная), пшеничная мука, ржаная мука, овсяная мука, рис, гречневая мука, кукуруза (зерно), глютен, пшено (просо), шампиньон, горох, кунжут (семена), соевые бобы, свинина, говядина, мясо курицы, баранина, апельсин, мандарин, чеснок, лук репчатый, сельдерей, горчица, томат, морковь, картофель, капуста белокочанная, цветная капуста (отварная), огурец, свекла, баклажан, тыква, капустная смесь (зеленая, белокочанная, краснокочанная, савойская), оливки и маслины, арахис, грецкий орех, фундук, миндаль, фисташки, банан, груша, яблоко, персик, ананас, киви, абрикос, земляника, вишня/черешня, малина, смородина (красная и черная), дыня и арбуз, виноград (белый и черный), черный чай, зеленый чай, плоды шиповника, дрожжи пивные, хмель и солод, дрожжи пекарские, шоколад, кофе, лецитин, глутамат, аспартам, мёд, свекольный сахар, смесь специй №1 (жгучий красный перец, паприка — молотый сладкий перец, перец чили, душистый перец, перец пеперони – зеленый кайенский перец), смесь перцев горошком (белый, зеленый, черный), смесь специй №2 (лавровый лист, укроп, зелень петрушки, корень петрушки), кандида (candida albicans), аскарида (ascaris).

    • Диагностика аллергических заболеваний.

    Референсные значения. 0,7-3,5 МЕ/мл — средняя концентрация антител — сlass 2;

  • > 3,5-17,5 МЕ/мл — высокая концентрация антител — сlass 3;
  • >17,5 МЕ/мл – очень высокая концентрация антител — сlass 4.
  • Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

    Copyright ФБУН Центральный НИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, 1998 — 2020

    Центральный офис: 111123, Россия, Москва, ул. Новогиреевская, д.3а, метро «Шоссе Энтузиастов», «Перово»
    +7 (495) 788-000-1, info@cmd-online.ru

    ! Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

    Аллергия к клещам домашней пыли с позиций молекулярной аллергологии Текст научной статьи по специальности « Медицина и здравоохранение»

    Аннотация научной статьи по медицине и здравоохранению, автор научной работы — Мокроносова М. А., Коровкина Елена Сергеевна

    Резюме. В последние годы отмечается резкий рост числа аллергических заболеваний. Основным фактором риска развития сенсибилизации является домашняя пыль, в больших количествах скапливающаяся в жилищах, играющая важную роль в развитии таких аллергических заболеваний, как аллергический ринит, бронхиальная астма, атопический дерматит. Основным компонентом домашней пыли являются клещи домашней пыли. Наиболее важное значение в развитии сенсибилизации играют Dermatophago >тропомиозин клещей Der p 10, имеющий высокую степень перекрестной реактивности с тропомиозином других беспозвоночных, а также с тропомиозином человека. Исходя из этих соображений, при прогнозировании эффективности АСИТ необходимо определение уровней специфических IgЕ к мажорным аллергенам клещей домашней пыли и тропомиозину . В настоящее время доступен метод аллергодиагностики с использованием молекулярных компонентов аллергенов (

    Похожие темы научных работ по медицине и здравоохранению , автор научной работы — Мокроносова М.А., Коровкина Елена Сергеевна,

    CR-диагностика), который позволяет наиболее точно определить молекулы аллергенов, участвующих в развитии заболевания, что важно для назначения и оценки эффективности АСИТ.Incidence of allergic diseases is increased over last years. House dust is considered a major risk factor of allergic sensitization which plays an important role in development of allergic rhinitis, bronchial asthma, atopic dermatitis. Dust mites in the home comprise a large part of domestic allergens. Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae, Euroglyphus maynei, Lepidoglyphus destructor, Blomia tropicalis are most important in this respect. Der p 1 and Der p 2 are regarded as major house dust mite allergens. Recent studies concerned induction of IgE responses against mite tropomyosin (Der p 10), an allergen occurring in mites which exhibits high cross-reactivity with tropomyosins from a variety of sea foods (e.g. shrimps), as well as human tropomyosins. Allergen-specific immunotherapy (ASIT) represents the only causative approach to allergy treatment in such cases. From this viewpoint, a quantitation of specific IgЕ against major house dust mite allergens would be necessary to predict ASIT efficiency. Treatment by house dust mites allergen extracts is effective in management of allergic rhinitis and mild asthma. A component-resolved diagnostic (CRD) with purified house-dust mites allergens allows to discriminate patients who were mostly sensitized to the major house dust mites allergens (e.g. Der p 10, tropomyosin). The component-resolved diagnostics could be performed before starting the allergen-specific immunotherapy by mite allergens, in order to avoid unresponsiveness to this mode of therapy.

    Текст научной работы на тему «Аллергия к клещам домашней пыли с позиций молекулярной аллергологии»

    Медицинская иммунология 2012, Т. 14, № 4-5, стр. 279-288 © 2012, СПб РО РААКИ

    АЛЛЕРГИЯ К КЛЕЩАМ ДОМАШНЕЙ ПЫЛИ С ПОЗИЦИЙ МОЛЕКУЛЯРНОЙ АЛЛЕрГоЛоГии

    Коровкина Е.С., Мокроносова М.А.

    НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН, Москва

    Резюме. В последние годы отмечается резкий рост числа аллергических заболеваний. Основным фактором риска развития сенсибилизации является домашняя пыль, в больших количествах скапливающаяся в жилищах, играющая важную роль в развитии таких аллергических заболеваний, как аллергический ринит, бронхиальная астма, атопический дерматит. Основным компонентом домашней пыли являются клещи домашней пыли. Наиболее важное значение в развитии сенсибилизации играют Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae, Euroglyphus maynei, Lepidoglyphus destructor и Blomia tropicalis. Мажорные аллергены клещей домашней пыли Der p 1 и Der p 2. Также важным аллергеном является тропомиозин клещей Der p 10, имеющий высокую степень перекрестной реактивности с тропомиозином других беспозвоночных, а также с тропомиозином человека. Исходя из этих соображений, при прогнозировании эффективности АСИТ необходимо определение уровней специфических ^Е к мажорным аллергенам клещей домашней пыли и тропомиозину. В настоящее время доступен метод аллергодиагностики с использованием молекулярных компонентов аллергенов (CR-диагностика), который позволяет наиболее точно определить молекулы аллергенов, участвующих в развитии заболевания, что важно для назначения и оценки эффективности АСИТ.

    Ключевые слова: клещи домашней пыли, Derp 1, Derp 2, тропомиозин, компонентная иммунологическая диагностика, аллерген-специфическая иммунотерапия.

    Korovkina E.S., Mokronosova M.A.

    HOUSE DUST MITE ALLERGY IN VIEW OF MOLECULAR ALLERGOLOGY

    Abstract. Incidence of allergic diseases is increased over last years. House dust is considered a major risk factor of allergic sensitization which plays an important role in development of allergic rhinitis, bronchial asthma, atopic dermatitis. Dust mites in the home comprise a large part of domestic allergens. Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae, Euroglyphus maynei, Lepidoglyphus destructor, Blomia tropicalis are most important in this respect. Der p 1 and Der p 2 are regarded as major house dust mite allergens. Recent studies concerned induction of IgE responses against mite tropomyosin (Der p 10), an allergen occurring in mites which exhibits high cross-reactivity with tropomyosins from a variety of sea foods (e.g. shrimps), as well as human tropomyosins. Allergen-specific immunotherapy (ASIT) represents the only causative approach to allergy treatment in such cases. From this viewpoint, a quantitation of specific ^Е against major house dust mite allergens would be necessary to predict ASIT efficiency. Treatment by house dust mites allergen extracts is effective in management of allergic rhinitis and mild asthma. A component-resolved diagnostic (CRD) with purified house-dust mites allergens allows to discriminate patients who were mostly sensitized to the major house dust mites allergens (e.g. Der p 10, tropomyosin). The component-resolved diagnostics could be performed before starting the allergen-specific immunotherapy by mite allergens, in order to avoid unresponsiveness to this mode of therapy. (Med. Immunol., 2012, vol. 14, N4-5, pp 279-288)

    Keywords: house dust mites, Derp 1, Derp 2, tropomyosin, component-resolved immune diagnostics, allergen-specific immunotherapy.

    Адрес для переписки:

    Коровкина Елена Сергеевна

    105064, Москва, Малый Казенный пер., 5а.

    Тел.: (495) 917-08-91.

    Факс: (495) 917-49-00.

    Аллергические заболевания представляют собой глобальную проблему здравоохранения. Многолетние эпидемиологические исследования показывают прогрессирующий рост заболеваемости, связанный с изменением экологии

    Коровкина Е.С., Мокроносова М.А.

    современных городов [50]. Население городов значительную часть жизни проводит в различных помещениях, в которых при непосредственном участии человека формируются специфические факторы окружающей среды: температура и влажность воздуха, электромагнитные излучения и др. Кроме того, помещения колонизируют живые организмы — клещи домашней пыли, плесневые и дрожжевые грибы, насекомые и т.д. Все они в результате своей жизнедеятельности продуцируют аллергены, контакт с которыми может привести к развитию различных аллергических заболеваний — аллергического ринита, бронхиальной астмы, атопического дерматита [2].

    Основным источником аллергенов являются клещи домашней пыли, которые распространены повсеместно, однако существуют значительные колебания уровней аллергенов в зависимости от географического положения. Наиболее распространенными видами клещей, производящих аллергены, являются Dermatophagoides pteronyssinus и Dermatophagoides farinae. Для оценки географического распространения обоих видов клещей в Европе в 2000-2002 гг. группа исследователей The European Community Respiratory Health Survey проводила исследование распространенности главных аллергенов клещей домашней пыли Der p 1 и Der f 1 в 10 европейский странах с использованием стандартного протокола [57]. В ходе исследования было показано широкое распространение Der p 1 и Der f 1 в бытовой среде, однако в отдельных областях наблюдалось превалирование одного вида клещей

    над другим. Кроме того, была показана более широкая встречаемость Der f 1 (и, соответственно, D. farinae), чем это считалось ранее. В южных регионах Европы была отмечена широкая встречаемость обоих видов клещей домашней пыли, однако понижение температуры окружающего воздуха вызывало более значительное понижение концентраций D. pteronissinus в сравнении с D. farinae (рис. 1). Уровни относительной влажности и атмосферного давления не оказывали значительного влияния на уровни аллергенов клещей домашней пыли.

    Как уже упоминалось, основным фактором риска развития аллергических заболеваний является домашняя пыль, которая в больших количествах скапливается в домах. Домашняя пыль неоднородна по своему составу и содержит множество составляющих: различные волокна, слу-щенный эпителий человека и животных и т.д. Основными компонентами домашней пыли являются [50]:

    — клещи. Основные представители

    Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoide sfarinae, Euroglyphus maynei. Существует три вида экскреторных выделений у клещей: личиночные шкурки, секрет латеральных желез и экскременты (фекальные шарики). Главный аллерген содержится в фекальных шариках клещей диаметром 1020 мкм, которые легко поднимаются в воздух при уборке и длительное время находятся во взвешенном состоянии, оседают на слизистых оболочках верхних дыхательных путей и, быстро растворяясь,

    Der p 1 Der f 1

    i Не можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

    Рисунок 1. Распространенность клещей домашней пыли в Европе (данные Zock J.P. et al. J. Allergy Clin. Immunol., 2006, Vol. 118. The European Community Respiratory Health Survey II)

    Аллергия к клещам домашней пыли

    проникают в организм человека [19];

    — аллергены тараканов (основной представитель Blatellagermanica, Bla g 1). В некоторых регионах с жарким и влажным климатом (некоторые районы США, страны Юго-Восточной Азии) аллергия на тараканов встречается чаще, чем аллергия на пыльцу амброзии полыннолистной или клещей домашней пыли [20, 46];

    — аллергены домашних животных (Fel d 1/Can f 1, 2) в большом количестве скапливаются в домашней пыли, мягкой мебели, а также в помещениях, где нет домашних животных (ясли, школы, детские сады, больницы, общественный транспорт [26, 37]);

    — споры плесневых грибков (Asp f 1, 2/Cla h 8/ Alta 1, 6). Споры грибов и плесеней распространяются с воздухом и определяются повсеместно; образование спор усиливается в условиях высокой влажности и при высоких температурах, что объясняет сезонные вспышки заболевания [17, 18, 42].

    Как уже было упомянуто, основным компонентом домашней пыли являются клещи. В настоящее время используется следующая классификация клещей, разработанная подкомитетом WHO/IUIS [33]:

    — пироглифидные клещи (Pyroglyphidmites);

    — клещи амбарно-зернового комплекса (Storagemites);

    — чесоточные и паутинные клещи (Mange/ spidermites) (см. табл. 1).

    Клещи домашней пыли представляют собой значительную часть аллергенов домашней пыли, относятся к семейству Pyroglyphidae, подклассу Acari, классу Arachid, роду Anthropods. Наиболее важное значение в развитии сенсибилизации играют Dermatophagoides pteronyssinus (Der p), Dermatophagoidesfarinae (Der f), Euroglyphus maynei (Eur m) [56]. Клещи домашней пыли питаются человеческим эпителием, который в больших количествах скапливается в постельных принадлежностях, коврах, мягкой мебели, где создаются оптимальные условия для роста и размножения клещевой популяции: температура окружающего воздуха до 25 °С и влажность до 60-75% [14,

    22, 41]. Для клинической картины при аллергии к клещам домашней пыли характерно развитие симптоматики в вечерние/ночные часы, после контакта с пылесборниками, обострение заболевания происходит в поездах, театрах и кинотеатрах, в местах массового скопления народа. Преимущественно наблюдаются симптомы ринита, атопического дерматита, бронхиальной астмы, поражение глаз встречается реже. Хотя клещи находятся в домашней пыли круглогодично, характерны сезонные колебания их численности с увеличением количества во влажные периоды, что следует учитывать при сборе анамнеза [13].

    Основные представители амбарных клещей, последний особенно (но не только) широко представлен в тропических и субтропических регионах [56], находятся в зернах и муке при их хранении, особенно во влажных помещениях, где их влияние на развитие болезни усугубляется плесневыми грибами. Широко распространены в сельской местности. Профессиональный риск развития сенсибилизации к клещам амбарнозернового комплекса существует у лиц, занятых сельским хозяйством, работников элеваторов, пекарей, а также у людей, употребляющих зараженную клещами пищу. Изолированная аллергия к амбарным клещам встречается в 10% случаев и чаще сочетается с аллергией к другим видам клещей. Клинически аллергия к амбарным клещам проявляется в виде серьезных аллергических реакций вплоть до развития анафилактических шоков [6, 9, 27].

    Другие виды клещей, например, паутинные клещи, поражают представителей других профессий (Panonychus ulmi у сборщиков яблок, Panonychus citri у сборщиков цитрусовых, Tetranychus urticae и Ornithonyssus sylviarum у работников птицефабрик) [3, 6, 31, 49].

    Определение количества аллергена в образцах домашней пыли

    Количество аллергенов клещей в домашней пыли ассоциируется с повышением риска уровня сенсибилизации. Большинство пациентов с аллергией к клещам домашней пыли, учитывая

    ТАБЛИЦА 1. КЛАССИФИКАЦИЯ КЛЕЩЕЙ (ALLERGEN NOMENCLATURE, 2011)

    Клещи домашней пыли Амбарные клещи Паутинные клещи

    Семейство Pyroglyphidae Основные представители: Основные представители:

    Подкласс Acari • Glycyphagus domesticus • Panonychus ulmi

    Класс Arachid • Glycyphagus destructor • Panonychus citri

    Род Anthropods • Tyrophagus putrescentiae • Tetranychus urticae

    Основные представители: • Dermatophagoides pteronyssinus (Der p) • Dermatophagoides farinae (Der f) • Euroglyphus maynei (Eur m) • Lepidoglyphus destructor (Lep d) • Blomia tropicalis (Blo t) • Dermatophagoides microceras • Acarus siro • Ornithonyssus sylviarum

    Коровкина Е.С., Мокроносова М.А.

    высокую перекрестную реактивность антигенных детерминант, сенсибилизированы одновременно к D. pteronyssinus и D. farinae; оба вида этих клещей присутствуют в пробах домашней пыли. Присутствия 100 особей клещей в 1 г домашней пыли, что соответствует 2 мкг Der p 1 в 1 г пыли, достаточно для формирования сенсибилизации у ребенка. При наличии 500 особей клещей, или 10 мкг Der p 1 в 1 г пыли сенсибилизированные пациенты приобретают риск развития астмы в дальнейшем. При более высоком количестве клещей в пыли возрастает риск более раннего дебюта заболевания [10, 25]. Исходя из этих соображений, важным этапом в диагностике клещевой аллергии и прогнозировании риска развития заболевания является определение количества аллергенов в образцах домашней пыли. На сегодняшний день для этой цели используются следующие методы [18, 21]:

    — микроскопия образцов домашней пыли с подсчетом числа особей клещей. Метод заключается в выявлении при помощи микроскопии доминирующих видов и их количественный подсчет. Данный метод дает представление об акарофауне помещения, превалировании одного вида клещей над другим, однако не позволяет анализировать фекальные частицы, попадающие в пыль.

    — измерение уровня гуанина в пробах домашней пыли (Acarex-test, Dustscreen, Aclotest). Гуанин является основным продуктом жизнедеятельности паукообразных; определение его количества дает представление о загрязненности помещения клещами. Преимуществами данного метода являются его простота и возможность использования в клинической практике и в домашних условиях, однако он не дает возможности анализировать видовое разнообразие клещей.

    — иммунохимические методы — определение количества аллергенов клещей домашней пыли при помощи моноклональных антител. Данный метод дает более полное представление о распространении и значимости клещей домашней пыли, но является достаточно трудоемким и требует использования специального лабораторного оборудования.

    Аллергены клещей домашней пыли (Pyroglyphideae)

    Аллергены клещей делятся на определенные группы: 1-14, 23, в зависимости от их биохимического состава, молекулярной массы и гомологичных последовательностей. Обозначение аллергена производится латинскими буквами — первые три буквы рода, первая буква названия вида и число, обозначающее порядок, в котором был выявлен аллерген [52].

    Основные аллергены клещей домашней пыли, согласно Allergen nomenclature 2011, описанные на сегодняшний день, представлены в таблице 2.

    Аллергены 1 группы являются гликопротеинами со свойствами цистеинпротеазы, с молекулярной массой 25 кДа, происходят из клеток, выстилающих кишечный тракт клещей. К аллергенам данной группы относятся Der f 1, Der p 1, Eur m 1 (14). Аллергены Der p 1 и Der f 1 имеют гомологию 80% за счет наличия перекрестно-реагирующих эпитопов, но также имеют и видоспецифические эпитопы. Хотя гены Der p 1, 2 и 3 расположены рядом в геноме клещей, они имеют высокую степень полиморфизма [51].

    Аллергены 2 группы представлены белками с молекулярной массой 15 кДа, относящимися к семейству NPC2 (Niemann—Picktype C 2 proteins, белки Нимана—Пика типа С2); белки данной группы имеют различную степень гомологии. Образование аллергенов 2 группы связано с секрецией репродуктивного тракта клещей. Степень гомологии Der p 2 и Der f 2 достигает 88%, также существует сродство между аллергенами клещей домашней пыли и аллергенами амбарных клещей — Der p 2 и Lep d 2 —37%, Der p 2 и Tyr p 2 — до 40% [23].

    Der p 1 и Der p 2 обладают способностью высвобождать нитрит азота из альвеолярных макрофагов [39], так как эти аллергены обладают ферментативной активностью. Так, ферментативная активность Der p 1 приводит к повышению проницаемости эпителиальных клеток, стимулирует высвобождение IL-6, IL-8 и GM-CSF из эпителиальных клеток респираторного тракта [32].

    В общей популяции определяется до 80% лиц, имеющих в сыворотке крови специфические IgE-антитела к Der p 1 и Der p 2. Около 20% пациентов, сенсибилизированных к домашней пыли, не имеют специфических IgE-антител к аллергенам 1 и 2 групп. Это связано с тем, что существует большое количество аллергенов клещей домашней пыли других групп, обладающих высокой способностью к выработке специфических IgE-антител, однако в экстрактах домашней пыли они присутствуют в незначительных концентрациях [52, 53]. Например, Der p 3 может считаться мажорным аллергеном клещей домашней пыли, сенсибилизация к нему определяется в 50% случаев, однако специфические IgE-антитела к Der p 3 встречаются в сыворотке крови в низких титрах из-за низкой встречаемости самого аллергена. Образование специфических IgE-антител к аллергенам Der p 4, 5, 6 и 9 встречается в 37-50% случаев, однако в сыворотках крови они встречаются в низких титрах по этой же причине [52, 53].

    Der p 7 является мажорным аллергеном клещей домашней пыли наряду с Der p 1 и Der p 2. Более чем у 50% пациентов с клещевой аллергией определяются специфические IgE-антитела к Der p 7, который способен стимулировать

    Аллергия к клещам домашней пыли

    ТАБЛИЦА 2. АЛЛЕРГЕНЫ КЛЕЩЕЙ ДОМАШНЕЙ ПЫЛИ (ALLERGEN NOMENCLATURE WHO/IUIS)

    Источник Аллерген Молекулярная масса (кДа) Химическая природа

    Dermatophagoides pteronyssinus/ Dermatophagoides farinae/ Euroglyphus maynei Der p 1/Der f 1/Eur m 1 25 Cysteine protease

    Der p 2/Der f 2/Eur m 2 15 NPC 2 family

    Der p 3 31 Trypsin

    Der p 4 60 Alpha amylase

    Der p 5 14 Природа неизвестна

    Der p 6 25 Chymotrypsin

    Der p 7 26-31 Природа неизвестна

    Der p 8 27 Glutathione-S-transferase

    Der p 9 29 Collagenolytic serine protease

    Der p 10 36 Tropomyosine

    Der p 11 103 Paramyosine

    Der p 14 177 Apolipophorin

    Der p 20 ? Arginine kinase

    Der p 21 ? Природа неизвестна

    Der p 23 14 Природа неизвестна

    выработку специфических IgE-антител в той же степени, что и Der p 2 [36]. Кроме того, пролиферативный и цитокиновый ответ на 1 и 7 группы аллергенов доказывает существование Т-клеточной перекрестной реактивности [28].

    Резюмируя вышесказанное — главными аллергенами клещей домашней пыли являются Der p 1 (цистеиновая протеаза) и Der p 2 (семейство NPC2). Более чем у 80% пациентов, сенсибилизированных к клещам домашней пыли, в сыворотке определяются специфические IgE-антитела к одному или обоим компонентам (была продемонстрирована высокая перекрестная реактивность между аллергенами обеих групп) [40, 48]. Таким образом, Der p 1 и Der p 2 могут являться маркерами специфической сенсибилизации и, в дальнейшем, необходимости проведения АСИТ [55].

    Особый интерес представляет определение уровня Der p 10/Der f 10, или тропомиозина клещей домашней пыли. Тропомиозин представляет собой белок с молекулярной массой 35-37 кДа, присутствующий в клетках всех представителей животного царства [45]. Около 10% пациентов с сенсибилизацией к клещам домашней пыли имеют специфические IgE-антитела к тропомиозину клещей домашней пыли. Частота встречаемости сенсибилизации к тропомиозину клещей Der p 10 варьирует от очень высокой (до 80% в Японии) до более низкой (до 10% в Европе). Der p 10 и Der f 10 имеют высокую степень гомологии (98%) [47] и, следовательно, высокую степень перекрестной реактивности. Исследования показывают формирование перекрестной реактивности между тропомиозином клещей до-

    машней пыли и других источников до 75-80%. Например, характерной чертой сенсибилизации к морепродуктам (креветкам) является сопутствующая сенсибилизация к тропомиозину клещей. Потенциально пациенты с наличием специфических IgE-антител к Der p 10 имеют более высокий риск развития аллергических реакций к морепродуктам, паразитам и насекомым [16, 24, 29, 34, 44]. Следует также упомянуть, что степень гомологии тропомиозина клещей домашней пыли и человеческого тропомиозина может достигать 56% [15, 46].

    Диагностика клещевой аллергии

    Для диагностики сенсибилизации к аллергенам клещей домашней пыли широко используются методы in vivo и in vitro диагностики. Среди методов in vivo диагностики важное место занимает метод кожного тестирования, который выявляет реакции немедленного типа в случае IgE-зависимых аллергических реакций [4, 5, 8]. В случае несоответствия результатов кожного тестирования и анамнеза рекомендуется использовать провокационные тесты [8].

    In vitro диагностика. Исследование уровней общего и специфических IgE-антител в диагностике аллергических заболеваний используется с 1967 г.

    Для определения уровней специфических IgE-антител большое значение имеет качество используемых реагентов; по возможности необходимо использовать стандартизованные экстракты. Измерение уровней специфических

    Коровкина Е.С., Мокроносова М.А.

    IgE-антител не зависит от приема медикаментов или наличия кожных заболеваний [54].

    При использовании стандартизованных аллергенов результаты, полученные при определении аллерген-специфических IgE-антител, тесно коррелируют с данными кожного тестирования и провокационных назальных тестов [10, 30].

    Компонентная диагностика (Component-resolveddiagnostic, CRD, CR-диагностика)

    С введением в практику молекулярных биотехнологий стала возможна молекулярная идентификация многих важных аллергенов, участвующих в развитии заболевания. Для большинства аллергенов (таких как пыльца деревьев, злаков, клещей, перхоть животных, плесени и др.) стала возможной разработка панелей рекомбинатных аллергенов. Кроме того, доказано, что использование рекомбинантных аллергенов, в дополнение к аллергенным экстрактам, значительно повышает чувствительность диагностических методик, поскольку рекомбинатные аллергены содержат большое количество эпитопов натуральных аллергенов. Указанный метод исследования стал возможным после выхода диагностической тест-системы ImmunoCap ISAC, разработанной компанией Phadia AB (Uppsala, Швеция). Данная диагностическая методика позволяет производить измерение уровней специфических IgE-антител к рекомбинантным или выделенным из натуральных источников отдельным аллергенным молекулам и дает представление о сенсибилизирующем профиле пациентов с атопией [7, 38, 40, 54].

    Компонентная диагностика в случае клещевой аллергии использует определение специфических IgE-антител к молекулам рекомбинантных и очищенных аллергенов (nDer p 1, nDer f 1, nDer p 2, rDer f 2, rDer p 10, rEur m 2). Это помогает в идентификации мажорных аллергенов и исключении перекрестной реактивности с такими аллергенами, как, например, тропомиозин клещей. В случае пироглифидных клещей CR-диагностика помогает выделить группы пациентов, не имеющих сенсибилизации к 1 и 2 группам аллергенов, а также имеющих поливалентную сенсибилизацию. Pittner и соавт. показали, что пациенты, сенсибилизированные к Der p 1 и 2, а также к большому количеству других аллергенов, в сравнении с пациентами, имеющими специфические IgE-антитела только к аллергенам 1 и 2 групп, в меньшей степени показывают положительный ответ в случае проведения аллер-ген-специфической иммунотерапии [40].

    Место аллерген-специфической иммунотерапии в лечении клещевой аллергии

    Следующим логическим шагом после получения полной информации об индивидуальном

    профиле сенсибилизации конкретного пациента является прогностическая оценка различных форм аллерген-специфической иммунотерапии. Исходя из этого предположения, должны синтезироваться лечебные вакцины на основе рекомбинантных аллергенов со сниженной аллергенной активностью для минимизации рисков развития побочных эффектов АСИТ

    Важность стандартизации на этапе производства аллергенов

    Поскольку лечебные и диагностические аллергены делаются из натурального сырья, следует помнить, что вариабельность композиции и концентрации аллергенов в разных последовательных сериях сырья прямо связана с таковой в лечебных аллергенных экстрактах, произведенных на основе этого сырья; следовательно, состав и концентрация аллергенов могут варьировать между сериями. Качество экстрактов аллергена сильно зависит от качества исходного сырья, которое должно соответствовать высоким стандартам и добываться и обрабатываться согласно регуляторным требованиям. Стандартизация экстрактов аллергена гарантирует стабильность от серии к серии путем сглаживания вариаций биологической активности между сериями [10, 11].

    На сегодняшний день существуют следующие основные системы стандартизации аллергенов [10]:

    — AU (Allergy Units — аллергенные единицы) разработана в лаборатории FDA (Food Drug Administration, США), основана на кожной реакции пациента in vivo, выраженной суммарным диаметром эритемы в мм на внутрикожное титрование аллергеном.

    — BU (Biological Units — биологические единицы) разработана в Европе, позволяет измерять дозу аллергена в биоэквивалентных единицах, которые рассчитываются по кожной реакции при prick-тестировании.

    — IR (индекс реактивности): экстракт аллергена описывается значением 100 IR/мл, когда он вызывает кожную реакцию на прик-тест площадью в 38,5 мм2 или диаметром в 7 мм.

    В настоящее время в европейских странах приняты следующие стандарты производства аллергенов:

    — однородность качественного и количественного состава исходного сырья;

    — отсутствие/минимизация потенциальных загрязняющих элементов;

    — сохранение биологических свойств аллергенных компонентов при очистке;

    — приемлемое количество и природа используемых консервантов;

    Аллергия к клещам домашней пыли

    — стандартизация аллергенных препаратов;

    — контроль иммунологической активности аллергенного экстракта на различных стадиях производства с помощью внутреннего референсного стандарта IHRS (In House Reference Standard).

    Поскольку универсальные единицы стандартизации на сегодняшний день не разработаны, каждый производитель устанавливает свою внутреннюю систему стандартизации.

    На сегодняшний день принята следующая система стандартизации аллерговакцин по содержанию мажорных аллергенов клещей домашней пыли: в 100 IR референт препарата содержится: Der p 1 = 25 pg/ml, Der f 1 = 16 pg/ml.

    Результаты многочисленных клинических испытаний свидетельствуют о доказательной эффективности аллерген-специфической иммунотерапии (АСИТ) [1, 10, 11]. Однако описаны случаи как очень высокого и среднего терапевтического эффекта, так и его отсутствия. До сих пор не разработаны объективные критерии, позволяющие прогнозировать эффективность АСИТ. Необходимо внедрение объективных лабораторных маркеров, определяющих целесообразность проведения АСИТ у конкретных индивидуумов, позволяющих оценивать динамику в ходе терапии [11, 12]. Считается, что АСИТ с использованием экстрактов аллергенов клещей домашней пыли эффективна в случае аллергических ринитов и астмы. Кроме того, АСИТ аллергенами клещей домашней пыли показывает снижение неспецифической бронхиальной гиперреактивности. Также доказано, что проведение АСИТ в раннем детском возрасте может предупреждать развитие сенсибилизации к другим группам аллергенов. Однако рядом исследований была показана более низкая эффективность АСИТ клещевыми аллергенами в сравнении с АСИТ пыльцевыми аллергенами. Кроме того, АСИТ клещевыми аллергенами ассоциирована с более частым развитием побочных эффектов [35]. Исходя из этих соображений, подбор пациентов для проведения АСИТ не должен базироваться только на определении сенсибилизации к Der p 1 и Der p 2. Диагностические тесты, содержащие перекрестно-реагирующие аллергены, в том числе Der p 10, могут быть использованы для выявления пациентов, в меньшей степени подходящих для проведения АСИТ. Т.е. очищенные натуральные и рекомбинантные клещевые аллергены могут быть использованы для оценки эффективности проводимой иммунотерапии [38, 40, 55].

    В нашей клинике наблюдался пациент Б., 2001 года рождения. Клинический диагноз: бронхиальная астма, атопическая форма, персистиру-ющая, средне-тяжелое течение, контролируемая

    неполностью. Атопический дерматит, течение средней тяжести, неполная ремиссия на момент осмотра. Персистирующий аллергический риноконъюнктивит. Сенсибилизация к бытовым, пыльцевым, эпидермальным аллергенам. Из анамнеза известно, что с первых месяцев жизни мальчика беспокоили сухость, гиперемия, папулезно-везикулезные высыпания на коже, преимущественно в проекции кожных складок (локтевые, подколенные сгибы, шея, кисти, стопы, голеностопные суставы), обострения кожного процесса наблюдались в холодный период. Из терапии получал антигистаминные препараты 2 поколения, ГКС-мази с кратковременным эффектом. С 2003 г. пациент стал отмечать появление приступов удушья, приступообразного сухого кашля, свистов в грудной клетке, а также затруднения носового дыхания, приступообразного чихания, зуда в носу, зуда век. Симптомы наблюдались круглогодично с усилением при контакте с домашними животными (кошки, собаки), во время ОРВИ, а также в период апрель-май. При обследовании у аллерголога в 2004 г. отмечены повышение уровня общего иммуноглобулина Е до 700 кЕ/л, повышение уровней специфических иммуноглобулинов Е к аллергенам пыльцы березы более 100 kU/l, ольхи — более 100 kU/l, лещины — более 100 kU/l, дуба — 90 kU/l, тимофеевки луговой — более 100 kU/l, ржи — более 100 kU/l, полыни — 1,6 kU/l, подорожника — 28 kU/l, D. pteronissinus — более 100 kU/l, D. farinae — более 100 kU/l, шерсти кошки — 68 kU/l. При цитологическом эксфо-лиативном исследовании назального секрета количество эозинофилов составило 17%. При проведении кожного тестирования (prick-тесты) получены следующие результаты: береза — 10 мм, клещ D. farinae — 12 мм, D. pteronissinus — 10 мм, кошка — 7 мм, лошадь — 8 мм, тимофеевка — 10 мм, полынь — 7 мм. В качестве базисной терапии пациент получал ГКС интрабронхиально и интраназально, антигистаминные препараты 2 поколения в возрастной дозировке, местно — препараты пиритиона цинка с положительным эффектом. Учитывая жалобы и анамнез пациента, данные аллергообследования, в 2004, 2005 гг. были проведены 2 курса АСИТ. В качестве лечебного аллергена был выбран аллерген клещей домашней пыли. До начала терапии ARTSS (Average Rhinoconjunctivitis Total Symptom Score — шкала учета симптомов аллергического риноконъюн-ктивита) составил 7,11 баллов, ARMS (Average Rescue Medication Score — шкала учета использования медикаментов) — 1,35 баллов. После проведения двух последовательных курсов АСИТ аллергенами клещей домашней пыли положительного эффекта отмечено не было: ARTSS 6,9

    Коровкина Е.С., Мокроносова М.А.

    баллов, ARMS 1,7 баллов. Пациент продолжал получать базисную терапию топическими ГКС (интрабронхиально, интраназально), антигиста-минными препаратами 2 поколения. В период с 2005 по 2010 г. произошло усиление симптомов аллергического риноконъюнктивита, учащение и усиление приступов удушья в ночные часы и при контакте с домашними животными, при нахождении в запыленных помещениях, в период с апреля по август, также присоединился синдром оральной аллергии в виде першения в горле, зуда в полости рта, заложенности носа, отечности слизистой языка при употреблении в пищу яблок, косточковых фруктов. Интересно отметить, что с раннего детского возраста ребенок отказался от употребления в пищу рыбы и любых морепродуктов. При повторном аллергообследовании в 2011 г. определение специфических иммуноглобулинов Е к компонентам аллергенов методом ISAC, Phadia были получены следующие результаты: rBet v 1 — более 100 kU/l (6 класс), rBet v 2 (profilin) — 25,5 kU/l (4 класс), rBet v 4 — 0 класс, rBet v 6 — 2,36 kU/l (2 класс), nOle e 1 — 0,77 kU/l (2 класс), rPhl p 12 (profilin) — 16,4 kU/l (3 класс), nArt v 3 (LTP) — 17,0 kU/l (3 класс), rCor a 8 — 0 класс, rCor a 1 — 63,6 kU/l (5 класс), rDer p 1 — 0 класс, rDer p 2 — 0 класс, rDer p 10 (Tropomyosin) — 91,20 kU/l (5 класс).

    Таким образом, у нашего пациента ретроспективно была выявлена сенсибилизация к белкам группы профилинов, тропомиозину, LTP, что косвенно может объяснять неэффективность проведенной аллерген-специфической иммунотерапии в данном случае, что совпадает с литературными данными [37, 55].

    1. Воробьева О.В., Гущин И.С. Контролируемые исследования эффективности и безопасности аллергенспецифической иммунотерапии: исторический аспект // Российский аллергологический журнал. — 2011. — № 4. — С. 3-14.

    2. Желтикова Т.М., Антропова А.Б., Петрова-Никитина А.Д., Мокеева В.Л., Биланен-ко Е.Н., Чекунова Л.Н. Экология жилых помещений и аллергия // Аллергология. — 2004. — № 3. — C. 20-28.

    3. Желтикова Т.М., Мокроносова М.А. Распространение клещей амбарно-зернового комплекса и их роль в сенсибилизации жителей г. Москвы // Бюллетень экспериментальной медицины и биологии. — 1991. — № 4. — С. 396-398.

    4. Коровкина Е.С., Курбачева О.М., Ильина Н.И. Стандартные подходы к диагностике и лечению аллергического ринита // Российский аллергологический журнал. — 2005. — № 3. — С. 21-26.

    5. Курбачева О.М., Ильина Н.И., Лусс Л.В. Современная диагностика и терапия аллергического ринита: рациональность и обоснованность выбора // Аллергология. — 2003. — № 3. — C. 5154.

    6. Мокроносова М.А. Сенсибилизация к клещам амбарно-зернового комплекса // Терапевтический архив. — 1991. — № 3. — С. 53-55.

    7. Сергеев А.В., Мокроносова М.А. Синдром оральной аллергии // Медицинская иммунология. — 2011. — Т. 13, № 1. — C. 17-28.

    8. Читаева В.Г., Гущин И.С. Диагностическая значимость кожных проб и определения ал-лерген-специфического IgE при респираторной и пищевой аллергии // Российский аллергологический журнал. — 2008. — № 3. — C. 3-14.

    9. Akdemir C., Soyucen E. Sensitization of children to storage mites in Kutahya, Turkey // Korean. J. Parasitol. — 2009. — ЛЫ. 47 (4). — P. 387391.

    10. Allergic Rhinitis and its Impact on Asthma (ARIA) in collaboration with the World Health Organization (WHO) // J. Allergy Clin. Immunol. — 2001. — Vol. 108. — Suppl. — P. 147-336.

    11. Allergen immunotherapy therapeutic vaccines for allergic diseases. WHO Position Paper // Allergy. — 1998. — Vol. 53. — P. 1-42 .

    12. Alvarez-Cuesta E., Bousquet J., Canonica G.W, Durham S.R., Malling H.J., Valovirta E.; EAACI, Immunotherapy Task Force. Standarts for practical allergen-specific immunotherapy // Allergy. — 2006. — Vol. 61. — P. 1-23.

    13. Arlian L.G., Neal J.S., Morgan M.S., Vyszenski-Moher D.L., Rapp C.M., Alexander A.K. Reducing relative humidity is a practical way to control dust mites and their allergens in homes in temperate climates // J. Allergy Clin. Immunol. —

    2001. — Vol. 107, N 1. — P. 99-104.

    14. Arlian L.G., Platts-Mills T.A. The biology of dust mites and the remediation of mite allergens in allergic disease // J. Allergy Clin. Immunol. — 2001. — Vol. 107 (3 Suppl). — P. 406-413.

    15. Asturias J.A., Arilla M.C., Gomez-Bayon N.N., Martinez A., Martinez J., Palacios R. Sequencing and high level expression in Escherichia coli of the tropomyosin allergen (Der p 10) from Dermatophagoides pteronyssinus // Biochim. Biophys.Acta. — 1998. —Vol. 1397. — P. 27-30.

    16. Asyuso R., Reese G., Leong-Kee S.,

    Plante M., Lehrer S.B. Molecular basis of arthropod cross-reactivity: IgE-binding cross-reactive

    epitopes of srimp, hous-dust mite and cockroach tropomyosins // Int. Arch. Allergy Immunol. —

    2002. — Vol. 129. — P. 38-48.

    17. Bush R.K., Portnoy J.M. The role and abatement of fungal allergens in allergic diseases //

    Аллергия к клещам домашней пыли

    J. Allergy Clin. Immunol. — 2001. — Vol. 107 (3 Suppl). — P 430-440

    18. Chapman M.D. Environmental allergen monitoring and control // Allergy. — 1998. — VOl. 53. — P. 48-53.

    19. Choi S.Y., Lee I.Y., Sohn J.H., Lee YW., Shin Y.S., Yong T.S., Hong C.S., Park J.W Optimal conditions for the removal of house dust mite, dog dander, and pollen allergens using mechanical laundry // Ann. Allergy Asthma Immunol. — 2008. — Vol. 100, N 6. — Р. 583-588.

    20. Cuesta C., PMcido J.L., Delgado L., Miranda M., Moreira Silva J.P., Castel-Branco M.G., Vaz M. Cockroach allergy: a study of its prevalence using skin tests with commercial extracts // Allergol. Immunopathol. (Madr). — 1995. — Nov-Dec. — Vol. 23 (6). — P. 295-300.

    21. Custovic A., Chapman M. Risk levels for mite allergens. Are they meaningful? // Allergy. — 1998. — Vol. 53 (Suppl. 48). — P 71-76.

    22. Fernandez-Caldas E. Mite species of allergologie importance in Europe // Allergy. — 1997. — Vol. 52. — P 383-387.

    23. Gafvelin G., Johansson E., Lundin A., Smith A.M., Chapman M.D., Benjamin D.C., Derewenda U., van Hage-Hamsten M. Cross-reactivity studies of a new group 2 allergen from the dust mite Glycyphagus domesticus, Gly d 2, and group 2 allergens from Dermatophagoides pteronyssinus, Lepidoglyphus destructor, and Tyrophagus putres-centiae with recombinant allergens // J. Allergy Clin. Immunol. — 2001. — Vol. 107 (3). — P 511-518

    24. Gmez C., Sdnchez-Garcia S., IMnez M.D., L5pez R., Aguado E., L5pez E., Sastre B., Sastre J., Del Pozo V Tropomyosin IgE-positive results are a good predictor of shrimp allergy // Allergy. — 2011 — Vol. 66 (10). — P 1375-1383

    25. GINA Report, Global Strategy for Asthma Management and Prevention. Published November 2006 // http://www.ginasthma.org.

    26. Gronlund H., Saarne T., Gafvelin G., van Hage M. The major cat allergen, Fel d 1, in diagnosis and therapy // Int. Arch. Allergy Immunol. — 2010. — Vol. 151 (4). — P 265-274.

    27. Hage-Hamsten M. van, Johansson E. Clinical and immunologic aspects of storage mite allergy // Allergy. — 1998. — Vol. 53 (Suppl. 48). — P. 49-53.

    28. Hales B.J., Shen H.D, Thomas WR. Crossreactivity of T-cell responses to Dermatophagoides pteronyssinus and D. farinae. Studies with group 1 and 7 allergens // Clin. Exp. Allergy. — 2000. — Vol. 30 (7). — P. 927-933.

    29. Johansson E., Aponno M., Lundberg M., Van Hage-Hamsten M. Allergenic cross-reactivity between the nematode Anisakis simplex and the dust mites Acarussiro, Lepidoglyphus destructor, Tyrophagus putrescentiae, and Dermatophagoides

    pteronyssinus // Allergy. — Vol. 56. — Issue 7. — P. 660-666.

    30. Kerkhof M., Droste J.H.J., de Monchf J.G.R., Schouten J.P, Rijcken B. Distribution of total serum IgE and specific IgE to common aeroallergens by sex and age, and their relationship to each other in a random sample of the Dutch general population aged 20-70 years // Allergy. — 1996. — Vol. 51. — P 770776.

    31. Kim Y.K., Lee M.H., Jee Y.K., Hong S.C., Bae J.M., Chang Y.S., Jung J.W, Lee B.J., Son J.W, Cho S.H., Min K.U., Kim Y.Y. Spider mite allergy in apple-cultivating farmers: European red mite (Panonychusulmi) and two-spotted spider mite (Tetranychusurticae) may be important allergens in the development of work-related asthma and rhinitis symptoms // J. Allergy Clin. Immunol. — 1999. — Vol. 104 (6). — P 1285-1292.

    32. King C., Brennan S., Thompson PJ., Stewart G.A. Dust mite proteolytic allergens induce cytokine release from cultured airway epithelium // J. Immunol. — 1998. — Vol. 161. — P 3645-3651.

    33. King T.P., Hoffman D., Lowenstein H., Marsh D.G., Platts-Mills T.A., Thomas W Allergen nomenclature // Allergy. — 1995. — Vol. 50. — P. 765774.

    34. Lopata A.L., Lehrer S. New insights into seafood allergy // Curr. Opin. Allergy Clin. Immunol. — 2009. — Vol. 9. — P. 270-277.

    35. Mellerup M.T., Hahn G.W, Poulsen L.K., Malling H. Safety of allergen-specific immunotherapy. Relation between dosage regiment, allergen extract, disease and systemic side-effect during induction treatment // Clin. Exp. Allergy. — 2000. — Vol. 30. — P 1423-1429.

    36. Mueller G. A., Edwards L.L., Aloor J.J., Fessler M.B., Glesner J., Pom s A., Chapman M.D., London R.E., Pedersen L.C. The structure of the dust mite allergen Der p 7 reveals similarities to innate immune proteins // J. Allergy Clin. Immunol. — 2010. — Vol. 125 (4). — P 909-917.

    37. Partti-Pellinen K., Marttila O., M^kinen-Kiljunen S., Haahtela T. Occurrence of dog, cat, and mite allergens in public transport vehicles // Allergy. — 2000. — Vol. 55. — P. 65-68.

    38. Pauli G. Evolution of understanding of cross-reactivities of respiratory allergens: the role of recombinant allergens // Int. Arch. Allergy Immunol. — 2000. — Vol. 123. — P 183-195.

    39. Peake H.L., Currie A.J., Stewart G.A, McWilliam A.S. Nitric oxide production by alveolar macrophages in response to house dust mite fecal pellets and the mite allergens, Der p 1 and Der p 2 // J. Allergy Clin. Immunol. — 2003. — Vol. 112 (3). — P. 531-537.

    40. Pittner G., Vrtala S., Thomas W.R., Weghofer M., Kundi M., Horak F., Kraft D.,

    Коровкина Е.С., Мокроносова М.А.

    Valenta R. Component-resolved diagnosis of house-dust mite allergy with purified natural and recombinant mite allergens // Clin. Exp. Allergy. — 2004. — Vol. 34 (4). — P. 597-603.

    41. Platts-Mills T.A., Vervloet D., Thomas WR., Aalberse R.C., Chapman M.D. Indoor allergens and asthma: report of the Third International Workshop // J. Allergy Clin. Immunol. — 1997. — Vol. 100 (6). — P. 2-24.

    42. Pongracic J.A., O’Connor G.T., Muilenberg M.L., Vaughn B., Gold D.R., Kattan M., Morgan WJ., Gruchalla R.S., Smartt E., Mitchell H.E. Differential effects of outdoor versus indoor fungal spores on asthma morbidity in inner-city children // J. Allergy Clin. Immunol. — 2010. — Vol. 125 (3). — P. 593-599.

    43. Ree R. van. Analytic aspects of the standardization of allergenic extracts // Allergy. — 1997. — Vol. 52. — P. 795-805.

    44. Santos A.B., Rocha G.M., Oliver C., Ferriani V.P., Lima R.C., Palma M.S., Sales V.S, Aalberse R.C, Chapman M.D., Arruda L.K. Crossreactive IgE antibody responses to tropomyosins from Ascaris lumbricoides and cockroach // J. Allergy Clin. Immunol. — 2008 — Vol. 121 (4). — P. 1040-1046.

    45. Scala E., Alessandri C., Palazzo P., Pomponi D., Liso M., Bernardi M.L, Ferrara R., Zennaro D., Santoro M., Rasi C., Mari A. IgE recognition patterns of profilin, PR-10, and tropomyosin panallergens tested in 3,113 allergic patients by fllergen microarray-based technology // PLoS One. — 2011. — Vol. 6 (9). — e24912.

    46. Sever M.L., Arbes S.J., Gore J.,

    Santangelo R.G., Vaughn B., Mitchell H., Schal C., Zeldin D.C. Cockroach allergen reduction by cockroach control alone in low-income urban homes: A randomized control trial // J. Allergy Clin. Immunol. — 2007. — Vol. 120. —P. 849-855.

    47. Sidenius K.E., Hallas T.E., Poulsen L.K., Mosbech H. Allergen cross-reactivity between house-dust mites and other invertebrates // Allergy. — 2001. — Vol. 56 (8). — P. 723-33.

    48. Smith A.M., Benjamin D.C., Hozic N.,

    Derewenda U., Smith WA, Thomas W.R,

    Gafvelin G., van Hage-Hamsten M., Chapman M.D. The molecular basis of antigenic cross-reactivity between the group 2 mite allergens // J. Allergy Clin. Immunol. — 2001. — Vol. 107 (6). — P. 977-84.

    49. Son J.W, Kim H.Y., Park H.S., Lee M.H., Cho S.H., Min K.U., Kim YY. Citrus red mite (Panonychuscitri) is the most common sensitizing

    allergen of asthma and rhinitis in citrus farmers // Clin. Exp. Allergy. — 1999. — Vol. 29 (8). — P. 11021109.

    50. Strachan D., Sibbald B., Weiland S., Aft-Khaled N., Anabwani G., Anderson H.R., Asher M.I., Beasley R., Bjorkstdn B., Burr M., Clayton T., Crane J., Ellwood P., Keil U., Lai C., Mallol J., Martinez F., Mitchell E., Montefort S., Pearce N., Robertson C., Shah J., Stewart A., von Mutius E., Williams H. Worldwide variations in prevalence of symptoms of allergic rhinoconjunctivitis in children: the international study of asthma and allergies in childhood (ISAAC) // Pediatr. Allergy Immunol. — 1997. — Vol. 8. — P. 161-176.

    51. Thomas WR., Smith W. House-dust mite allergens // Allergy. — 1998. — Vol. 53. — P. 821-832.

    52. Thomas WR, Smith WA., Hales B.J. The allergenic specificities of the house dust mite // Chang. Gung. Med. J. — 2004. — Vol. 27 (8). — P. 563569.

    53. Thomas WR., Smith W.A., Hales B.J., Mills K.L., O’Brien R.M. Characterization and immunobiology of house dust mite allergens // Int. Arch.Allergy Immunol. — 2002. — Vol. 129 (1). — P. 1-18.

    54. Valenta R., Linholm J., Niederberger V., Hayek B., Kraft D., Gronlund H. The recombinant allergen-based concept of component-resolved diagnosis and immunotherapy (CD and CRIT) // Clin. Exp. Allergy. — 1999. — Vol. 29. — P. 896-904.

    55. Vrtala S. From allergen genes to new forms of allergy diagnosis and treatment // Allergy. — 2008. — Vol. 63. — P. 299-309.

    56. Warner A., Bostrom S., Moller C., Kjellman N.-I.M. Mite fauna in the home and sensitivity to house dust and storage mites // Allergy. — 1999. — Vol. 54. — P. 681-690.

    57. Zock J.P., Heinrich J., Jarvis D., Verlato G., Norback D., Plana E., Sunyer J., Chinn S., Olivieri M., Soon A., Villani S., Ponzio M., Dahlman-Hoglund A., Svanes C., Luczynska C. Indoor Working Group of the European Community Respiratory Health Survey Il. Distribution and determinants of house dust mite allergens in Europe: The European Community Respiratory Health Survey II // J. Allergy Clin. Immunol. — 2006. — Vol. 118, N 3. — P. 682-690.

    поступила в редакцию 16.01.2012 отправлена на доработку 29.01.2012 принята к печати 02.02.2012

    21. Аллергологические исследования

    Артикул Наименование Цена (руб.) Срок выполнения
    21-001 Панель ингаляционных аллергенов №7 (IgE): эпителий кошки, перхоть собаки, эпителий кролика, перхоть лошади, клещ Dermatophagoides pteronyssinus 800 до 3 суток
    21-006 Панель аллергенов трав №3 (IgE): колосок душистый, рожь многолетняя, рожь культивированная, тимофеевка, бухарник шерстистый 800 до 3 суток
    21-009 Аллерген p1 — Ascaris lumbricoides (аскарида), IgE 350 до 3 суток
    21-011 Аллерген m5 — Candida albicans, IgE 350 до 3 суток
    21-017 Аллерген c204 — амоксициллин, IgE 350 до 3 суток
    21-018 Аллерген c203 — ампициллин, IgE 350 до 3 суток
    21-019 Аллерген f210 — ананас, IgE 350 до 3 суток
    21-024 Аллерген g13 — бухарник шерстистый, IgE 350 до 3 суток
    21-027 Аллерген f209 — грейпфрут, IgE 350 до 3 суток
    21-028 Аллерген t10 — грецкий орех, IgE 350 до 3 суток
    21-034 Аллерген f12 — зеленый горошек, IgE 350 до 3 суток
    21-036 Аллерген f216 — капуста кочанная, IgE 350 до 3 суток
    21-038 Аллерген t1 — клён ясенелистный, IgE 350 до 3 суток
    21-040 Аллерген f36 — кокос, IgE 350 до 3 суток
    21-042 Аллерген i71 — комар, IgE 350 до 3 суток
    21-046 Аллерген f23 — крабы, IgE 350 до 3 суток
    21-049 Аллерген k82 — латекс, IgE 350 до 3 суток
    21-054 Аллерген f37 — мидии, IgE 350 до 3 суток
    21-055 Аллерген f20 — миндаль, IgE 350 до 3 суток
    21-059 Аллерген f244 — огурец, IgE 350 до 3 суток
    21-062 Аллерген c1 — пенициллин G, IgE 350 до 3 суток
    21-070 Аллерген g12 — рожь культивированная, IgE 350 до 3 суток
    21-071 Аллерген i70 — рыжий муравей, IgE 350 до 3 суток
    21-073 Аллерген f85 — сельдерей, IgE 350 до 3 суток
    21-080 Аллерген f40 — тунец, IgE 350 до 3 суток
    21-082 Аллерген f17 — фундук, IgE 350 до 3 суток
    21-083 Аллерген k20 — шерсть, IgE 350 до 3 суток
    21-084 Аллерген f105 — шоколад, IgE 350 до 3 суток
    21-086 Аллерген e2 — эпителий собаки, IgE 350 до 3 суток
    21-090 Определение специфических IgG к 90 наиболее часто встречаемым пищевым аллергенам 12 500 2 суток
    21-095 Аллерген f236 — молочная сыворотка, IgE 350 до 3 суток
    21-099 Аллерген f81 — сыр «чеддер», IgE 350 до 3 суток
    21-100 Аллерген f82 — сыр «моулд», IgE 350 до 3 суток
    21-101 Аллерген f254 — камбала, IgE 350 до 3 суток
    21-102 Аллерген f61 — сардина, IgE 350 до 3 суток
    21-103 Аллерген f50 — скумбрия, IgE 350 до 3 суток
    21-104 Аллерген f80 — лобстер (омар), IgE 350 до 3 суток
    21-105 Аллерген f338 — гребешок (моллюск), IgE 350 до 3 суток
    21-107 Аллерген f290 — устрицы, IgE 350 до 3 суток
    21-109 Аллерген f88 — баранина, IgE 350 до 3 суток
    21-111 Аллерген f212 — шампиньоны, IgE 350 до 3 суток
    21-113 Аллерген f8 — мука кукурузная, IgE 350 до 3 суток
    21-116 Аллерген f6 — мука ячменная, IgE 350 до 3 суток
    21-117 Аллерген f55 — просо, IgE 350 до 3 суток
    21-119 Аллерген f235 — чечевица, IgE 350 до 3 суток
    21-120 Аллерген f10 — кунжут, IgE 350 до 3 суток
    21-121 Аллерген f309 — нут (турецкий горох), IgE 350 до 3 суток
    21-122 Аллерген f15 — фасоль белая, IgE 350 до 3 суток
    21-123 Аллерген f315 — фасоль зеленая, IgE 350 до 3 суток
    21-124 Аллерген f287 — фасоль красная, IgE 350 до 3 суток
    21-128 Аллерген f202 — орех кешью, IgE 350 до 3 суток
    21-130 Аллерген f203 — фисташковые орехи, IgE 350 до 3 суток
    21-131 Аллерген f403 — пивные дрожжи, IgE 350 до 3 суток
    21-132 Аллерген f90 — солод, IgE 350 до 3 суток
    21-134 Аллерген f262 — баклажан, IgE 350 до 3 суток
    21-135 Аллерген f260 — капуста брокколи, IgE 350 до 3 суток
    21-136 Аллерген f217 — капуста брюссельская, IgE 350 до 3 суток
    21-139 Аллерген f261 — спаржа, IgE 350 до 3 суток
    21-140 Аллерген f86 — петрушка, IgE 350 до 3 суток
    21-142 Аллерген f214 — шпинат, IgE 350 до 3 суток
    21-143 Аллерген f47 — чеснок, IgE 350 до 3 суток
    21-144 Аллерген f48 — лук, IgE 350 до 3 суток
    21-146 Аллерген f234 — ваниль, IgE 350 до 3 суток
    21-147 Аллерген f89 — горчица, IgE 350 до 3 суток
    21-149 Аллерген f270 — имбирь, IgE 350 до 3 суток
    21-150 Аллерген f281 — карри (приправа), IgE 350 до 3 суток
    21-151 Аллерген f278 — лавровый лист, IgE 350 до 3 суток
    21-154 Аллерген f405 — мята, IgE 350 до 3 суток
    21-155 Аллерген f218 — перец красный (паприка), IgE 350 до 3 суток
    21-156 Аллерген f263 — перец зеленый, IgE 350 до 3 суток
    21-157 Аллерген f280 — перец черный, IgE 350 до 3 суток
    21-162 Аллерген f237 — абрикос, IgE 350 до 3 суток
    21-163 Аллерген f96 — авокадо, IgE 350 до 3 суток
    21-164 Аллерген f242 — вишня, IgE 350 до 3 суток
    21-165 Аллерген f94 — груша, IgE 350 до 3 суток
    21-166 Аллерген f87 — дыня, IgE 350 до 3 суток
    21-167 Аллерген f402 — инжир, IgE 350 до 3 суток
    21-170 Аллерген f91 — манго, IgE 350 до 3 суток
    21-173 Аллерген f95 — персик, IgE 350 до 3 суток
    21-174 Аллерген f255 — слива, IgE 350 до 3 суток
    21-175 Аллерген f289 — финики, IgE 350 до 3 суток
    21-176 Аллерген f301 — хурма, IgE 350 до 3 суток
    21-177 Аллерген f288 — ягоды рода брусничных (черника, голубика, брусника), IgE 350 до 3 суток
    21-178 Аллерген k84 — масло подсолнечное, IgE 350 до 3 суток
    21-179 Аллерген e7 — голубиный помет, IgE 350 до 3 суток
    21-182 Аллерген e201 — перо канарейки, IgE 350 до 3 суток
    21-183 Аллерген e80 — эпителий козы, IgE 350 до 3 суток
    21-184 Аллерген e4 — перхоть коровы, IgE 350 до 3 суток
    21-185 Аллерген e82 — эпителий кролика, IgE 350 до 3 суток
    21-186 Аллерген e87 — крыса, IgE 350 до 3 суток
    21-187 Аллерген e74 — моча крысы, IgE 350 до 3 суток
    21-189 Аллерген e73 — эпителий крысы, IgE 350 до 3 суток
    21-191 Аллерген e219 — протеины сыворотки курицы, IgE 350 до 3 суток
    21-192 Аллерген e3 — перхоть лошади, IgE 350 до 3 суток
    21-194 Аллерген e88 — мышь, IgE 350 до 3 суток
    21-198 Аллерген e81 — эпителий овцы, IgE 350 до 3 суток
    21-199 Аллерген e91 — перо попугая, IgE 350 до 3 суток
    21-200 Аллерген e78 — перо волнистого попугая, IgE 350 до 3 суток
    21-201 Аллерген e83 — эпителий свиньи, IgE 350 до 3 суток
    21-203 Аллерген e84 — хомяк, IgE 350 до 3 суток
    21-204 Аллерген t19 — акация, IgE 350 до 3 суток
    21-206 Аллерген t5 — бук, IgE 350 до 3 суток
    21-207 Аллерген t8 — вяз, IgE 350 до 3 суток
    21-209 Аллерген t77 — дуб смешанный, IgE 350 до 3 суток
    21-217 Аллерген t401 — бразильское перечное дерево, IgE 350 до 3 суток
    21-218 Аллерген t11 — платан, IgE 350 до 3 суток
    21-220 Аллерген t16 — сосна белая, IgE 350 до 3 суток
    21-223 Аллерген t18 — эвкалипт, IgE 350 до 3 суток
    21-225 Аллерген f256 — орех грецкий, IgE 350 до 3 суток
    21-229 Аллерген g202 — кукурузные рыльца, IgE 350 до 3 суток
    21-230 Аллерген g14 — овес культивированный, IgE 350 до 3 суток
    21-231 Аллерген g15 — пшеница культивированная, IgE 350 до 3 суток
    21-235 Аллерген w20 — крапива, IgE 350 до 3 суток
    21-236 Аллерген w75 — лебеда седоватая, IgE 350 до 3 суток
    21-238 Аллерген w10 — марь белая, IgE 350 до 3 суток
    21-240 Аллерген w9 — подорожник, IgE 350 до 3 суток
    21-241 Аллерген w5 — полынь горькая, IgE 350 до 3 суток
    21-242 Аллерген w19 — постенница лекарственная, IgE 350 до 3 суток
    21-245 Аллерген m208 — Chaetomium globosum, IgE 350 до 3 суток
    21-246 Аллерген o72 — энтеротоксин А (Staphylococcus aureus), IgE 350 до 3 суток
    21-247 Аллерген o73 — энтеротоксин B (Staphylococcus aureus), IgE 350 до 3 суток
    21-248 Аллерген p4 — Anisakis Larvae, IgE 350 до 3 суток
    21-249 Аллерген i8 — моль, IgE 350 до 3 суток
    21-250 Аллерген i73 — личинка красной мошки, IgE 350 до 3 суток
    21-251 Аллерген i204 — слепень, IgE 350 до 3 суток
    21-252 Аллерген i2 — шершень, IgE 350 до 3 суток
    21-255 Аллерген i3 — осиный яд (Vespula spp.), IgE 350 до 3 суток
    21-256 Аллерген i4 — осиный яд (Polistes spp.), IgE 350 до 3 суток
    21-257 Аллерген i1 — пчелиный яд, IgE 350 до 3 суток
    21-258 Аллерген c2 — пенициллин V, IgE 350 до 3 суток
    21-259 Аллерген c70 — инсулин свиной, IgE 350 до 3 суток
    21-260 Аллерген c71 — инсулин бычий, IgE 350 до 3 суток
    21-261 Аллерген c73 — инсулин человеческий, IgE 350 до 3 суток
    21-262 Аллерген o1 — хлопок, IgE 350 до 3 суток
    21-263 Аллерген k74 — шелк, IgE 350 до 3 суток
    21-265 Аллерген k301 — пыль пшеничной муки, IgE 350 до 3 суток
    21-266 Аллерген k80 — формальдегид, IgE 350 до 3 суток
    21-267 Аллерген k81 — фикус, IgE 350 до 3 суток
    21-269 Аллерген p1 — Ascaris lumbricoides (аскарида), IgG 350 до 3 суток
    21-277 Аллерген c204 — амоксициллин, IgG 350 до 3 суток
    21-279 Аллерген f210 — ананас, IgG 350 до 3 суток
    21-280 Аллерген f33 — апельсин, IgG 350 до 3 суток
    21-281 Аллерген f13 — арахис, IgG 350 до 3 суток
    21-282 Аллерген f92 — банан, IgG 350 до 3 суток
    21-283 Аллерген t3 — берёза, IgG 350 до 8 суток
    21-285 Аллерген f259 — виноград, IgG 350 до 3 суток
    21-286 Аллерген f27 — говядина, IgG 350 до 3 суток
    21-287 Аллерген f209 — грейпфрут, IgG 350 до 3 суток
    21-288 Аллерген t10 — грецкий орех, IgG 350 до 3 суток
    21-289 Аллерген f11 — гречневая мука, IgG 350 до 3 суток
    21-290 Аллерген h1 — домашняя пыль (аллерген производства Greer Labs.), IgG 350 до 8 суток
    21-294 Аллерген f12 — зеленый горошек, IgG 350 до 3 суток
    21-296 Аллерген f216 — капуста кочанная, IgG 350 до 3 суток
    21-297 Аллерген f35 — картофель, IgG 350 до 3 суток
    21-299 Аллерген f44 — клубника, IgG 350 до 3 суток
    21-300 Аллерген f36 — кокос, IgG 350 до 3 суток
    21-303 Аллерген f2 — коровье молоко, IgG 350 до 3 суток
    21-305 Аллерген f221 — кофе, IgG 350 до 3 суток
    21-306 Аллерген f23 — крабы, IgG 350 до 3 суток
    21-307 Аллерген f24 — креветки, IgG 350 до 3 суток
    21-308 Аллерген f83 — куриное мясо, IgG 350 до 3 суток
    21-309 Аллерген k82 — латекс, IgG 350 до 8 суток
    21-311 Аллерген f208 — лимон, IgG 350 до 3 суток
    21-313 Аллерген f41 — лосось, IgG 350 до 3 суток
    21-314 Аллерген f37 — мидия (голубая), IgG 350 до 3 суток
    21-315 Аллерген f20 — миндаль, IgG 350 до 3 суток
    21-316 Аллерген f31 — морковь, IgG 350 до 3 суток
    21-319 Аллерген f244 — огурец, IgG 350 до 3 суток
    21-321 Аллерген f45 — пекарские дрожжи, IgG 350 до 3 суток
    21-322 Аллерген c1 — пенициллин G, IgG 350 до 3 суток
    21-323 Аллерген e5 — перхоть собаки, IgG 350 до 3 суток
    21-324 Аллерген d2 — пироглифидный клещ Dermatophagoides farinae, IgG 350 до 8 суток
    21-326 Аллерген d1 — пироглифидный клещ Dermatophagoides pteronyssinus, IgG 350 до 8 суток
    21-329 Аллерген f4 — пшеничная мука, IgG 350 до 3 суток
    21-332 Аллерген f26 — свинина, IgG 350 до 3 суток
    21-333 Аллерген f85 — сельдерей, IgG 350 до 3 суток
    21-334 Аллерген f14 — соевые бобы, IgG 350 до 3 суток
    21-337 Аллерген f25 — томаты, IgG 350 до 3 суток
    21-338 Аллерген t14 — тополь, IgG 350 до 8 суток
    21-339 Аллерген f3 — треска, IgG 350 до 3 суток
    21-340 Аллерген f40 — тунец, IgG 350 до 3 суток
    21-341 Аллерген f204 — форель, IgG 350 до 3 суток
    21-342 Аллерген f17 — фундук, IgG 350 до 3 суток
    21-343 Аллерген k20 — шерсть, IgG 350 до 3 суток
    21-344 Аллерген f105 — шоколад, IgG 350 до 3 суток
    21-345 Аллерген e1 — эпителий кошки, IgG 350 до 8 суток
    21-346 Аллерген e2 — эпителий собаки, IgG 350 до 8 суток
    21-347 Аллерген f49 — яблоко, IgG 350 до 3 суток
    21-348 Аллерген f1 — яичный белок, IgG 350 до 3 суток
    21-349 Аллерген f75 — яичный желток, IgG 350 до 3 суток
    21-350 Аллерген f232 — овальбумин, IgG 350 до 3 суток
    21-351 Аллерген f233 — овомукоид, IgG 350 до 3 суток
    21-352 Аллерген f245 — яйцо куриное, IgG 350 до 3 суток
    21-353 Аллерген f231 — кипяченое молоко, IgG 350 до 3 суток
    21-354 Аллерген f236 — молочная сыворотка, IgG 350 до 3 суток
    21-355 Аллерген f76 — альфа-лактоальбумин, IgG 350 до 3 суток
    21-356 Аллерген f77 — бета-лактоглобулин, IgG 350 до 3 суток
    21-357 Аллерген f78 — казеин, IgG 350 до 3 суток
    21-358 Аллерген f81 — сыр «чеддер», IgG 350 до 3 суток
    21-359 Аллерген f82 — сыр «моулд», IgG 350 до 3 суток
    21-360 Аллерген f254 — камбала, IgG 350 до 3 суток
    21-361 Аллерген f61 — сардина, IgG 350 до 3 суток
    21-362 Аллерген f50 — скумбрия, IgG 350 до 3 суток
    21-363 Аллерген f80 — лобстер (омар), IgG 350 до 3 суток
    21-364 Аллерген f338 — гребешок, IgG 350 до 3 суток
    21-366 Аллерген f290 — устрицы, IgG 350 до 3 суток
    21-368 Аллерген f88 — баранина, IgG 350 до 3 суток
    21-369 Аллерген f284 — индейка, IgG 350 до 3 суток
    21-370 Аллерген f212 — шампиньоны, IgG 350 до 3 суток
    21-371 Аллерген f79 — клейковина (глютен), IgG 350 до 3 суток
    21-372 Аллерген f8 — мука кукурузная, IgG 350 до 3 суток
    21-373 Аллерген f7 — мука овсяная, IgG 350 до 3 суток
    21-374 Аллерген f5 — мука ржаная, IgG 350 до 3 суток
    21-375 Аллерген f6 — мука ячменная, IgG 350 до 3 суток
    21-376 Аллерген f55 — просо, IgG 350 до 3 суток
    21-377 Аллерген f9 — рис, IgG 350 до 3 суток
    21-378 Аллерген f235 — чечевица, IgG 350 до 3 суток
    21-379 Аллерген f10 — кунжут, IgG 350 до 3 суток
    21-380 Аллерген f309 — нут (турецкий горох), IgG 350 до 3 суток
    21-381 Аллерген f15 — фасоль белая, IgG 350 до 3 суток
    21-382 Аллерген f315 — фасоль зеленая, IgG 350 до 3 суток
    21-383 Аллерген f287 — фасоль красная, IgG 350 до 3 суток
    21-385 Аллерген f93 — какао, IgG 350 до 3 суток
    21-387 Аллерген f202 — орех кешью, IgG 350 до 3 суток
    21-389 Аллерген f203 — фисташковые орехи, IgG 350 до 3 суток
    21-390 Аллерген f403 — пивные дрожжи, IgG 350 до 3 суток
    21-391 Аллерген f90 — солод, IgG 350 до 3 суток
    21-393 Аллерген f262 — баклажан, IgG 350 до 3 суток
    21-394 Аллерген f260 — капуста брокколи, IgG 350 до 3 суток
    21-395 Аллерген f217 — капуста брюссельская, IgG 350 до 3 суток
    21-396 Аллерген f291 — капуста цветная, IgG 350 до 3 суток
    21-397 Аллерген f225 — тыква, IgG 350 до 3 суток
    21-398 Аллерген f261 — спаржа, IgG 350 до 3 суток
    21-399 Аллерген f86 — петрушка, IgG 350 до 3 суток
    21-401 Аллерген f214 — шпинат, IgG 350 до 3 суток
    21-402 Аллерген f47 — чеснок, IgG 350 до 3 суток
    21-403 Аллерген f48 — лук, IgG 350 до 3 суток
    21-405 Аллерген f234 — ваниль, IgG 350 до 3 суток
    21-406 Аллерген f89 — горчица, IgG 350 до 3 суток
    21-408 Аллерген f270 — имбирь, IgG 350 до 3 суток
    21-409 Аллерген f281 — карри (приправа), IgG 350 до 3 суток
    21-410 Аллерген f278 — лавровый лист, IgG 350 до 3 суток
    21-413 Аллерген f405 — мята, IgG 350 до 3 суток
    21-414 Аллерген f218 — перец красный (паприка), IgG 350 до 3 суток
    21-415 Аллерген f263 — перец зеленый, IgG 350 до 3 суток
    21-416 Аллерген f280 — перец черный, IgG 350 до 3 суток
    21-421 Аллерген f237 — абрикос, IgG 350 до 3 суток
    21-422 Аллерген f96 — авокадо, IgG 350 до 3 суток
    21-423 Аллерген f242 — вишня, IgG 350 до 3 суток
    21-424 Аллерген f94 — груша, IgG 350 до 3 суток
    21-425 Аллерген f87 — дыня, IgG 350 до 3 суток
    21-426 Аллерген f402 — инжир, IgG 350 до 3 суток
    21-427 Аллерген f84 — киви, IgG 350 до 3 суток
    21-429 Аллерген f91 — манго, IgG 350 до 3 суток
    21-432 Аллерген f95 — персик, IgG 350 до 3 суток
    21-433 Аллерген f255 — слива, IgG 350 до 3 суток
    21-434 Аллерген f289 — финики, IgG 350 до 3 суток
    21-435 Аллерген f301 — хурма, IgG 350 до 3 суток
    21-436 Аллерген f288 — ягоды рода брусничных (черника, голубика, брусника), IgG 350 до 3 суток
    21-437 Аллерген k84 — масло подсолнечное, IgG 350 до 3 суток
    21-449 Аллерген e85 — перо курицы, IgG 350 до 8 суток
    21-476 Аллерген t401 — бразильское перечное дерево, IgG 350 до 3 суток
    21-490 Аллерген g15 — пшеница культивированная, IgG 350 до 3 суток
    21-505 Аллерген o72 — энтеротоксин А (Staphylococcus aureus), IgG 350 до 3 суток
    21-506 Аллерген o73 — энтеротоксин B (Staphylococcus aureus), IgG 350 до 3 суток
    21-528 Панель аллергенов животных № 70 (IgE): эпителий морской свинки, эпителий кролика, хомяк, крыса, мышь 800 до 3 суток
    21-529 Панель аллергенов животных № 71 (IgE): перо гуся, перо курицы, перо утки, перо индюка 800 до 3 суток
    21-530 Панель аллергенов животных № 72 (IgE): перо волнистого попугая, перо попугая, перо канарейки 800 до 3 суток
    21-531 Панель «профессиональных» аллергенов № 1 (IgE): перхоть лошади, перхоть коровы, перо гуся, перо курицы 800 до 3 суток
    21-533 Панель клещевых аллергенов № 1 (IgE): Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae, Dermatophagoides microceras, Lepidoglyphus destructor, Tyrophagus putrescentiae, Glycyphagus domesticus, Euroglyphus maynei, Blomia tropicalis 800 до 3 суток
    21-534 Панель аллергенов деревьев № 1 (IgE): клен ясенелистый, береза, вяз, дуб, грецкий орех 800 до 3 суток
    21-535 Панель аллергенов деревьев № 2 (IgE): клен ясенелистый, тополь, вяз, дуб, пекан 800 до 3 суток
    21-537 Панель аллергенов деревьев № 5 (IgE): oльха, лещина обыкновенная, вяз, ива белая, тополь 800 до 3 суток
    21-538 Панель аллергенов сорных трав № 1 (IgE): амброзия обыкновенная, полынь обыкновенная, подорожник, марь белая, зольник/cолянка, поташник 800 до 3 суток
    21-540 Панель пищевых аллергенов № 3 (IgE): пшеничная мука, овсяная мука, кукурузная мука, семена кунжута, гречневая мука 800 до 3 суток
    21-541 Панель пищевых аллергенов № 1 (IgE): арахис, миндаль, фундук, кокос, бразильский орех 800 до 3 суток
    21-542 Панель пищевых аллергенов № 2 (IgE): треска, тунец, креветки, лосось, мидии 800 до 3 суток
    21-544 Панель пищевых аллергенов № 6 (IgE): рис, семена кунжута, пшеничная мука, гречневая мука, соевые бобы 800 до 3 суток
    21-545 Панель пищевых аллергенов № 7 (IgE): яичный белок, рис, коровье молоко, aрахис, пшеничная мука, соевые бобы 800 до 3 суток
    21-546 Панель пищевых аллергенов № 13 (IgE): зеленый горошек, белая фасоль, морковь, картофель 800 до 3 суток
    21-547 Панель пищевых аллергенов № 15 (IgE): апельсин, банан, яблоко, персик 800 до 3 суток
    21-548 Панель пищевых аллергенов № 24 (IgE): фундук, креветки, киви, банан 800 до 3 суток
    21-549 Панель пищевых аллергенов № 25 (IgE): семена кунжута, пекарские дрожжи, чеснок, сельдерей 800 до 3 суток
    21-553 Панель пищевых аллергенов № 50 (IgE): киви, манго, бананы, ананас 800 до 3 суток
    21-554 Панель пищевых аллергенов № 51 (IgE): томаты, картофель, морковь, чеснок, горчица 800 до 3 суток
    21-556 Панель ингаляционных аллергенов № 1 (IgE): ежа сборная, тимофеевка, конский каштан, амброзия обыкновенная, полынь обыкновенная 800 до 3 суток
    21-557 Панель ингаляционных аллергенов № 2 (IgE): тимофеевка, Alternaria alternata (tenuis), береза, полынь обыкновенная 800 до 3 суток
    21-558 Панель ингаляционных аллергенов № 3 (IgE): Dermatophagoides pteronyssinus, эпителий кошки, эпителий собаки, Aspergillus fumigatus 800 до 3 суток
    21-559 Панель ингаляционных аллергенов № 6 (IgE): Cladosporium herbarum, тимофеевка, Alternaria alternata (tenuis), береза, полынь обыкновенная 800 до 3 суток
    21-560 Панель ингаляционных аллергенов № 8 (IgE): эпителий кошки, Dermatophagoides pteronyssinus, береза, перхоть собаки, полынь обыкновенная, тимофеевка, рожь культивированная, плесневый гриб (Cladosporum herbarum) 800 до 3 суток
    21-561 Панель ингаляционных аллергенов № 9 (IgE): эпителий кошки, перхоть собаки, овсяница луговая, Alternaria alternata (tenuis), подорожник 800 до 3 суток
    21-562 Панель ингаляционных аллергенов №7 (IgG): эпителий кошки, перхоть собаки, эпителий кролика, перхоть лошади, клещ Dermatophagoides pteronyssinus 800 до 3 суток
    21-563 Панель аллергенов плесени №1 (IgG): Penicillum notatum, Aspergillus fumigatus, Alternaria tenuis, Cladosporium herbarum, Candida albicans 800 до 8 суток
    21-564 Панель пыльцевых аллергенов деревьев №9 (IgG): ольха, береза, лещина обыкновенная, ива, дуб 800 до 8 суток
    21-565 Панель аллергенов трав №1 (IgG): ежа сборная, овсяница луговая, рожь многолетняя, тимофеевка, мятлик луговой 800 до 8 суток
    21-569 Панель аллергенов животных № 1 (IgG): эпителий кошки, перхоть лошади, перхоть коровы, перхоть собаки 800 до 3 суток
    21-574 Панель аллергенов пыли № 1 (IgG): домашняя пыль (Greer), Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae, таракан-прусак 800 до 3 суток
    21-575 Панель клещевых аллергенов № 1 (IgG): Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae, Dermatophagoides microceras, Lepidoglyphus destructor, Tyrophagus putrescentiae, Glycyphagus domesticus, Euroglyphus maynei, Blomia tropicalis 800 до 3 суток
    21-582 Панель пищевых аллергенов № 3 (IgG): пшеничная мука, овсяная мука, кукурузная мука, семена кунжута, гречневая мука 800 до 3 суток
    21-583 Панель пищевых аллергенов № 1 (IgG): арахис, миндаль, фундук, кокос, бразильский орех 800 до 3 суток
    21-584 Панель пищевых аллергенов № 2 (IgG): треска, тунец, креветки, лосось, мидии 800 до 3 суток
    21-585 Панель пищевых аллергенов № 5 (IgG): яичный белок, коровье молоко, треска, пшеничная мука, арахис, соевые бобы 800 до 3 суток
    21-586 Панель пищевых аллергенов № 6 (IgG): рис, семена кунжута, пшеничная мука, гречневая мука, соевые бобы 800 до 3 суток
    21-587 Панель пищевых аллергенов № 7 (IgG): яичный белок, рис, коровье молоко, aрахис, пшеничная мука, соевые бобы 800 до 3 суток
    21-588 Панель пищевых аллергенов № 13 (IgG): зеленый горошек, белая фасоль, морковь, картофель 800 до 3 суток
    21-589 Панель пищевых аллергенов № 15 (IgG): апельсин, банан, яблоко, персик 800 до 3 суток
    21-590 Панель пищевых аллергенов № 24 (IgG): фундук, креветки, киви, банан 800 до 3 суток
    21-591 Панель пищевых аллергенов № 25 (IgG): семена кунжута, пекарские дрожжи, чеснок, сельдерей 800 до 3 суток
    21-592 Панель пищевых аллергенов № 26 (IgG): яичный белок, молоко, арахис, горчица 800 до 3 суток
    21-595 Панель пищевых аллергенов № 50 (IgG): киви, манго, бананы, ананас 800 до 3 суток
    21-596 Панель пищевых аллергенов № 51 (IgG): томаты, картофель, морковь, чеснок, горчица 800 до 3 суток
    21-597 Панель пищевых аллергенов № 73 (IgG): свинина, куриное мясо, говядина, баранина 800 до 3 суток
    21-604 Аллерген c68 — артикаин/ультракаин, IgE 380 до 8 суток
    21-605 Аллерген c88 — мепивакаин/полокаин, IgE 380 до 8 суток
    21-606 Аллерген c82 — лидокаин/ксилокаин, IgE 380 до 8 суток
    21-607 Аллерген c83 — прокаин/новокаин, IgE 380 до 8 суток
    21-608 Аллерген c86 — бензокаин, IgE 380 до 8 суток
    21-609 Аллерген c100 — прилокаин/цитанест, IgE 380 до 8 суток
    21-610 Аллерген c89 — бупивакаин/анекаин/маркаин, IgE 380 до 8 суток
    21-611 Аллерген c210 — тетракаин/дикаин, IgE 380 до 8 суток
    21-612 Аллерген k40 — никель, IgE 380 до 8 суток
    21-613 Аллерген k41 — хром, IgE 380 до 8 суток
    21-614 Аллерген k43 — золото, IgE 380 до 8 суток
    21-615 Аллерген k44 — медь, IgE 380 до 8 суток
    21-616 Аллерген k45 — платина, IgE 380 до 8 суток
    21-617 Аллерген k46 — кобальт, IgE 380 до 8 суток
    21-618 Аллерген k48 — палладий, IgE 380 до 8 суток
    21-619 Аллерген b1 — акрил, IgE 380 до 8 суток
    21-620 Аллерген e1 — эпителий и перхоть кошки, IgE (ImmunoCAP) 450 до 4 суток
    21-621 Аллерген e5 — перхоть собаки, IgE (ImmunoCAP) 450 до 4 суток
    21-622 Аллерген f245 – яйцо, IgE (ImmunoCAP) 450 до 4 суток
    21-623 Аллерген f83 — мясо курицы, IgE (ImmunoCAP) 450 до 4 суток
    21-624 Аллерген f1 — яичный белок, IgE (ImmunoCAP) 450 до 4 суток
    21-625 Аллерген f75 — яичный желток, IgE (ImmunoCAP) 450 до 4 суток
    21-626 Аллерген e85 — перо курицы, IgE (ImmunoCAP) 450 до 4 суток
    21-627 Аллерген f2 — молоко, IgE (ImmunoCAP) 450 до 4 суток
    21-628 Аллерген f27 — говядина, IgE (ImmunoCAP) 450 до 4 суток
    21-629 Аллерген f231 — кипяченое молоко, IgE (ImmunoCAP) 450 до 4 суток
    21-630 Аллерген f78 — казеин, IgE (ImmunoCAP) 450 до 4 суток
    21-631 Аллерген d2 — клещ домашней пыли Dermatophagoides farinae, IgE (ImmunoCAP) 450 до 4 суток
    21-632 Аллерген h1 — домашняя пыль (Greer), IgE (ImmunoCAP) 450 до 4 суток
    21-633 Аллерген h2 — домашняя пыль (Hollister), IgE (ImmunoCAP) 450 до 4 суток
    21-634 Аллерген f7 — овес, овсяная мука, IgE (ImmunoCAP) 450 до 4 суток
    21-635 Аллерген f11 — гречиха, гречневая мука, IgE (ImmunoCAP) 450 до 4 суток
    21-636 Аллерген f79 — глютен (клейковина), IgE (ImmunoCAP) 450 до 4 суток
    21-637 Аллерген f5 — рожь, ржаная мука, IgE (ImmunoCAP) 450 до 4 суток
    21-638 Аллерген f9 — рис, IgE (ImmunoCAP) 450 до 4 суток
    21-639 Аллерген f3 — треска, IgE (ImmunoCAP) 450 до 4 суток
    21-640 Аллерген f41 — лосось, IgE (ImmunoCAP) 450 до 4 суток
    21-641 Аллерген f204 — форель, IgE (ImmunoCAP) 450 до 4 суток
    21-642 Аллерген f93 — какао, IgE (ImmunoCAP) 450 до 4 суток
    21-643 Аллерген f33 — апельсин, IgE (ImmunoCAP) 450 до 4 суток
    21-644 Аллерген f35 — картофель, IgE (ImmunoCAP) 450 до 4 суток
    21-645 Аллерген f31 — морковь, IgE (ImmunoCAP) 450 до 4 суток
    21-646 Аллерген f25 — томаты, IgE (ImmunoCAP) 450 до 4 суток
    21-647 Аллерген f49 — яблоко, IgE (ImmunoCAP) 450 до 4 суток
    21-648 Аллерген f92 — банан, IgE (ImmunoCAP) 450 до 4 суток
    21-649 Аллерген f259 — виноград, IgE (ImmunoCAP) 450 до 4 суток
    21-650 Аллерген f44 — клубника, IgE (ImmunoCAP) 450 до 4 суток
    21-651 Аллерген f208 — лимон, IgE (ImmunoCAP) 450 до 4 суток
    21-652 Аллерген f291 – цветная капуста, IgE (ImmunoCAP) 450 до 4 суток
    21-653 Аллерген f225 — тыква, IgE (ImmunoCAP) 450 до 4 суток
    21-654 Аллерген f26 — свинина, IgE (ImmunoCAP) 450 до 4 суток
    21-655 Аллерген f284 — мясо индейки, IgE (ImmunoCAP) 450 до 4 суток
    21-656 Аллерген t14 — тополь, IgE (ImmunoCAP) 450 до 4 суток
    21-657 Аллерген t3 — береза бородавчатая, IgE (ImmunoCAP) 450 до 4 суток
    21-658 Аллерген w8 — одуванчик, IgE (ImmunoCAP) 450 до 4 суток
    21-659 Аллерген w6 — полынь, IgE (ImmunoCAP) 450 до 4 суток
    21-660 Аллерген t2 — ольха серая, IgE (ImmunoCAP) 450 до 4 суток
    21-661 Аллерген g6 — тимофеевка луговая, IgE (ImmunoCAP) 450 до 4 суток
    21-662 Панель бытовых аллергенов hx2 (ImmunoCAP), IgE: домашняя пыль, клещ домашней пыли D. pteronyssinus, клещ домашней пыли D. farinae, таракан рыжий 800 до 4 суток
    21-663 Панель аллергенов плесени mx1 (ImmunoCAP), IgE: Penicillium chrysogenum, Cladosporium herbarum, Aspergillus fumigatus, Alternaria alternata 800 до 4 суток
    21-664 Панель аллергенов злаковых трав gx1 (ImmunoCAP), IgE: ежа сборная, овсяница луговая, плевел, тимофеевка луговая, мятлик луговой 800 до 4 суток
    21-666 Панель аллергенов животных ex2 (ImmunoCAP), IgE: перхоть кошки, перхоть собаки, эпителий морской свинки, крыса, мышь 800 до 4 суток
    21-667 Панель аллергенов сорных трав wx5 (ImmunoCAP), IgE: амброзия высокая, полынь, нивяник, одуванчик, золотарник 800 до 4 суток
    21-668 Панель пищевых аллергенов fx5 (ImmunoCAP), IgE: яичный белок, молоко, треска, пшеница, арахис, соя 800 до 4 суток
    21-669 Панель пищевых аллергенов fx73 (ImmunoCAP), IgE: свинина, говядина, курица 800 до 4 суток
    21-670 Панель аллергенов сорных трав wx3 (ImmunoCAP), IgE: полынь, подорожник ланцетовидный, марь, золотарник, крапива двудомная 800 до 4 суток
    21-671 Панель аллергенов трав wx209 (ImmunoCAP), IgE: амброзия высокая, амброзия голометельчатая, амброзия трехнадрезная 800 до 4 суток
    21-672 Панель пищевых аллергенов fx26 (ImmunoCAP), IgE: яичный белок, коровье молоко, арахис, горчица 800 до 4 суток
    21-673 Аллергочип ImmunoCAP 19 800 до 15 суток
    21-674 Аллерген f4 — пшеница, пшеничная мука, IgE (ImmunoCAP) 800 до 4 суток
    21-675 Фадиатоп (ImmunoCAP) 1 800 до 4 суток
    21-676 Фадиатоп детский (ImmunoCAP) 2 900 до 4 суток
    21-677 Аллерген f14 – соя, IgE (ImmunoCAP) 900 до 4 суток
    21-678 Аллерген d1 — клещ домашней пыли Dermatophagoides pteronyssinus, IgE (ImmunoCAP) 900 до 4 суток
    21-681 Аллергокомпонент t215 — береза rBet v1 PR-10, IgE (ImmunoCAP) 1 800 до 4 суток
    21-682 Аллергокомпонент f232 — овальбумин яйца nGal d2, IgE (ImmunoCAP) 1 800 до 4 суток
    21-683 Аллергокомпонент f233 — овомукоид яйца nGal d1, IgE (ImmunoCAP) 1 800 до 4 суток
    21-684 Аллергокомпонент k208 — лизоцим яйца nGal d4, IgE (ImmunoCAP) 900 до 4 суток
    21-685 Аллергокомпонент f323 — кональбумин яйца nGal d3, IgE (ImmunoCAP) 650 до 4 суток
    21-686 Аллергокомпонент f419 — персик rPru p1 PR-10, IgE (ImmunoCAP) 1 800 до 4 суток
    21-687 Аллергокомпонент f420 — персик rPru p3 LTP, IgE (ImmunoCAP) 1 800 до 4 суток
    21-688 Аллергокомпонент f421 — персик rPru p4 Профилин, IgE (ImmunoCAP) 1 800 до 4 суток
    21-689 Аллерген f45 — пекарские дрожжи, IgE (ImmunoCAP) 650 до 4 суток
    21-690 Аллерген t15 — ясень американский, IgE (ImmunoCAP) 650 до 4 суток
    21-691 Аллерген e70 — перо гуся, IgE (ImmunoCAP) 650 до 4 суток
    21-692 Аллерген e86 — перо утки, IgE (ImmunoCAP) 650 до 4 суток
    21-693 Аллерген e213 — перо попугая, IgE (ImmunoCAP) 650 до 4 суток
    21-694 Аллерген f84 — киви, IgE (ImmunoCAP) 650 до 4 суток
    21-695 Аллерген f24 — креветки, IgE (ImmunoCAP) 650 до 4 суток
    21-696 Аллерген f221 — зерна кофе, IgE (ImmunoCAP) 650 до 4 суток
    21-697 Аллерген f247 — мед, IgE (ImmunoCAP) 650 до 4 суток
    21-698 Аллерген m6 — Alternaria alternata, IgE (ImmunoCAP) 650 до 4 суток
    21-699 Аллерген m3 — Aspergillus fumigatus, IgE (ImmunoCAP) 650 до 4 суток
    21-700 Аллерген m2 — Cladosporium herbarum, IgE (ImmunoCAP) 650 до 4 суток
    21-701 Аллерген m227 — Malassezia spp., IgE (ImmunoCAP) 650 до 4 суток
    21-703 Аллергокомпонент g213 — тимофеевка луговая (recombinant) rPhl p1, rPhl p5b, IgE (ImmunoCAP) 1 600 до 4 суток
    21-704 Аллергокомпонент g214 — тимофеевка луговая (recombinant) rPhl p7, rPhl p12, IgE (ImmunoCAP) 1 600 до 4 суток
    21-705 Аллергокомпонент t221 — береза rBet v 2, rBet v 4 (рекомбинантный), IgE (ImmunoCAP) 1 600 до 4 суток
    21-706 Аллергокомпонент w230 — амброзия (recombinant) nAmb a 1, IgE (ImmunoCAP) 1 600 до 4 суток
    21-707 Аллергокомпонент d202 — клещ домашней пыли nDer p 1, IgE (ImmunoCAP) 1 600 до 4 суток
    21-708 Аллергокомпонент d203 — клещ домашней пыли rDer p 2, IgE (ImmunoCAP) 1 600 до 4 суток
    21-709 Аллергокомпонент d205 — тропомиозин, клещ домашней пыли rDer p 10, IgE (ImmunoCAP) 1 600 до 4 суток
    21-710 Аллергокомпонент f76 — альфа-лактальбумин nBos d 4, IgE (ImmunoCAP) 1 600 до 4 суток
    21-712 Аллергокомпонент e204 — бычий сывороточный альбумин nBos d6, IgE (ImmunoCAP) 1 600 до 4 суток
    21-713 Аллергокомпонент f77 — бета-лактоглобулин nBos d 5, IgE (ImmunoCAP) 1 600 до 4 суток
    21-714 Аллерген t4 — лещина обыкновенная, IgE (ImmunoCAP) 650 до 4 суток
    21-715 Аллерген t7 — дуб, IgE (ImmunoCAP) 650 до 4 суток
    21-716 Аллерген t12 — ива белая, IgE (ImmunoCAP) 650 до 4 суток
    21-717 Аллерген i6 — таракан-прусак, IgE (ImmunoCAP) 650 до 4 суток
    21-718 Аллерген g8 — мятлик луговой, IgE (ImmunoCAP) 650 до 4 суток
    21-719 Аллерген g5 — рожь многолетняя, IgE (ImmunoCAP) 650 до 4 суток
    21-720 Аллерген g4 — овсяница луговая, IgE (ImmunoCAP) 650 до 4 суток
    21-721 Аллерген g3 — ежа сборная, IgE (ImmunoCAP) 650 до 4 суток
    21-722 Аллерген g16 — лисохвост луговой, IgE (ImmunoCAP) 650 до 4 суток
    21-723 Аллерген g204 — райграс французский высокий, IgE (ImmunoCAP) 650 до 4 суток
    21-724 Аллерген g2 — свинорой пальчатый, IgE (ImmunoCAP) 650 до 4 суток
    21-725 Аллерген g11 — костер полевой, IgE (ImmunoCAP) 650 до 4 суток
    21-726 Аллерген g9 — полевица, IgE (ImmunoCAP) 650 до 4 суток
    21-727 Аллерген g1 — колосок душистый, IgE (ImmunoCAP) 650 до 4 суток
    21-728 Панель аллергенов животных ex73 (ImmunoCAP), IgE: перья птиц: гуся, курицы, утки, попугая 650 до 4 суток
    21-729 Аллерген е6 — эпителий морской свинки, IgE (ImmunoCAP) 650 до 4 суток
    21-730 Аллерген w1 — амброзия высокая, IgE (ImmunoCAP) 650 до 4 суток
    21-731 Аллерген w7 — нивяник (поповник), IgE (ImmunoCAP) 650 до 4 суток
    21-732 Аллерген w12 – золотарник IgE (ImmunoCAP) 650 до 4 суток
    21-733 Аллерген f13 — арахис, IgE (ImmunoCAP) 650 до 4 суток
    21-734 Аллерген w206 — ромашка, IgE (ImmunoCAP) 650 до 4 суток
    21-735 Аллерген t209 — граб обыкновенный, IgE (ImmunoCAP) 650 до 4 суток
    21-736 Аллерген t208 — липа, IgE (ImmunoCAP) 650 до 4 суток
    21-737 Аллерген f300 — козье молоко, IgE (ImmunoCAP) 650 до 4 суток

    г. Красногорск, Павшинская Пойма,
    ул. Павшинский бульвар, д.5

    9:00 — 21:00 Ежедневно

    Материалы размещенные на сайте носят информационный характер и не является публичной офертой, определяемой положениями Статьи 437(2) ГК РФ

    Аллерген 6p

    Представленное изобретение касается получения и использования рекомбинантных модификаций аллергенов труппы 6 Poaceae (мятликовых, истинные травы), которые характеризуются пониженной IgE реактивностью по сравнению с известными аллергенами немутантного типа и, в то же время, в значительной степени сохранили свою реактивность по отношению к T-лимфоцитам.

    Данные модификации гипоаллергенных аллергенов могут быть использованы для специфической иммунотерапии (гипосенсибилизация) у пациентов, имеющих аллергию на пыльцу растений, или для профилактического лечения аллергии на пыльцу растений.

    Предпочтительный вариант осуществления изобретения касается модификаций аллергена Phl p 6 тимофеевки луговой (Phleum pratense), в которой пролины в положениях 29, 30, 57, 79 мутировали по отдельности или в комбинациях.

    Уровень техники изобретения

    Аллергии типа 1 имеют всемирное значение. До 20% населения в промышленно развитых странах страдают от недугов, таких как аллергический ринит, конъюнктивит или бронхиальная астма.

    Данные аллергии вызывают источники различного происхождения, такие как деревья и травы (пыльца), грибы (споры), клещи (экскременты), коты или собаки. Источники аллергена распространяются напрямую по воздуху (пыльца, споры) или могут распространяться в воздухе, связанные с частицами дизельной сажи (пыльца) или домашней пылью (экскременты клещей, частицы кожи, волосы). В связи с тем, что вещества, запускающие аллергию, находятся в воздухе, также используют термин аэроаллергены.

    Вещества, запускающие аллергию типа 1, являются протеинами, гликопротеинами или полипептидами. После проникновения через мембраны слизистой оболочки данные аллергены реагируют с IgE молекулами, связанными с поверхностью тучных клеток у чувствительных лиц. Если данные IgE молекулы являются сшитыми друг с другом посредством аллергена, это в результате приводит к секреции медиаторов (например, гистамина, простагландинов) и цитокинов клеткой-эффектором и, таким образом, к появлению соответствующих аллергических симптомов.

    Вплоть до 40% страдающих от аллергии типа 1 демонстрируют специфическую IgE реактивность к экстрактам пыльцы мятликовых (Burney et al., 1997, J. Allergy Clin. Immunol. 99:314-322; D’Amato et al., 1998, Allergy 53:567-578; Freidhoff et al., 1986, J. Allergy Clin. Immunology, 78, 1190-2002). Семейство мятликовых (Poaceae) включает более чем 10000 видов, из которых намного больше чем 20 до настоящего времени известны как инициирующие факторы аллергических симптомов (Andersson & Lidholm, 2003, Int. Arch. Allergy Immunol. 130:87-107; Esch, 2008, Allergens and Allergen Immunotherapy, Clinical Allergy and Immunology Series, 107-126).

    Большинство из мятликовых, запускающих аллергию, относятся подсемейству Pooideae (мятликовидные). Кроме того, виды трав, встречающиеся как дикорастущие формы, такие как, например, Holcus lanatus (бухарник шерстистый), Phalaris aquatica (канареечник канарский), Anthoxanthum odoratum (душистый колосок), Dactylis glomerata (ежа сборная), Festuca pratensis (овсяница луговая), Poa pratensis (мятлик луговой) или Lolium perenne (райграс многолетний английский или пастбищный), культурные злаки, такие как Triticum aestivum (пшеница), Secale cereale (рожь) и Hordeum vulgare (ячмень), также являются известными представителями данного подсемейства.

    Один из видов Pooideae, который был исследован лучше в отношении своих аллергенов, является тимофеевкой луговой (Phleum pratense), которая широко распространена во всем мире как дикое растение и также играют коммерческую роль как пастбищное растение и большая кормовая трава.

    В зависимости от относительного процента встречаемости в популяции, с которой индивидуальные молекулы аллергена реагируют с IgE антителами страдающих от аллергии, различие делают между основными и второстепенными аллергенами.

    Шесть аллергенов тимофеевки луговой могут рассматриваться как основные аллергены: Phl p 1 (Petersen et al., 1993, J. Allergy Clin. Immunol. 92:789-796), Phl p 5 (Matthiesen und Löwenstein, 1991, Clin. Exp. Allergy 21:297-307; Petersen et al., 1992, Int. Arch. Allergy Immunol. 98:105-109), Phl p 6 (Petersen et al., 1995, Int. Arch. Allergy Immunol. 108, 49-54), Phl p 2/3 (Dolecek et al., 1993, FEBS 335(3):299-304), Phl p 4 (Haavik et al., 1985, Int. Arch. Allergy Appl. Immunol. 78:260-268; Valenta et al., 1992, Int. Arch. Allergy Immunol. 97:287-294; Nandy et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 2005, 337(2):563-70) и Phl p 13 (Suck et al., 2000, Clin. Exp. Allergy 30:1395-1402).

    Первое описание Phl p 6 было сделано еще в 1978. Протеиновая фракция, очищенная от пыльцы тимофеевки луговой, которую назвали «Ag19», содержавшая аллерген с размером около 15 кДа, которую позже классифицировали в официальной номенклатуре аллергенов и продолжают далее как Phl p 6 (Løwenstein, 1978, Allergy 33:30-41; WHO/IUIS Allergen Nomenclature Subcommittee, www.allergen.org). Phl p 6 классифицируют как основной аллерген в связи с тем, что Phl p 6 — реактивные IgE антитела могут быть обнаружены у около 70% страдающих от аллергии на пыльцу трав (Rossi et al., 2001, Allergy, 56:1180-85; Vrtala et al., 1999, J. Immunol. 15; 163:5489-9).

    Физико-химические исследования аллергена из экстракта пыльцы травы обнаружили две разновидности протеина, которые отличаются первичной последовательностью (Blume et al., 2004, Proteomics 4:1366-71). Данные изоформы приписывают двум ДНК последовательностям, идентифицированным в библиотеках экспрессии пыльцы тимофеевки луговой и носят WHO/IUIS названия Phl p 6.0101 (GenBank: Z27082.1; UniProt: P43215; смотри Фиг.15 и 16 или SEQ ID NO: 3 и SEQ ID NO: 4, с пропептидом, смотри Фиг.19 или SEQ ID NO: 9; Petersen et al., 1995, Int. Arch. Allergy Immunol. 108:55-59) и Phl p 6.0102 (GenBank: Y16955; UniProt: O65868; смотри Фиг.3 и 4 или SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 2, с пропептидом, смотри Фиг.20 или SEQ ID NO: 10; Vrtala et al., 1999, J. Immunol. 15; 163:5489-9). За исключением сигнального пептида каждый из протеинов состоит из 110 аминокислот и отличаются только двумя положениями (Val 14 → Ile и Arg 95 → His, начиная со зрелых Phl p 6.0101), которые вызывают различия в молекулярной массе в 5 Да (11790 Да для Phl p 6.0101 по сравнению с 11785 Да для Phl p 6.0102; Фиг.1).

    Пыльца других видов истинной травы семейства Poaceae и, в частности, подсемейства Pooideae может содержать основные аллергены, которые являются гомологичными к аллергенам тимофеевки луговой. Такие аллергены, которые встречаются во всех видах, обобщают как группу аллергенов. Высокая структурная гомология таких родственных аллергенов, которая, прежде всего, основана на подобии аминокислотной последовательности, вызывает соответственно высокую перекрестную реактивность молекул с IgE антителами (Lorenz et al., 2009, Int. Arch. Immunol. 148:1-17). Кроме того, известно, что атопические особы, которые аллергически реагируют на основные аллергены тимофеевки луговой, могут первично быть сенсибилизированными одним из других родственных видов истинных трав. В конечном счете, данная перекрестная реактивность может означать, что сенсибилизация одним видом трав является достаточной для запуска аллергической реакции на другие родственные травы.

    Аллерген группы 6, который является перекрестно реактивным с Phl p 6, уже обнаружен на протеиновом уровне в пыльце мятлика лугового (Poa pratensis) (Vrtala et al., 1999, J. Immunol. 15; 163:5489-9; Niederberger et al., 1998, J. Allergy din. Immunol. 101(2):258-264).

    Помимо перекрестной реактивности аллергенов группы 6 друг с другом также известна перекрестная реактивность с основными аллергенами из группы 5. Полипептидная цепь Phl p 6 демонстрирует значительную схожесть с N-терминальной областью Phl p 5, которая имеет размер около 26-28 кДа (Фиг.1, Фиг.2). Считается, что аллергены могут быть отнесены к общему исходному гену (Petersen et al., 1995, Int. Arch. Allergy Immunol. 108:55-59). Оба протеина образуют α-спиральные вторичные структуры, а не β-складчатые листовые структуры. Рентгеноструктурный анализ показал, что четыре α-спирали Phl p 6 складываются, чтобы образовать характерный пучок спиралей (RCSB Protein Data Bank (Банк данных протеинов) запись: 1NLX; Fedorov et al., 2003; Фиг.1), структура которого также обнаружена в фрагментах Phl p 5 (Rajashankar et al., 2002, Acta Cryst. D58:1175-1181; Maglio et al., 2002, Protein Engineering 15:635-642; Wald et al., 2007, Clin. Exp. Allergy 37:441-450). Подобность между аллергенами имеет такое действие, что некоторые из Phl p 5 — реактивных IgE антител также связываются с Phl p 6 (Petersen et al., 1995, Int. Arch. Allergy Immunol. 108:49-54; Andersson & Lidholm, 2003, Int. Arch. Allergy Immunol. 130:87-107).

    Специфическую иммунотерапию (СИТ) или гипосенсибилизацию рассматривают как эффективный подход к терапевтическому лечению аллергий (Fiebig 1995 Allergo J. 4(6):336-339, Bousquet et al., 1998, J. Allergy Clin. Immunol. 102(4):558-562; Cox et al., 2007, J. Allergy Clin. Immunol. 120:825-85; James & Durham, 2008, Clin. Exp. Allergy 38:1074-1088).

    Классическая форма лечения инъекционной терапии (СКИТ), в которой экстракты природных аллергенов вводят пациенту подкожно в возрастающих дозах, успешно использовалась в течение около 100 лет. В данном лечении иммунная система страдающего от аллергии неоднократно сталкиваются с аллергенами, вызывая перепрограммирование иммунной системы для того, чтобы наряду с этим была достигнута толерантность к аллергенам. После поглощения антигенов из препаратов аллергена антиген-представляющими клетками пептиды присутствуют с антигенами на поверхности клетки. Некоторые специфические пептиды, которые содержат так называемые эпитопы T-клеток признаны антиген-специфическими T-клетками. Данное связывание в результате приводит, среди прочего, к развитию различных типов T-клеток, которые имеют регуляторную функцию. В случае СИТ ответ регуляторной T-клетки в результате приводит к толерантности аллергена, понижающей регуляции TH2 цитокинов, восстановлению TH1/TH2 равновесия, подавлению аллерген-специфического IgE, индукции IgG4, IgG1 и IgA антител, подавлению клеток-эффекторов (тучных клеток, базофилов и эозинофилов) и возобновлению воспаленной ткани (Akdis et al., 2007, J. Allergy Clin. Immunol. 119(4):780-789; Larchè et al., 2008, Nature Reviews 6:761-771). Эпитопы T-клеток, таким образом, имеют решающее значение для терапевтического действия препаратов аллергенов в случае гипосенсибилизации.

    Благодаря перекрестной реактивности основных аллергенов истинных трав, которые присутствуют на IgE, а также на T-клеточном уровне, успешное лечение экстрактом аллергена из представителя одного вида травы обычно является достаточным (Mailing et al., 1993, EAACI Position Paper: Immunotherapy, Allergy 48:9-35; Cox et al., 2007, J Allergy Clin Immunol 120:25-85).

    Кроме подкожной иммунотерапии, сублингвальная форма лечения, в которой аллергены или производные аллергенов доставляются через мембрану слизистой оболочки ротовой полости, подвергается клиническим испытаниям и используется как альтернатива инъекционной терапии (James & Durham, 2008, Clin. Exp. Allergy 38:1074-1088).

    Следующая возможность — это лечение подвергающейся экспрессии ДНК, которая кодирует соответствующие аллергены (иммунотерапевтическая вакцинация). Экспериментальное доказательство аллерген-специфического влияния иммунного ответа обеспечивается у грызунов путем инъекции аллерген-кодирующей ДНК (Hsu et al. 1996, Nature Medicine 2(5):540-544, Weiss et al., 2006, Int. Arch. Allergy Immunol. 139:332-345).

    Во всех данных формах терапии существует принципиальный риск аллергических реакций или даже анафилактического шока (Kleine-Tebbe, 2006, Allergologie, 4:135-156). С целью минимизировать данные риски, применяют инновационные препараты в форме аллергоидов. Существуют химически модифицированные экстракты аллергенов, которые имеют значительно сниженную реактивность IgE, но идентичную реактивность T-клеток по сравнению с необработанным экстрактом (Fiebig 1995 Allergo J. 4(6):336-339, Kahlert et al., 1999, Int. Arch. Allergy Immunol, 120:146-157).

    Оптимизация лечения является возможной за счет аллергенов, полученных рекомбинантными способами. Определенные коктейли высоко очищенных аллергенов, полученных рекомбинантными способами, которые необязательно приводят в соответствие к индивидуальным характерам сенсибилизации пациентов, могли заменять экстракты из природных источников аллергенов, так как, помимо различных аллергенов, последние содержат относительно большое количество иммуногенных, но не вызывающих аллергию, сопутствующих протеинов. Уже с успехом провели начальные клинические исследования с рекомбинантными аллергенами (Jutel et al., 2005, J. Allergy Clin. Immunol., 116:608-613; Valenta & Niederberger, 2007, J. Allergy Clin. Immunol. 119:826-830).

    Реальные перспективы, которые могут в результате привести к безопасной гипосенсибилизации с рекомбинантными продуктами экспрессии, представляются определенно посредством мутированных рекомбинантных аллергенов, в которых IgE эпитопы модифицированы без ослабления эпитопов T-клетки, которые являются неотъемлемой частью лечения (Schramm et al. 1999, J. Immunol. 162:2406-2414). Данные гипоаллергенные протеины могли бы быть использованы в относительно высоких дозах в течение СИТ без возрастания вероятности нежелательных IgE-стимулированных побочных действий.

    Ранее такие «гипоаллергенные» модификации с пониженным IgE связыванием были опубликованы для многих аэроаллергенов (в том числе пыльцы и аллергенов домашнего пылевого клеща) и пищевых аллергенов. На основе ДНК немодифицированных аллергенов является возможным получить и экспрессировать рекомбинантную ДНК, в том числе путем фрагментации, олигомеризации, делеций, точечных мутаций или рекомбинации индивидуальных сечений аллергена (перестановка в ДНК) (Ferreira et al., 2006, Inflamm. & Allergy — Drug Targets 5:5-14; Bhalla & Singh, 2008, Trends in Biotechnology 26:153-161; Westritschnig et al., 2007, J. Immunol. 179: 7624-7634).

    Рассматривая аллергены группы 6 трав, только одна мутационная стратегия является опубликованной на сегодняшний день, в которой первые девяносто нуклеотидов, кодирующих аминокислоты 1-30 зрелых Phl p 6, были удалены. Молекулу экспрессировали, как гистидин слитую молекулу, очищали и исследовали с учетом ее иммунологических свойств. N-терминальная делеция в результате привела к понижению IgE связывания и снижению способности быть стимулированными базофильными гранулоцитами (Vrtala et al., 2007, J. Immunol. 179:1730-1739). В более поздней статье такая же молекула была присоединена к рекомбинантной модификации Phl p 2, для того чтобы получить гибридную молекулу (Linhart et al., 2008, Biol. Chem. 389:925-933). Мутационная стратегия, основанная на точечных мутациях, как описано для других аллергенов, до настоящего времени еще не была опубликована для аллергенов группы 6 пыльцы травы.

    Объект, на котором основано представленное изобретение, заключался в получении новых модификаций аллергенов группы 6 Poaceae на уровне протеина и ДНК, которые характеризуются пониженной IgE реактивностью, в то же время при значительном сохранении реактивности T-клетки и, поэтому, приемлемы для лечебной и профилактической специфической иммунотерапии и иммунотерапевтической ДНК вакцинации.

    Краткое описание фигур

    Фиг.1. Первичная структура зрелой формы Phl p 6 изоформы, использованной в данном документе. Phl p 6.0102 (IUIS последовательность, UniprotKB 065868, длина 110 аминокислот) со второй известной Phl p 6 изоформой, Phl p 6.0101 (IUIS последовательность, UniprotKB P43215, длина 110 аминокислот) и N-терминальные части — области четырех Phl p 5 изоформ: Phl p 5.0101 (IUIS последовательность, UniprotKB Q40960), Phl p 5.0104 (IUIS последовательность, UniprotKB P93467), Phl p 5.0109 (IUIS последовательность, UniprotKB Q84UI2, 284 аминокислоты) и Phl p 5.0201 (IUIS последовательность, UniprotKB Q40963, общая длина 265 аминокислоты и). Информация о положении аминокислоты слева указывает положение аминокислоты в преобразованном протеине. Положение семи пролиновых остатков, представленных в Phl p 6, по отдельности указывает последовательности выше. Блоки показывают положение α-спиралей Phl p 6 на основе данных рентгено-структурного анализа рекомбинантного Phl p 6 (PDB запись 1NLX; Fedorov et al., 2003). Области, имеющие последовательность идентичную выделены серым.

    Фиг.2. Упрощенная модель Phl p 6. Четыре α-спирали (H1-H4) образуют 4-спиральный пучок. Пролиновые остатки 29, 30, 57 и 79 расположены в петлях, связывающих спирали. Пролин 101 расположен позади завершающей спирали. а) Поверхностная модель. Пролиновые остатки 29, 30, 57, 79 и 101 выставлены на поверхности. Пролиновые остатки в каждом случае окрашены черным цветом и обеспечивается обозначением положения. Обе модели сделаны на основе данных рентгеноструктурного анализа рекомбинантного Phl p 6 (PDB запись: 1NLX; Fedorov et al., 2003).

    Фиг.7. 12% SDS-PAGE после окрашивания Кумасси. Наполнение:

    1 мкг протеина на след, невосстановленный.

    Образцы: 1 = rPhl p 6 wt + 6His; 2 = d[P29, 30] + 6His; 3 = d[P57] + 6His; 4 = d[P79] + 6His; 5 = d[P101] + 6His. M: размер маркера.

    Фиг.8. Хроматограмма аналитического SEC определения молекулярной массы, происходящего в реальном времени.

    На фигуре изображен относительный УФ сигнал на 280 нм (правая часть оси Y) и молекулярная масса (левая часть оси Y; измерение указано линией в области пика), график от времени элюирования (ось X). Происходящее в реальном времени определение концентрации протеина выполняли, используя OptilabrEX (Wyatt, Santa Barbara, USA) рефрактометрический детектор. Рассеяние света частицами определяли, используя MiniDAWN Treos многоугловой детектор (Wyatt). Массу частиц рассчитывали, используя ASTRA 5.3.2.17 программное обеспечение (Wyatt) посредством совокупности формул Дебая с предположительно увеличенным показателем преломления 0,180 мл/г. Колонка: Superdex 200 GL 10/300 (GE Healthcare, Uppsala, Sweden). Размер выделения на 20,45 мин (стрелочка). Элюент: 20 mM Tris, pH 8,0 с 150 mM NaCl.

    Образцы: 1 = rPhl p 6 wt + 6His; 2 = d[P29, 30] + 6His; 3 = d[P57] + 6His; 4 = d[P79] + 6His; 5 = d[P101] + 6His.

    Фиг.9. Иммуноблот исследуемых веществ после инкубации с сыворотками клинически определенных страдающих от аллергии на пыльцу травы (3-150) rPhl p 6 wt: рекомбинантный Phl p 6 с (+6His) и без гистидинового слитого компонента.

    HSA: альбумин сыворотки человека (отрицательный контроль).

    Общий: контроль за равномерным наполнением протеина в тест-полосках. Общее протеиновое окрашивание с реагентом «DB71» (Sigma-Aldrich, Taufkirchen).

    Фиг.10. В каждом случае данные от одного конкретного эксперимента с сывороткой клинически определенных страдающих от аллергии на пыльцу травы (P). Обозначения представляют собой среднее значение от двух измерений 10 концентраций каждого ингибитора. Горизонтальные линии погрешности показывают соответствующие конкретные значения двух определений. Твердая фаза: rPhl p 6 wt + 6His.

    Фиг.11. Доказательство пониженной функциональной аллергенности посредством анализа активирования базофилов с цельной крови клинически определенного страдающего от аллергии на пыльцу травы (P21). Горизонтальная линия: уровень стимулирования путем отрицательного контроля.

    Фиг.12. 12% SDS-PAGE после окрашивания Кумасси. Наполнение:

    1 мкг протеина на след, невосстановленный.

    Образцы: 1 = d[29, 30, 57] + 6His; 2 = d[P29, 30, 79] + 6His; 3 = d[P29, 30] P57L + 6His; 4 = d[P29, 30] P79L + 6His; 5=d[P29, 30] P57L, P79L] + 6His.

    М: размер маркера.

    Фиг.13. Хроматограмма аналитического SEC с определением молекулярной массы, происходящим в реальном времени.

    На фигуре изображен относительный УФ сигнал на 280 нм (правая часть оси Y) и молекулярная масса (левая часть оси Y; измерение указано линией в области пика), график от времени элюирования (ось X). Происходящее в реальном времени определение концентрации протеина выполняли, используя OptilabrEX (Wyatt, Santa Barbara, USA) рефрактометрический детектор. Рассеяние света частицами определяли, используя MiniDAWN Treos многоугловой детектор (Wyatt). Массу частиц рассчитывали, используя ASTRA 5.3.2.17 программное обеспечение (Wyatt) посредством совокупности формул Дебая с предположительно увеличенным показателем преломления 0,180 мл/г.

    Колонка: Superdex 200 GL 10/300 (GE Healthcare, Uppsala, Sweden). Размер выделения на 20,45 мин (стрелочка). Элюент: 20 мМ Tris, pH 8,0 з 150 мМ NaCl.

    Образцы: 1 = d[29, 30, 57] + 6His; 2 = d[P29, 30, 79] + 6His; 3 = d[P29, 30] P57L + 6His; 4 = d[P29, 30] P79L + 6His; 5 = d[P29, 30] P57L, P79L] + 6His.

    Фиг.14. Иммуноблот исследуемых веществ после инкубации с сыворотками клинически определенных страдающих от аллергии на пыльцу травы (3-150)

    Общий: контроль за равномерным наполнением протеина в тест-полосках. Общее протеиновое окрашивание с реагентом «DB71» (Sigma-Aldrich, Taufkirchen).

    Неожиданно было обнаружено, что модификации аллергенов группы 6 семейства мятликовых (Poaceae), в которых пролины, которые соответствуют в первичной структуре пролинам в положениях 29, 30, 57, 79 в аминокислотной последовательности немутантного типа Phl p 6, мутировали по отдельности или в комбинации, понизили IgE реактивность по сравнению с аллергенами немутантного типа и, в то же время, существенно сохранили реактивность в отношении T-лимфоцитов и, таким образом, является гипоаллергенным.

    Изобретение, соответственно, касается гипоаллергенных модификаций аллергенов группы 6 семейства мятликовых (Poaceae), в которых пролины, которые соответствуют в первичной структуре пролинам в положениях 29, 30, 57, 79 в аминокислотной последовательности немутантного типа Phl p 6, мутировали по отдельности или в комбинации.

    Особое предпочтение отдается модификациям аллергенов в соответствии с изобретением, которые отличаются тем, что пролины удалены или замещены.

    Предпочтение отдают гипоалергенным модификациям, в соответствии с изобретением, аллергенов группы 6 подсемейства Pooideae, предпочтительно из группы Poodae и Triticodae, предпочтительно представленными Phleum pratense, Holcus lanatus, Phalaris aquatica, Anthoxanthum odoratum, Dactyl is glomerata, Lolium perenne, Poa pratensis, Festuca pratensis, Hordeum vulgare, Secale cereale и Triticum aestivum. Они являются предпочтительно гипоаллергенными модификациями в соответствии с изобретением Tri a 6, Sec c 6 и Hor v 6 с Triticum aestivum, Secale cereale и Hordeum vulgare. Особенное предпочтение отдают гипоаллергенным модификациям в соответствии с изобретением аллергенов группы 6 Poodae. Данные аллергены группы 6 являются, предпочтительно Phl p 6, Poa p 6, Hol p 6, Lol p 6 и Pha a 6 из Phleum pratense, Lolium perenne, Poa pratensis, Holcus lanatus и Phalaris aquatica и, особенно предпочтительно, Poa p 6 и Phl p 6, а именно Phl p 6. Все встречающиеся в природе изомеры, полиморфы и модификации аллергенов, упомянутых выше, и их белки-предшественники также находятся в соответствии с изобретением.

    В гипоаллергенных модификациях в соответствии с изобретением мутированные пролины являются предпочтительнее чем те, которые соответствуют в первичной структуре пролинам в положениях 29, 30, 57, 79 в аминокислотной последовательности зрелого Phl p 6.0101 или его модификаций (SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8) или зрелый Phl p 6.0102 (SEQ ID NO: 2), особенно предпочтительно зрелый Phl p 6.0102.

    Несмотря на то, что известно, что пролины могут оказывать влияние на структуру протеина, специфические точечные мутации остатков пролинов, как начальная точка для генерации гипоаллергенных мутантов аллергенов, были исследованы всего лишь для основного аллергена группы 2 клеща домашней пыли Dermatophaogides farinae (Der f2, замещение пролиновых остатков на аланин) (Takai et al., 2000, Eur. J. Biochem. 267: 6650-6656). Однако способность IgE связывания и способность стимулировать базофильные клетки была только незначительно снижена в случае трех точковых мутаций, в то время как другие три вели себя как немодифицированный аллерген. Мутации пролина в случае Der f 2, таким образом, показали только очень слабое снижение аллергенности или отсутствовало вовсе. Дальнейшие стратегии для получения гипоаллергенных мутантов путем обменных мутаций пролина еще не опубликованы. Таким образом, квалифицированному специалисту в данной области было бы неожиданным, что мутации пролина являются успешными в качестве исходной точки для создания гипоаллергенных мутаций аллергенов.

    Кроме того, до сих пор не исследовано для какого-либо аллергена, как специфическая делеция пролиновых остатков влияет на всеобъемлющую способность IgE связывания продукта экспрессии и какие последствия возникают при активации клеток-эффекторов, относящихся к аллергии.

    Аминокислотные последовательности Phl p 6 или двух изоформов (Phl p 6.0101, GenBank: Z27082.1, UniProt: P43215; Phl p 6.0102, GenBank: Y16955, UniProt: 065868) содержат 7 пролиновых остатков (Фиг.1). Пролины в положениях 29, 30, 57, 79 и 101 в аминокислотах расположены непосредственно в начале и в конце α-спиралей или вовлечены в образование протеиновой поверхности (Фиг.2). Пролиновый остаток в положении 61 является частью третей спирали, в то время как пролин 108 расположен вблизи C-терминальной области.

    Исходя из аминокислотных последовательностей Phl p 6 изоформ Phl p 6.0101 (SEQ ID NO: 4) и Phl p 6.0102 (SEQ ID NO 2) получены рекомбинантный немодифицированный аллерген немутантного типа (rPhl p 6 wt; Фиг.4) и модификации в соответствии с изобретением, модифицированные путем генной инженерии. Аналогично способу получения, описанному ниже, кроме того, могут быть получены протеины немутантного типа и, в соответствии с изобретением, гипоаллергенные модификации аллергенов группы 6 в соответствии с изобретением мятликовых, например Poa p 6. В связи с этим, пролины, которые соответствуют в первичной структуре пролинам в положениях 29, 30, 57, 79 в аминокислотной последовательности немутантного типа Phl p 6 мутировали по отдельности или в комбинации, преимущественно путем замещения или делеции.

    Модификации аллергена в соответствии с изобретением могли бы быть получены исходя из клонированной последовательности ДНК с помощью методов генной инженерии. Процессы получения в соответствии с изобретением известны квалифицированному специалисту в данной области из соответствующих лабораторных методик и публикаций, таких как, например: E.F. Fritsch, J. Sambrook, T. Maniatis, Molecular Cloning, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989.

    В дополнение к описанным модификациям аллергенов группы 6 дальнейшее модифицирование в других положениях — например, с целью повышения гипоаллергенности — естественно, также является возможным. Данные модифицирования могут быть, например, введениями, удалениями, замещениями аминокислоты и расщеплениями протеина на фрагменты, а также слияниями протеина или его фрагментов с другими протеинами или пептидами, а также мультимерами посредством слияния одинаковых протеинов или фрагментов.

    Фрагменты, в соответствии с изобретением, преимущественно содержат 20-109 аминокислот, преимущественно 30-100 аминокислот, особенно преимущественно 40-90 аминокислот. Модификации, в соответствии с изобретением, дополнительно включают протеины-предшественники, такие как, например, ProPhl p 6, с вышестоящей природной или искусственной сигнальной последовательностью, как изображено, например, на фигурах 18, 19 и 20 (SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10). Кроме того, в соответствии с изобретением находятся слитые протеины, содержащие N- или C-терминальные слитые метки (например, His метка, как на Фиг.5 и 6, МВР метка, последовательности, контролирующие экспрессии и др.), гибридные молекулы, такие как, например, слитые с другими аллергенами или их гипоаллергенными модификациями, или слияние фрагментов в какой-либо желаемой последовательности. Кроме того, модификации, в соответствии с изобретением, также включают гомологические последовательности (полиморфы (SNPs), изоморфы), содержащие идентичную аминокислотную последовательность из, по меньшей мере, 80% с соответствующей аллергену немутантного типа группы 6, предпочтительно из, по меньшей мере, 90% с соответствующей аллергену немутантного типа группы 6, особенно предпочтительно из, по меньшей мере, 95% с соответствующей аллергену немутантного типа группы 6. В данных модификациях одна или несколько аминокислот предпочтительно традиционно замещены, например полярная аминокислота замещена другой полярной аминокислотой или нейтральной аминокислотой, однако модификации вследствие нетрадиционного замещения также находятся в соответствии с изобретением. Мультимеры преимущественно включают димеры и тримеры гипоаллергенных модификаций в соответствии с изобретением, связанных линкерной последовательностью или полученных непосредственным слиянием.

    Примерами таких модификаций являются модификации Phl p 6.0101, как показано на фигурах 17 и 18 (SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8), в которых индивидуальные аминокислоты, которые не имеют отношения к действию в соответствии с изобретением, были заменены, или не хватает трех аминокислот на N-конце, или их последовательности-предшественники, содержащие сигнальные пептиды на N-конце, и т.п. Следующими примерами модификаций в соответствии с изобретением являются полиморфные модификации, такие как, например, два изомера Phl p 6.0101 и их Phl p 6.0102, и дополнительные модификации с замещением одной или более аминокислот, исключением одной или более аминокислоты на N- и/или C-конце или с соответствующей делецией гэпов с аминокислотной последовательности. Более того, в соответствии с изобретением находятся модификации с введением одной или нескольких аминокислот в отдельности в различные положения аминокислотной последовательности или на N- и/или C-конце.

    Таким образом, изобретение также касается гипоаллергенных модификаций аллергенов группы 6 мятликовых (Poaceae), отличающийся тем, что он является фрагментом или модификацией гипоаллергенной модификации в соответствии с изобретением, или мультимером одной или более гипоаллергенных модификаций в соответствии с изобретением, или отличающийся тем, что одна или более гипоаллергенных модификаций в соответствии с изобретением или их фрагменты, модификации или мультимеры являются составной частью рекомбинантного слитого протеина.

    К тому же, изобретение касается молекулы ДНК, которая кодирует гипоаллергенную модификацию в соответствии с изобретением.

    Более того, изобретение касается рекомбинантного вектора экспрессии, который в соответствии с изобретением содержит молекулу ДНК данного типа, функционально связанную с последовательностью, контролирующей экспрессию. Под последовательностью, контролирующей экспрессию, подразумевают, например, промотор или часть последовательности, с помощью которой оказывают влияние на экспрессию протеина-мишени, и который функционально связанный с геном-мишенью, но необязательно должен быть расположен в непосредственной близости от гена-мишени.

    Кроме того, изобретение касается организма-хозяина, который не является человеком, трансформированного с помощью молекулы ДНК в соответствии с изобретением или вектора экспрессии в соответствии с изобретением.

    Изобретение касается процесса получения гипоаллергенной модификации в соответствии с изобретением путем культивирования организма-хозяина, который не является человеком, в соответствии с изобретением и выделением соответствующей модификации аллергена из культуры.

    Приемлемыми организмами-хозяинами, которые не являются человеком, могут быть про- или эукариотические, одно- или многоклеточные организмы, такие как бактерии или дрожжи. Организм-хозяин, которому отдается предпочтение в соответствии с изобретением, является Е. coli.

    Влияние делеции одного или двух близко расположенных пролинов на способность IgE связывания Phl p 6 может быть исследовано путем делеции пролинов 29+30 из пролина 57, из пролина 79 и из пролина 101. В протеине немутантного типа Phl p 6, данные пролины расположены в областях петли в начале или конце α-спиралей (Фиг.1; Фиг.2). Пролин 61 и пролин 108 преимущественно являются не модифицированными, так как соответствующие модификации демонстрируют незначительную эффективность. Влияние мутаций пролина в соответствующих гомологичных положениях других аллергенов группы 6 мятликовых в соответствии с изобретением, например Poa p 6, на способность IgE связывания может быть исследовано аналогичным образом.

    Для более быстрой очистки с высоким выходом кодирующая ДНК данных исследований обеспечивается последовательностью, кодирующей N-терминальный слитый компонент гексагистидина (+6His) (Фиг.5, SEQ ID NO: 5; Фиг.6, SEQ ID NO: 6). Модификации, свободные от меток, в соответствии с изобретением и протеины немутантного типа, которые могут быть использованы для фармацевтических целей, также очищают стандартными способами и подтверждает результаты протеинов His-метки.

    Соответствующим образом получают последовательности, кодирующие протеины, например rPhl p 6 d[P29, 30] + 6His, rPhl p 6 d[P57] + 6His, rPhl p 6 d[P79] + 6His и rPhl p 6 d[P101] + 6His. Последовательности могут быть экспрессированными во всех известных эукариотических и прокариотических экспрессионных системах, преимущественно в Е. coli. В дальнейшем протеины очищают как растворимые мономеры стандартными способами. Окончательно, чистоту могут контролировать путем анализа в денатурирующем полиакриламидном геле (SDS-PAGE) (Фиг.7).

    Аналитическая гель-фильтрация (SEC) в сочетании с рефрактометром (RI детектор) и детектором многоуглового рассеяния света (MALS детектор) позволяет в реальном времени проводить определение молекулярной массы элюированных протеинов (SEC/MALS/RI метод).

    Таким образом, анализ rPhl p 6 d[P29, 30] + 6His, rPhl p 6 d[P57] + 6His, rPhl p 6 d[P79] + 6His и rPhl p 6 d[P101] + 6His с помощью SEC/MALS/RI показывает, что эти модификации в соответствии с изобретением находятся в форме чистых мономеров в растворе (Фиг.8, Таблица 1).

    Способность IgE связывания рекомбинантных модификаций в соответствии с изобретением может быть определена способом, в котором протеины иммобилизируют на нитроцеллюлозной мембране и контактируют с IgE антителами отдельных сывороток клинически определенных страдающих от аллергии на пыльцу трав (тест-полоски). Модификации аллергена/комплексы антитела впоследствии окрашивают путем ферментативной реакции (Фиг.9).

    В данном способе мутантный rPhl p 6 d[P101] + 6His демонстрирует такое же хорошее IgE связывание, как и немодифицированный аллерген со всеми тестированными сыворотками (Фиг.9). Из этого следует, что делеция пролина 101 имеет незначительное влияние на способность IgE связывания Phl p 6. Данное IgE связывание мутантных rPhl p 6 d[P29, 30] + 6His, rPhl p 6 d[P57] + 6His и rPhl p 6 d[P79] + 6His является разным в сыворотках страдающих от аллергии на различную пыльцу травы. Это связано с изменениями в составе IgE популяции конкретных страдающих от аллергии по отношению к аффинности и специфической антигенной детерминации IgE антител. Мутантные rPhl p 6 d[P57] + 6His и rPhl p 6 d[P79] + 6His демонстрируют значительно пониженную IgE реактивность с большинством сывороток по сравнению с немодифицированным rPhl p 6 wt + 6His. Однако наименьшее IgE связывание наблюдается во всех отношениях в случае мутантных rPhl p 6 d[P29, 30] + 6His (Фиг.9).

    Рекомбинантные модификации в соответствии с изобретением могут, кроме того, быть исследованы относительно их способности к связыванию с IgE антителами человека путем исследований IgE ингибирования (EAST). В данном способе взаимодействие аллерген/IgE может быть исследовано в растворе, что позволяет маскировать вмешательство эпитопов исследуемой субстанции, например, благодаря иммобилизации на мембране, чтобы ее исключить.

    В представленном примере выбирают две сыворотки страдающих от аллергии на пыльцу травы, которые значительно отличались в способе тест-полоски посредством их IgE связывания с мутантными rPhl p 6 d[P29, 30] + 6His. Сыворотка Р32 представляет собой группу сывороток, которые демонстрируют постоянно обнаруживаемое IgE связывание с rPhl p 6 d[P29, 30] + 6His по тест-полоскам (группа «A»), в то время как сыворотку Р82 выбирают как представитель группы сывороток (группа «B»), которая имеет не большую обнаруживаемую реактивность (Фиг.9, Фиг.14).

    Используя данный способ исследования, может быть подтверждена пониженная способность IgE связывания мутантных rPhl p 6 d[P29, 30] + 6His, rPhl p 6 d[P57] + 6His и rPhl p 6 d[P79] + 6His по сравнению с немодифицированным rPhl p 6 wt + 6His, в соответствии с результатами по тест-полоскам (Фиг.10).

    Результаты способа тест-полоски, таким образом, не являются обусловленными частичным маскированием IgE эпитопов, а, наоборот, точно отражают пониженную способность IgE связывания растворенных протеинов.

    Мутантный rPhl p 6 d[P101] + 6His демонстрирует способность IgE связывания, которая соответствует той, что у аллергена немутантного типа при использовании сыворотки P32 во всем диапазоне концентраций (Фиг.10). При использовании сыворотки P82 наблюдается меньшее IgE связывание только при низких концентрациях протеина, в то время как при высоких концентрациях IgE связывание, в свою очередь, соответствует тому, что у аллергена немутантного типа (Фиг.10).

    Таким образом, пониженная способность IgE связывания Phl p 6, в принципе, также является возможной за счет делеции пролинового остатка 101, но данный эффект, по всей видимости, настолько мал, что не может быть обнаружен способом тест-полоски при всех концентрациях, а при низких концентрациях — только путем исследования IgE ингибирования (Фиг.9, Фиг.10).

    Пониженная способность IgE связывания мутантных rPhl p 6 d[P29, 30] + 6His, rPhl p 6 d[P57] + 6His и rPhl p 6 d[P79] + 6His, напротив, легко обнаруживается способом тест-полоски с большинством сывороток страдающих от аллергии и обеспечивается во всем изучаемом диапазоне концентраций в исследованиях IgE ингибирования (Фиг.9, Фиг.10).

    В основном это доказывает, что делеция пролиновых остатков из аллергенов группы 6 может понижать способность IgE связывания. С другой стороны, только делеция определенных пролинов в результате приводит к существенно пониженному IgE связыванию.

    С помощью исследования с базофильными гранулоцитами клинически страдающего от аллергии на пыльцу определенных трав влияние пониженной способности IgE связывания модификаций в соответствии с изобретением на активацию клеток-эффекторов человека может быть исследовано in vitro.

    Гранулоциты, используемые в исследовании, выделяют из цельной крови страдающего от аллергии, в представленном примере страдающий от аллергии P21. Данный страдающий от аллергии представляет тех страдающих от аллергии, чьи IgE антитела демонстрируют обнаруживаемое связывание с rPhl p 6 d[P29, 30] + 6His в способе тест-полоски (группа «A»; Фиг.9, 14).

    При такой же концентрации рекомбинантного аллергена немутантного типа и модификаций rPhl p 6 d[P29, 30] + 6His, rPhl p 6 d[P57] + 6His и Phl p 6 d[P79] + 6His rPhl p 6 d[P29, 30] + 6His в соответствии с изобретением модификации в соответствии с изобретением демонстрируют меньшее связывание мембрана-связь IgE антитела и в результате существенно пониженную активацию базофильных гранулоцитов (Фиг.11).

    Таким образом, результаты подтверждают функционально пониженную аллергенность мутантных rPhl p 6 d[P29, 30] + 6His, rPhl p 6 d[P57] + 6His и rPhl p 6 d[P79] + 6His. Таким образом, данное исследование может подтвердить, что мутации пролина в этих двух областях Phl p 6, кроме того, понижают способность IgE связывания, по меньшей мере, у некоторых страдающих от аллергии.

    Поэтому представленное изобретение, кроме того, касается гипоаллергенных модификаций аллергенов группы 6 семейства мятликовых (Poaceae), в которых пролины, которые соответствуют в первичной структуре пролинам в положениях 29, 30, 57, 79 в аминокислотной последовательности немутантного типа Phl p 6, мутировали по отдельности.

    Представленное изобретение предпочтительно касается гипоаллергенных модификаций Phl p 6 или Poa p 6, в которых пролины, которые соответствуют в первичной структуре пролинам в положениях 29, 30, 57, 79 в аминокислотной последовательности немутантного типа Phl p 6, мутировали по отдельности.

    Представленное изобретение особенно предпочтительно касается гипоаллергенных модификаций Phl p 6, в которых пролины, которые соответствуют в первичной структуре пролинам в положениях 29, 30, 57, 79 в аминокислотной последовательности немутантного типа Phl p 6, мутировали по отдельности.

    Поэтому особенное предпочтение отдается гипоаллергенным модификациям аллергенов группы 6 семейства мятликовые (Poaceae), в которых пролины, которые соответствуют в первичной структуре пролинам в положениях 29, 30, 57, 79 в аминокислотной последовательности зрелого Phl p 6.0102 (SEQ ID NO: 2), мутировали, то есть удалялись по отдельности.

    Представленное изобретение, кроме того, предпочтительно касается гипоаллергенных модификаций, в соответствии с изобретением, аллергенов группы 6 семейства мятликовых (Poaceae), в которых пролины, которые соответствуют в первичной структуре пролинам в положениях 29, 30, 57, 79 в аминокислотной последовательности немутантного типа Phl p 6, удаляли по отдельности.

    В дополнение, представленное изобретение, кроме того, касается гипоаллергенных модификаций, в соответствии с изобретением, аллергенов группы 6 семейства мятликовых (Poaceae), в которых пролины, которые соответствуют в первичной структуре пролинам в положениях 29, 30, 57, 79 в аминокислотной последовательности немутантного типа Phl p 6, замещали по отдельности. В данном документе пролин замещают, в виде примера, лейцином (L). В соответствии с изобретением, однако, пролины в соответствии с изобретением могут быть замещены какой-либо аминокислотой.

    В частности, гипоаллергенные модификации rPhl p 6 d[P29], rPhl p 6 d[P30], rPhl p 6 d[P29, 30], rPhl p 6 d[P57], rPhl p 6 d[P79], rPhl p 6 P29L, rPhl p 6 P30L, rPhl p 6 P29L, P30L, rPhl p 6 P57L и rPhl p 6 P79L и подобные, включая все гипоаллергенные модификации в соответствии с изобретением, описанные ниже, находятся в соответствии с изобретением, где нумерация соответствует последовательности Phl p 6, в частности зрелой Phl p 6.0102.

    Более того, данные примеры не ограничиваются модификациями Phl p 6, но также касаются и, в частности, Poa p 6 и аллергенов группы 6 всех других мятликовых.

    В дополнение, по-прежнему обнаруживаемая способность IgE связывания гипоаллергенных модификаций, в соответствии с изобретением, аллергенов группы 6 в дальнейшем может быть понижена путем комбинаций мутаций пролина. Таким образом, вследствие значительно пониженного IgE связывания мутантного rPhl p 6 d[P29, 30] + 6His и обстоятельства, что способность IgE связывания, кроме того, может быть частично понижена путем делеции пролинов 57 и 79, получают нуклеиновые кислоты, которые включают мутации в комбинациях. На основании ДНК мутантного rPhl p 6 d[P29, 30] + 6His пролины в положениях 57 и 79 или удалены, или заменены аминокислотой — лейцином.

    Соответственно, получены последовательности, кодирующие протеины rPhl p 6 d[P29, 30, 57] + 6His и rPhl p 6 d[P29, 30, 79] + 6His, а также rPhl p 6 d[P29, 30] P57L + 6His и rPhl p 6 d[P29, 30] P79L + 6His. Данные модификации кодируют протеины, которые несут мутации пролина в двух петлях, которые связывают α-спирали Phl p 6 (Фиг.2).

    Кроме того, нуклеиновую кислоту, кодирующую rPhl p 6 d[P29, 30] P57L P79L + 6His, получают с целью получить модификацию аллергена, который содержит в трех областях петли (Фиг.2). Как уже упоминалось выше, последовательности преимущественно экспрессируют в Е. coli, и протеины очищают стандартными способами.

    Более того, чистоту анализировали путем SDS-PAGE и путем SEC/MALS/RI (Фиг.12, Фиг.13). Все протеины в соответствии с изобретением, таким образом, могут быть получены с высокой чистотой и растворимостью.

    SEC/MALS/RI способ показывает значительные различия в свойствах упомянутых выше мутантов по отношению к образующимся димерам (Фиг.13, Таблица 2). Молекулярные массы, определенные для протеинов rPhl p 6 d[P29, 30, 57] + 6His, rPhl p 6 d[P29, 30] P57L + 6His и rPhl p 6 d[P29, 30] P57L P79L + 6His, демонстрируют четкую тенденцию к образованию димеров. Протеины rPhl p 6 d[P29, 30, 79] + 6His и rPhl p 6 d[P29, 30] P79L + 6His обнаруживают только в мономерной форме (Таблица 2). Из данных результатов может быть сделан вывод, что модифицирование пролина в положении 57, а не пролин 79, изменяют rPhl p 6 d[P29, 30] таким способом, что индуцируют тенденцию к димеризации.

    Определение способности IgE связывания способом тест-полоски неожиданно показывает в действительности, что сыворотки страдающих от аллергии из группы «A», которые имеют обнаруживаемое IgE связывание с rPhl p 6 d[P29, 30], имеют значительно пониженное IgE связывание с оптимизированными модификациями (Фиг.14). Любой из пролинов 57 и 79 удаляли или замещали другой аминокислотой, предположительно это имеет точно такое же небольшое влияние на понижение способности IgE связывания, как и на способность образовывать димеры. Таким образом, показано, что одновременно представленное модифицирование большинства аминокислотных остатков из группы пролинов 29, 30, 57 и 79 значительно понижают в дальнейшем IgE связывание.

    Поэтому представленное изобретение, кроме того, касается гипоаллергенных модификаций аллергенов группы 6 семейства мятликовые (Poaceae), в которых пролины, которые соответствуют в первичной структуре пролинам в положениях 29, 30, 57, 79 в аминокислотной последовательности немутантного типа Phl p 6, мутировали в комбинациях. Предпочтение отдается мутациям посредством делеции и посредством замещения другими аминокислотами. В данном документе может быть выбрана какая-либо аминокислота для замещения пролина.

    Представленное изобретение предпочтительно касается гипоаллергенных модификаций Phl p 6 или Poa p 6, в которых пролины, которые соответствуют в первичной структуре пролинам в положениях 29, 30, 57, 79 в аминокислотной последовательности немутантного типа Phl p 6, мутировали в комбинациях.

    Представленное изобретение особенно предпочтительно касается гипоаллергенных модификаций Phl p 6, в которых пролины, которые соответствуют в первичной структуре пролинам в положениях 29, 30, 57, 79 в аминокислотной последовательности немутантного типа Phl p 6, мутировали в комбинациях.

    Особенное предпочтение отдается гипоаллергенным модификациям аллергенов группы 6 семейства мятликовые (Poaceae), в которых пролины, которые соответствуют в первичной структуре пролинам в положениях 29, 30, 57, 79 в аминокислотной последовательности зрелого Phl p 6.0102 (SEQ ID NO: 2), мутировали в комбинациях.

    Особенное предпочтение отдается гипоаллергенным модификациям в соответствии с изобретением, в которых пролины 29, 30, 57, 79 удалены в комбинациях. Особенное предпочтение, кроме того, отдается гипоаллергенным модификациям в соответствии с изобретением, в которых пролины 29, 30, 57, 79 замещены в комбинациях.

    Кроме того, особенное предпочтение отдается гипоаллергенным модификациям в соответствии с изобретением, в которых пролины 29, 30, 57, 79 были удалены и/или замещены в комбинациях. В частности, гипоаллергенные модификации rPhl p 6 d[P29, 30, 57], rPhl p 6 d[29, 30, 79], rPhl p 6 d[29, 30, 57, 79], rPhl p 6 d[P29, 57], rPhl p 6 d[P30, 57], rPhl p 6 d[29, 79], rPhl p 6 d[30, 79], rPhl p 6 d[29, 57, 79], rPhl p 6 d[30, 57, 79], rPhl p 6 d[P29, 30] P57L, rPhl p 6 d[29, 30] P79L, rPhl p 6 d[29, 30] P57L P79L, rPhl p 6 d[P29] P30L, rPhl p 6 d[P30] P29L, rPhl p 6 d[P57] P29L P30L, rPhl p 6 d[P79] P29L P30L, rPhl p 6 d[P57, 79] P29L P30L, rPhl p 6 P29L P30L P57L, rPhl p 6 P29L P30L P79L, rPhl p 6 P29L P30L P57L P79L и подобные, включая все гипоаллергенные модификации в соответствии с изобретением, описанные ниже, находятся, вследствие этого, в соответствии с изобретением, где нумерация соответствует последовательности Phl p 6, а именно зрелой Phl p 6.0102.

    В данном документе пролин замещают, в виде примера, лейцином (L). В соответствии с изобретением, однако, пролины, в соответствии с изобретением, могут быть замещены какой-либо аминокислотой. Соответственно, все гипоаллергенные модификации, упомянутые выше, в которых один или более пролинов, в соответствии с изобретением, замещены другой аминокислотой, находятся в соответствии с изобретением. Более того, данными примерами не ограничиваются модификации Phl p 6, но и также касаются, в частности, Poa p 6 и аллергенов группы 6 всех других мятликовых. Однако особенное предпочтение отдается всем упомянутым гипоаллергенным модификациям, в соответствии с изобретением, Phl p 6 Phleum pratense, а именно на основе Phl p 6.0102.

    T-хелперы-лимфоциты реагируют с пептидными фрагментами аллергенов, которые образуются посредством процессов деградации в антиген представляющих клетках (АРС) и представлены связанными с молекулами МНС класса II на поверхности АРС. Пептиды, в основном, имеют длину 13-18 аминокислот, но могут также быть длиннее благодаря сайту связывания МНС класса 2, который открыт сбоку. Обнаружено, что принципиальные точки контакта пептида с молекулой класса МНС находятся в ядерной последовательности из около 7-10 аминокислот. Аллерген специфическая активация T-хелпер-лимфоцитов является необходимым предварительным условием для их пролиферации и функциональной дифференциации (например, Treg, TH1 и TH2). Способность аллергена или модификации аллергена стимулировать аллерген специфические T-лимфоциты рассматривается как ключ для их терапевтического действия.

    Все модификации аллергена, полученные на основе Phl p 6 или Phl p 6.0102 и описанные в данном документе, демонстрируют значительное сохранение критических эпитопов T-клеток в экспериментах.

    Таким образом, впервые описываются модификации аллергенов группы 6 Poaceae, которые демонстрируют новые свойства протеинов посредством модифицирования пролиновых остатков. Рассмотренные пролиновые остатки расположены в областях петли. Исключительно модифицирование определенных пролиновых остатков в результате приводит к новым модификациям, которые характеризуются пониженной IgE реактивностью со значительным сохранением реактивности T-клетки и, поэтому, являются пригодными для лечебной и профилактической специфической иммунотерапии. Соответствующие молекулы ДНК также являются приемлемыми для иммунотерапевтической вакцинации.

    Поэтому представленное изобретение касается описанных модификаций аллергена, молекул ДНК и рекомбинантных векторов экспрессии в соответствии с изобретением, как лекарственных средств.

    Гипоаллергенные модификации, молекулы ДНК и рекомбинантные векторы экспрессии в соответствии с изобретением или лекарственные средства в соответствии с изобретением могут использовать, в частности, для профилактики и/или для лечения заболеваний и состояний. Лекарственные средства в соответствии с изобретением особенно приемлемы для лечения и/или профилактики аллергий типа 1, то есть для специфической иммунотерапии (гипосенсибилизации) пациентов, страдающих от аллергии на пыльцу травы, или для профилактической иммунотерапии аллергий на пыльцу травы, в инициирование которых вовлечены аллергены группы 6 рода Poaceae. Молекулы ДНК и рекомбинантные векторы экспрессии в соответствии с изобретением могут быть использованы для соответствующей иммунотерапевтической и профилактической ДНК вакцинации.

    Изобретение, кроме того, касается использования, по меньшей мере, одной гипоаллергенной модификации в соответствии с изобретением для производства лекарственного средства для предупреждения и/или терапевтического лечения аллергий типа 1, причиной инициирования которых являются аллергены группы 6 мятликовых.

    Кроме того, в соответствии с изобретением находится использование, по меньшей мере, одной молекулы ДНК, в соответствии с изобретением, и/или рекомбинантного вектора экспрессии, в соответствии с изобретением, включая их смеси во всех соотношениях, для производства лекарственного средства для иммунотерапевтической ДНК вакцинации.

    Более того, изобретение касается фармецевтических препаратов, содержащих, по меньшей мере, одну гипоаллергенную модификацию, в соответствии с изобретением, по меньшей мере, одну молекулу ДНК, в соответствии с изобретением, и/или по меньшей мере, один рекомбинантный вектор экспрессии, в соответствии с изобретением, включая их смеси во всех соотношениях, и необязательно дополнительные активные соединения и/или вспомогательные, для профилактического и/или терапевтического лечения аллергий типа 1.

    В частности, фармацевтические препараты в соответствии с изобретением являются приемлемыми для профилактического и/или терапевтического лечения аллергий типа 1, причиной инициирования которых являются аллергены группы 6 мятликовых.

    Фармацевтические препараты в смысле данного изобретения могут использовать как терапевтические агенты в медицине человека и ветеринарной медицине и соответственно могут быть введены людям или животным, в частности млекопитающим, таким как обезьяны, собаки, коты, крысы или мыши, и могут быть использованы в терапевтическом лечении человека или животного и в противодействие упомянутым выше заболеваниям. Более того, их могут использовать как диагностические агенты или как реагенты.

    При использовании препаратов или лекарственных средств, в соответствии с изобретением, гипоаллергенные модификации, молекулы ДНК или рекомбинантные векторы экспрессии, в соответствии с изобретением, в основном используют аналогично известным, коммерчески доступным препаратам, предпочтительно в дозах между 0,001 и 500 мг, в случае гипоаллергенных модификаций около 1-500 мкг, предпочтительно 5-200 мкг, на дозу в фазе стабилизации. Препарат могут вводить однократно или несколько раз в день, например дважды, три раза или четыре раза в день. Дозы, как правило, увеличиваются до поддерживающей дозы в фазе возрастающего дозирования. Различные схемы увеличения и поддержания дозировки являются возможными для этой цели. В случае подкожной иммунотерапии (SCIT), например, они могут включать кратковременные терапии (ограниченные числом инъекций до начала сезонных жалоб, как правило, 4-7 инъекций), предсезонные терапии (начало терапии до сезона пыления, как правило, еженедельные инъекции во время фазы возрастания и ежемесячные инъекции при поддерживающей дозе до начала сезона пыления) или круглогодичные терапии (фаза возрастающего дозирования, как правило, аж до 16 еженедельных инъекций, с последующими ежемесячными инъекциями поддерживающей дозы, если необходимо пониженная доза во время сезона пыления). В случае сублингвальной иммунотерапии водными или твердыми препаратами (таблетки, капсулы, т.п.) терапию могут проводить с или без фазы возрастающего дозирования. Терапию, предпочтительно, проводят ежедневными дозами на всем протяжении года, но также могут проводить предсезонно или по другим схемам применения (например, через день, еженедельно, ежемесячно).

    Выражение «эффективное количество» означает количество лекарственного средства или фармацевтически активного соединения, которое обуславливает биологический или медицинский ответ в ткани, системе, животном или человеке, которые подысканы или направлены исследователем или терапевтом.

    К тому же, выражение «терапевтически эффективное количество» означает количество, которое по сравнению с соответствующим субъектом, который не получал этого количества, имеет следующие последствия: улучшение лечения, оздоровление, предупреждение или избавление от заболевания, синдрома, состояния, недуга, расстройства, или предупреждения побочных эффектов, или, кроме того, снижение прогрессирования заболевания, недуга или расстройства. Термин «терапевтически эффективное количество», кроме того, охватывает количества, которые являются эффективными с возрастающей нормальной физиологической функцией.

    Лекарственные средства могут быть адаптированы для введения посредством какого-либо по желанию приемлемого пути, например оральным (включая буккальный или сублингвальный), ректальным, пульмональным, назальным, местным (включая буккальный, сублингвальный или трансдермальный), вагинальным или парентеральным (включая подкожный, внутримышечный, внутривенный или интрадермальный) путями. Такие лекарственные средства могут быть приготовлены, используя все процессы, известные в фармацевтической отрасли, например комбинацией активного соединения с наполнителем(ями) или вспомогательным(ыми).

    Приемлемыми для парентерального использования являются, в частности, растворы, преимущественно масляные или водные растворы, кроме того, суспензии, эмульсии или имплантанты. Модификации аллергена, в соответствии с изобретением, также могут быть лиофилизированными и полученные в результате лиофилизаты используют, например, для приготовления инъекционных препаратов. Указанные препараты могут быть стерилизованными и/или включать адъюванты, такие как лубриканты, консерванты, стабилизаторы и/или увлажняющие агенты, эмульгаторы, соли для модифицирования осмотического давления, буферные вещества и/или множество дополнительных активных соединений. Более того, базовые препараты могут быть получены путем соответствующей формуляции модификаций аллергена, в соответствии с изобретением, например путем адсорбции на гидроксиде алюминия, фосфате кальция или тирозине.

    Приемлемыми наполнителями являются органические или неорганические вещества, которые являются приемлемыми для парентерального введения и не взаимодействуют с модификациями аллергена группы 6, в соответствии с изобретением. Их примерами являются наполнители, такие как вода, растительные масла, бензиловые спирты, полиэтиленгликоли, глицеринтриацетаты, желатин, углеводы, такие как лактоза или крахмал, стеарат магния, тальк, ланолин или вазелин.

    Парентеральное введение является предпочтительно приемлемым для введения лекарственных средств, в соответствии с изобретением. В случае парентерального введения внутривенное, подкожное, интрадермальное или внутрилимфатическое введение являются особенно предпочтительными. В случае внутривенного введения инъекцию выполняют непосредственно или как дополнение к инфузионным растворам.

    Лекарственные средства, которые адаптированы к парентеральному введению, включают водные и неводные стерильные инъекционные растворы, которые содержат антиоксиданты, буферы, бактериостатики и солюбилизаторы, посредством которых состав оказывается изотоническим с кровью реципиента для лечения, водные и неводные стерильные суспензии, которые могут включать суспензирующие агенты и загустители. Составы могут быть введены в однодозовые или многодозовые контейнеры, например запаянные ампулы и флаконы, и хранимые в сухо-замороженном (лиофилизированном) состоянии, означающем, что предполагается, что является необходимым только добавление жидкого носителя, например воды для инъекции, непосредственно перед использованием. Инъекционные растворы и суспензии, которые готовят в соответствии с составом, могут быть получены из стерильных порошков, гранул и таблеток.

    При желании, препараты или лекарственные средства, в соответствии с изобретением, могут включать одно или более дополнительных активных соединений и/или один или более агентов, усиливающих действие (адъювантов).

    Таким образом, представленное изобретение, кроме того, касается фармацевтических препаратов, которые включают дополнительные активные соединения и/или вспомогательные вещества. Изобретение предпочтительно касается фармацевтических препаратов, в соответствии с изобретением, которые отличаются тем, что дополнительные активные соединения являются аллергенами или их модификациями. Примерами приемлемых дополнительных активных соединений являются другие аллергены, в частности аллергены мятликовых, особенно предпочтительно аллергены подсемейства Pooideae, предпочтительно из групп Poodae и Triticodae, предпочтительно представленные Phleum pratense, Holcus lanatus, Phalaris aquatica, Dactylis glomerata, Lolium perenne, Poa pratensis, Hordeum vulgare, Secede cereale и Triticum aestivum, например аллергены группы 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 10, 12 или 13 и их модификации, например гипоаллергенные модификации, фрагменты, мультимеры, гибридные молекулы или рекомбинантные слитые протеины. Представленное изобретение, кроме того, касается фармацевтических препаратов, которые включают, по меньшей мере, одно дополнительное вспомогательное вещество, особенно предпочтительно так называемые адъюванты. Примерами адъювантов являются гидроксид алюминия, монофосфорильный липид A, активаторы Toll-подобных рецепторов, такие как, например, липополисахариды и CpG олигонуклеотиды, витамин D3, микробактериальные антигены и молекулы с паразитов (например, шитосомы или филярии), такие как, например, цистатин или ES-62.

    Изобретение, кроме того, касается наборов (комплектов), которые включают отдельные упаковки из:

    a) фармацевтического препарата, в соответствии с изобретением, который содержит эффективное количество гипоаллергенной модификации, молекулы ДНК или рекомбинантный вектор экспрессии, в соответствии с изобретением;

    b) фармацевтического препарата, который содержит эффективное количество дополнительного фармацевтически активного соединения и/или адъюванта.

    Набор включает приемлемые контейнеры, такие как коробки или картонки, индивидуальные флаконы, пакеты или ампулы. Набор может включать, например, отдельные ампулы, каждая из которых содержит состав, в соответствии с изобретением, включающий эффективное количество гипоаллергенной модификации, молекулы ДНК или рекомбинантный вектор экспрессии в соответствии с изобретением и состав с дополнительным активным соединением в виде лекарственного средства в растворенной или лиофилизированной форме.

    Даже без дополнительных вариантов осуществления, предполагается, что квалифицированный специалист в данной области будет способен использовать приведенное выше описание в самом широком объеме. Поэтому предпочтительные варианты осуществления следует рассматривать только как описательное раскрытие информации, которые, однако, никоим образом в любом случае не являются ограничивающими.

    Таким образом, следующие примеры предназначены для объяснения изобретения, не ограничивая его. Если не указано другое, то данные в процентах означают процент по массе. Все температуры указаны в градусах Цельсия. «Общепринятая разработка»: если необходимо, добавляют воду, если необходимо, регулируют pH в диапазоне значений между 2 и 10, в зависимости от структуры конечного продукта.

    Следующие гипоаллергенные модификации в соответствии с изобретением получают биотехнологическими способами и охарактеризовуются. Однако получение и характеристика веществ, кроме того, могут осуществлять другими способами, известными квалифицированному специалисту с уровня техники. Например, гипоаллергенные модификации, в соответствии с изобретением, кроме того, могут быть синтезированы химически. Изобретение, более того, касается гипоаллергенных модификаций, в соответствии с изобретением, описанных ниже.

    Пример 1: Модификации Phl p 6 с делециями пролинов в одной области петли

    Получение модификаций rPhl p 6 d[P29, 30]+6His, rPhl p 6 d[P57] + 6His и rPhl p 6 d[P79] + 6His и их иммунологическая характеристика описана ниже. Рекомбинантный немодифицированный аллерген (rPhl p 6 wt + 6His) получают и исследуют по аналогии, и гипоаллергенные модификации других аллергенов группы 6, в соответствии с изобретением, мятликовых и их протеины немутантного типа, в частности Poa p 6, также могут быть получены и исследованы по аналогии.

    Конструирование путем генной инженерии

    ДНК, кодирующие модификации, синтезируют путем связывания длинных перекрывающихся нуклеотидов ДНК и амплификации ДНК стандартным способом PCR (ПЦР). Кодоны выбирают таким образом, чтобы определить концентрацию частиц с помощью RI детектора, а рассеяние света регистрируют, используя MALS детектор (Wen et al., 1996, Anal. Biochem. 240:155-166). Средняя масса элюированных частиц может быть рассчитана исходя из этих данных с погрешностью около 5%. Мономеры, димеры, другие мультимеры и агрегаты могут быть обнаружены с помощью SEC/MALS/RI.

    В процессе SEC/MALS/RI анализа становится ясно, что протеины, каждый из которых элюируют отдельным пиком, находятся в форме чистых мономеров при естественных условиях (Фиг.8, Таблица 1).

    Таблица 1
    Молекулярная масса Phl p 6 немутантного типа и модификаций Phl p 6 с делециями пролина в петлях 1, 2, 3 или 4
    Образцы Протеин ММрассч. 1 [кДа] SEC 2 мм [кДа] Оценка
    1 Phl p 6 wt + 6His 12,92 12,89 Мономер
    2 d[P29, 30] + 6His 12,73 12,88 Мономер
    3 d[P57] + 6His 12,83 12,91 Мономер
    4 d[P79] + 6His 12,83 12,92 Мономер
    5 d[P101] + 6His 12,83 12,89 Мономер
    1 Рассчитывали молекулярную массу на основании аминокислотной последовательности, начиная с метионина (программное обеспечение: EditSeq 6.0; DNA-Star Inc., Madison, USA).
    2 Определение массы частиц способом гель-фильтрации (SEC). Среднюю массу элюированных протеиновых частиц в пике указывают в окне системы.

    Происходящее в реальном времени определение концентрации протеина выполняют, используя OptilabrEX рефрактометрический детектор (RI) (Wyatt, Santa Barbara, USA). Рассеяние света частицами определяли, используя MiniDAWN Treos (Wyatt) многоугловой детектор. Массу частиц рассчитывали, используя ASTRA 5.3.2.17 программное обеспечение (Wyatt) через совокупность формул Дебая с предположительно увеличенным показателем преломления 0,180 мл/г. SEC колонка: Superdex 200 GL 10/300 (GE Healthcare, Uppsala, Sweden). Элюент: 20 мМ буферный раствор фосфата натрия pH 7,2 с 150 мМ NaCl.

    Выведенная аминокислотная последовательность основана на той, что и зрелая Phl p 6.0102 (Фиг.3, Фиг.4). Мутации делецией пролина вводят, используя специфические олигонуклеотиды, в которых отсутствуют соответствующие кодоны, для пролина в реакциях PCR. Данные олигонуклеотиды выбирают таким образом, что выведенный протеин несет гексагистидиновый слитый компонент на 5′ конце (Фиг.5, Фиг.6).

    Данные ДНК лигировались в вектор экспрессии pTrcHis2 Topo (Invitrogen, Carlsbad, USA) посредством реакции топоизомеразы. Корректность ДНК подтверждают путем секвенирования.

    Экспрессия и очистка:

    Экспрессию рекомбинантных гистидиновых слитых протеинов осуществляют в Escherichia coli (Top 10 штамм; Invitrogen). rPhl p 6 wt + 6 His и модификации первично очищают путем специфического связывания N-терминальных гистидиновых остатков с Ni + хелатной матрицей (аффинная хроматография с иммобилизированным ионом металла, IMAC; материал: HiTrap, GE Healthcare, Uppsala, Sweden). Рекомбинантные протеины из IMAC элюата впоследствии концентрировали и проводили гель-фильтрацию (материал: Superdex 75; GE Healthcare).

    Чистоту полученных протеинов сначала проверяют путем SDS-PAGE с последующим окрашиванием Кумасси. Анализ показывает очень высокую степень чистоты всех протеинов (Фиг.7).

    Аналитическая гель-фильтрация (SEC) позволяет разделение видов протеинов на основе их специфических гидродинамических радиусов. Происходящее в реальном времени определение молекулярной массы может достигаться путем сочетания рефрактометра (RI детектор) и детектора многоуглового рассеяния света (MALS детектор) с хроматографической системой (SEC/MALS/RI способ). В данном способе предоставленное при измерении времени

    Отсутствие нерастворимых агрегатов протеинов также проверяют, используя электронную спектроскопию поглощения (фотометр: Ultrospec 5300pro UV/VIS; GE Healthcare).

    В электронную спектроскопию поглощения волновой спектр раствора протеина регистрируют в диапазоне длин волн от 240 до 800 нм. Нерастворимые агрегаты в растворах протеинов поглощают в диапазоне длин волн >300 нм, в то время как высоко растворимые протеины не поглощают в данном диапазоне. Волновые спектры типичны для протеинов, имеющих высокую растворимость. Таким образом, протеины, в соответствии с изобретением, являются растворимыми, высокочистыми и мономерными при естественных условиях.

    Доказательство пониженного IgE связывания:

    Простым способом анализа для определения реактивности специфического IgE из сывороток страдающих от аллергии является тест-полоска. Используя данный способ, относительно большое число сывороток страдающих от аллергии может быть исследовано параллельно.

    Для этой цели, исследуемые вещества с одинаковой концентрацией и количеством связывают в одном ряду один за другим с полоской нитроцеллюлозной мембраны при условиях, не вызывающих денатурацию. Серии таких полосок мембран могут инкубировать параллельно с разными сыворотками страдающих от аллергии. После стадии промывания специфически связанные IgE антитела становятся видимыми на мембране посредством цветной реакции, стимулированной IgE/щелочным конъюгатом фосфатазы не человека.

    Результаты от модификаций Phl p 6, используя 18 конкретных сывороток страдающих от аллергии на пыльцу травы, изображены на Фиг.9. Как важный контроль, сначала исследуют IgE связывание рекомбинантного аллергена с и без гистидиновой слитой компоненты. Оба протеина демонстрируют одинаковую способность IgE связывания. N-терминальный гистидиновый слитый компонент, использованный для изучения, соответственно, не препятствует связыванию IgE с Phl p 6.

    Мутантный rPhl p 6 d[P101] + 6His демонстрирует подобное хорошее IgE связывание, как и немодифицированный аллерген со всех исследованных сывороток (Фиг.9). Из этого следует, что делеция пролина 101 не оказывает значительное влияние на способность IgE связывания Phl p 6. IgE связывание мутантных rPhl p 6 d[P29, 30] + 6His, rPhl p 6 d[P57] + 6His и rPhl p 6 d[P79] + 6His различается в сыворотках страдающих от аллергии на пыльцу разных трав. Это происходит благодаря разновидности в композиции IgE популяции конкретных страдающих от аллергии по отношению к аффинности и специфичности антигенной детерминации IgE антител. Мутантные rPhl p 6 d[P57] + 6His и rPhl p 6 d[P79] + 6His демонстрируют значительно пониженную IgE реактивность с большинством сывороток, по сравнению с немодифицированным rPhl p 6 wt + 6His. Однако во всех отношениях наименьшее IgE связывание наблюдается в случае мутантного rPhl p 6 d[P29, 30] + 6His (Фиг.9).

    Исследование способности IgE связывания растворенных анализируемых веществ проводят, используя анализ EAST ингибирования (ферментное исследование аллергосорбента). В данном способе взаимодействие аллерген/IgE может быть исследовано в растворе, что позволяет маскировать вмешательство эпитопов исследуемой субстанции, чтобы его исключить, например, путем иммобилизации на мембране.

    Анализ EAST ингибирования проводят, как указано далее. Микротитрационные планшеты покрывают аллергенами, в данном документе rPhl p 6 wt + 6His. После удаления несвязанных молекул аллергена промыванием планшет блокируют альбумином бычьей сыворотки с целью предупреждения более позднего неспецифического связывания. IgE антитела страдающих от аллергии, в виде конкретных сывороток, в приемлемых разбавлениях инкубировали в покрытых аллергеном микротитрационных планшетах. Количество аллерген-связанных IgE антител количественно определяют фотометрически через Anti-hIgG/щелочной конъюгат фосфатазы посредством реакции субстрата, что дает окрашенный конечный продукт.

    Связывание IgE антител ингибируют субстанция-специфически растворимым аллергеном или субстанцией для исследования (рекомбинантный модифицированный аллерген) как функцией концентрации.

    Результаты анализа IgE ингибирования, приведенные на Фиг.10 с модификациями рекомбинантного аллергена Phl p 6, показывают, что делеция пролиновых остатков Р[29, 30], Р57 и Р79 служит причиной пониженной способности IgE связывания Phl p 6. Способность IgE связывания мутантного d[P29, 30] является значительно более низкой, чем та, что d[P57] или d[P79]. Более низкое ингибирующее действие показывает потерю IgE эпитопов. Мутантный d[P101] не демонстрирует модифицированного IgE связывания с сывороткой страдающего от аллергии на пыльцу травы P32 и только слабое понижение связывания с сывороткой P82, которое, с другой стороны, почти соответствует той, что и у немутантного типа при высокой концентрации ингибитора.

    Доказательство понижения функциональной аллергенности:

    Функциональное действие мутантов в поперечном связывании мембрана-связанного IgE клеток-эффекторов и их активацию впоследствии исследовали in vitro.

    Для теста активации базофилов гепаринизированную цельную кровь страдающих от аллергии на пыльцу травы инкубируют с различными концентрациями исследуемых веществ. Аллергические вещества способны связывать специфические IgE антитела, которые связываются с высоко аффинными IgE рецепторами базофильных гранулоцитов. Сшивание комплексов IgE/рецептор, вызванное молекулами аллергенов, в результате приводит к сигнальной трансдукции, которая в результате приводит к дегрануляции клеток-эффекторов и, таким образом, запускает аллергические реакции in vivo.

    Аллерген-индуцированная активация базофильных иммуноцитов может быть определена in vitro количественной оценкой экспрессии поверхностного протеина (CD203c), связанного с сигнальной трансдукцией IgE-рецептора поперечными связями (Kahlert et al., Clinical Immunology and Allergy in Medicine Proceedings of the EAACI 2002 (2003) Naples, Italy 739-744). Число поверхностных протеинов, экспрессированных в клетке, и процентное значение активированных клеток петли клетки измеряют с высокой чувствительностью посредством связывания меченного флюоресцентной меткой моноклонального антитела с поверхностным протеином и последующим анализом с помощью флюоресцентно активированной проточной цитометрии.

    Гранулоциты, использованные в анализе, в представленном примере выделяют из цельной крови страдающего от аллергии P21. Данный страдающий от аллергии представляет таких страдающих от аллергии, чьи IgE антитела демонстрируют обнаруживаемое связывание с rPhl p 6 d[P29, 30] + 6His в способе тест-полоски (группа «A»).

    При тех же концентрациях немодифицированного, рекомбинантного аллергена и rPhl p 6 d[P29, 30] + 6His последний демонстрирует меньшее связывание с мембрана-связанными IgE антителами в случае обоих доноров и вследствие этого существенно снизилась активация базофильных гранулоцитов (Фиг.11.).

    Таким образом, результаты подтверждают функциональное понижение аллергенности мутантного rPhl p 6 d[P29, 30] + 6His. Мутантные rPhl p 6 d[P57] + 6His и rPhl p 6 d[P79] + 6His демонстрируют явное понижение активации базофильных клеток в случае донора P21. Таким образом, данные анализа подтверждают, что пролиновые мутации в этих двух областях Phl p 6 также понижают способность IgE связывания, по меньшей мере, у некоторых страдающих от аллергии.

    T-клеточная реактивность модификаций:

    С целью исследования T-клеточной реактивности олигоклональные линии T-клеток страдающих от аллергии на пыльцу травы создают стандартными способами со стимуляцией немодифицированным аллергеном. В пролиферативном анализе различные линии T-клеток стимулируют упомянутым аллергеном rPhl p 6 wt и модифицированными вариантами рекомбинантного аллергена. Скорость пролиферации определяют стандартными способами включением [3H]-тимидина.

    Модификации rPhl p 6 d[P29, 30] + 6His, rPhl p 6 d[57] + 6His и rPhl p 6 d[79] + 6His стимулируют пролиферацию в исследованных линиях T-клеток в сопоставимой степени с немодифицированным аллергеном. Из этого можно сделать вывод о сохранении важных T-клеточных эпитопов.

    Пример 2: Модификации Phl p 6 с комбинациями пролиновых делеций в ряде областей петли

    Получение и иммунологическая характеристика модификаций rPhl p 6 d[P29, 30, 57] + 6His и rPhl p 6 d[29, 30, 79] + 6His описана ниже в виде примера гипоаллергенных модификаций аллергенов группы 6 Poaceae с комбинациями пролиновых делеций, соответствующих аминокислотным положениям 29, 30; 57 и 79 в Phl p 6 немутантного типа (IUIS запись Phl p 6.0102). В данном документе удаленные пролиновые остатки могут находиться в двух или трех областях петли, гомологичной к Phl p 6. Соответствующие гипоаллергенные модификации Phl p 6 немутантного типа Phl p 6.0101 изомера (GenBank: Z27082.1, UniProt: P43215) получают и исследуют по аналогии, и гипоаллергенные модификации других аллергенов группы 6, в соответствии с изобретением, мятликовых и их протеины немутантного типа, в частности Poa p 6, также могут быть получены и исследованы по аналогии.

    Кодоны выбирают таким образом, что установленная аминокислотная последовательность основывается на таком, как зрелый Phl p 6.0102 (Фиг.3, Фиг.4). Мутации для пролиновых делеций вводят, используя специфические олигонуклеотиды, в которых отсутствуют соответствующие кодоны пролина в реакциях PCR. Олигонуклеотиды предпочтительно выбирают таким образом, что выведенный протеин несет гексагистидиновый слитый компонент на 5′ конце (Фиг.5, Фиг.6). Данные ДНК лигировались в вектор экспрессии pTrcHis2 Topo (Invitrogen, Carlsbad, USA) посредством реакции топоизомеразы. Корректность ДНК подтверждают путем секвенирования. Однако другие стандартные векторы экспрессии также могут быть использованы.

    Экспрессию рекомбинантных гистидиновых слитых протеинов осуществляют во всех стандартных эукариотических и прокариотических экспрессионных системах, экспрессию предпочтительно осуществляют в Escherichia coli (Top 10 штамм; Invitrogen). Модификации первично очищают путем специфического связывания N-терминальных гистидиновых остатков с Ni 2+ хелатной матрицей (аффинная хроматография с иммобилизированным ионом металла, IMAC; материал: HiTrap, GE Healthcare, Uppsala, Sweden). Рекомбинантные протеины из IMAC элюата впоследствии концентрировали и проводили гель-фильтрацию (материал: Superdex 75; GE Healthcare).

    Чистоту полученных протеинов сначала проверяют путем SDS-PAGE с последующим окрашиванием Кумасси. Анализ показывает очень высокую степень чистоты всех протеинов (Фиг.12).

    Аналитическая SEC, в которой протеины исследовали при естественных условиях, показывает, что протеины элюируют одним пиком. Высокомолекулярные агрегаты не обнаружены (Фиг.13). Происходящее в реальном времени определение молекулярной массы способом MALS/RI приводит к результату, что rPhl p 6 d[29, 30, 79] + 6His находится в чисто мономерной форме, в то время как элюированный rPhl p 6 d[P29, 30, 57] + 6His представляет собой смесь мономеров и димеров (Фиг.13, Таблица 2). Несмотря на это волновые спектры обоих протеинов, записанные с помощью электронной спектроскопии поглощения, являются типичными для протеинов, имеющих высокую растворимость.

    Таким образом, оба протеина являются растворимыми, чистыми и свободными от осадков при естественных условиях и, таким образом, достигаются необходимые предпосылки для точного анализа их способности специфического IgE связывания.

    Таблица 2
    Молекулярная масса Phl p 6 мутантов с мутациями в ряде петель
    Образцы Протеин ММрассч. 1 [кДа] SEC/MALS/RI 2 ММ [кДа] Оценка
    1 d[P29, 30, 57] + 6His 12,63 17,24 Смесь мономер/димер
    2 d[P29, 30, 79] + 6His 12,63 12,82 Мономер
    3 d[P29, 30] P57L + 6His 12,75 20,95 Смесь мономер/димер
    4 d[P29, 30] P79L + 6His 12,75 12,99 Мономер
    5 d[P29, 30] P57L P79L + 6His 12,76 25,56 Преимущественно димеры
    1 Рассчитывали молекулярную массу на основании аминокислотной последовательности, начиная с метионина (программное обеспечение: EditSeq 6.0; DNA-Star Inc., Madison, USA).
    2 Определение массы частиц способом гель-фильтрации (SEC). Среднюю массу элюированных протеиновых частиц в пике указывают в окне системы.

    Происходящее в реальном времени определение концентрации протеина выполняют, используя OptilabrEX рефрактометрический детектор (RI) (Wyatt, Santa Barbara, USA). Рассеяние света частицами определяли, используя MiniDAWN Treos (Wyatt) многоугловой детектор. Массу частиц рассчитывали, используя ASTRA 5.3.2.17 программное обеспечение (Wyatt) через совокупность формул Дебая с предположительно увеличенным показателем преломления 0,180 мл/г. SEC колонка: Superdex 200 GL 10/300 (GE Healthcare, Uppsala, Sweden). Элюент: 20 мМ буферный раствор фосфата натрия pH 7,2 с 150 мМ NaCl.

    Доказательство пониженного IgE связывания:

    Результаты анализа тест-полосками с rPhl p 6 d[P29, 30, 57] + 6His и rPhl p 6 d[29, 30, P79] + 6His, используя 18 индивидуальных сывороток страдающих от аллергии на пыльцу травы, показаны на Фиг.14. Неожиданно выявлено, что сыворотки страдающих от аллергии, которые имеют обнаруживаемое IgE связывание с rPhl p 6 d[P29, 30], в тест-полоске имеют преимущественно чрезвычайно пониженную IgE реактивность с модификациями rPhl p 6 d[P29, 30, 57] + 6His и rPhl p 6 d[29, 30, 79] + 6His (группа «A»: сыворотки 21, 32, 83, 137 и т.д.).

    Таким образом, четко показано, что способность IgE связывания Phl p 6 в дальнейшем может быть снижена множеством комбинированных делеций пролинов из разных областей петли, что является возможным посредством делеций пролиновых остатков только в одной-единственной области петли.

    T-клеточная реактивность модификаций:

    Модификации стимулируют пролиферацию исследованных линий T-клеток в сопоставимой степени, как и немодифицированный аллерген. Из этого можно сделать вывод о сохранении важных T-клеточных эпитопов.

    Пример 3: Модификации Phl p 6 с комбинациями пролиновых точечных мутаций в ряде областей петли

    Получение и иммунологическая характеристика модификаций rPhl p 6 d[P29, 30] P57L + 6His, rPhl p 6 d[29, 30] P79L + 6His и rPhl p 6 d[29, 30] P57L P79L + 6His описаны ниже в виде примера гипоаллергенных модификаций аллергенов группы 6 Poaceae с комбинациями пролиновых точечных мутаций, соответствующих аминокислотным положениям 29, 30 57 и 79 в Phl p 6 немутантного типа (IUIS запись Phl p 6.0102). Пролиновые остатки могут быть превращены в какую-либо аминокислоту. Соответствующие гипоаллергенные модификации Phl p 6 немутантного типа изомера Phl p 6.0101 (GenBank: Z27082.1, UniProt: P43215) получают и исследуют по аналогии, и гипоаллергенные модификации других аллергенов группы 6, в соответствии с изобретением, семейства мятликовых и их протеины немутантного типа, в частности Poa p 6, также могут быть получены и исследованы по аналогии.

    Кодоны выбирают таким образом, что установленная аминокислотная последовательность основывается на таком, как зрелый Phl p 6.0102 (Фиг.3, Фиг.4). Мутации для пролиновых делеций вводят, используя специфические олигонуклеотиды, в которых отсутствуют соответствующие кодоны пролина в реакциях PCR. Олигонуклеотиды предпочтительно выбирают таким образом, что выведенный протеин несет гексагистидиновый слитый компонент на 5′ конце (Фиг.5, Фиг.6).

    Данные ДНК лигировались в вектор экспрессии pTrcHis2 Topo (Invitrogen, Carlsbad, USA) посредством реакции топоизомеразы. Корректность ДНК подтверждали путем секвенирования. Однако другие стандартные векторы экспрессии также могут быть использованы.

    Экспрессию рекомбинантных гистидиновых слитых протеинов могут осуществлять во всех стандартных эукариотических и прокариотических экспрессионных системах, экспрессию предпочтительно осуществляют в Escherichia coli (Top 10 штамм; Invitrogen). Модификации первично очищают путем специфического связывания N-терминальных гистидиновых остатков с Ni 2+ хелатной матрицей (аффинная хроматография с иммобилизированным ионом металла, IMAC; материал: HiTrap, GE Healthcare, Uppsala, Sweden). Рекомбинантные протеины впоследствии концентрировали из IMAC элюата и проводили гель-фильтрацию (материал: Superdex 75; GE Healthcare).

    Чистоту полученных протеинов сначала проверяют путем SDS-PAGE с последующим окрашиванием Кумасси. Анализ показывает очень высокую степень чистоты всех протеинов (Фиг.12).

    Аналитическая SEC, в которой протеины исследовали при естественных условиях, показывает, что протеины элюируются одним пиком. Высокомолекулярные агрегаты не обнаружены (Фиг.13.). Происходящее в реальном времени определение молекулярной массы способом MALS/RI приводит к результату, что rPhl p 6 d[29, 30] P79L + 6His находится в чисто мономерной форме, в то время как элюированный rPhl p 6 d[P29, 30] P57L + 6His представляет собой смесь мономеров и димеров. rPhl p 6 d[29, 30] P57L P79L + 6His находится преимущественно в форме димера (Фиг.13; Таблица 2).

    Волновые спектры всех протеинов, записанные с помощью электронной спектроскопии поглощения, являются типичными для протеинов, имеющих высокую растворимость. Три протеина являются, таким образом, растворимыми, чистыми и свободными от осадков при естественных условиях и, таким образом, достигаются необходимые предпосылки для точного анализа их способности специфического IgE связывания.

    Доказательство пониженного IgE связывания:

    Результаты исследования тест-полоской с rPhl p 6 d[P29, 30] P57L + 6His, rPhl p 6 d[29, 30] P79L + 6His и rPhl p 6 d[29, 30] P57L P79L + 6His, используя 18 индивидуальных сывороток страдающих от аллергии на пыльцу травы, показаны на Фиг.12.

    Неожиданно, выявлено, что сыворотки страдающих от аллергии, которые имеют обнаруживаемое IgE связывание с rPhl p 6 d[P29, 30], в тест-полоске имеют преимущественно чрезвычайно пониженную IgE реактивность с модификациями rPhl p 6 d[P29, 30] P57L + 6His, rPhl p 6 d[29, 30] P79L + 6His и rPhl p 6 d[29, 30] P57L P79L + 6His (группа «A»: сыворотка 21, 32, 83, 137 и т.д.).

    Таким образом, четко показано, что способность IgE связывания Phl p 6 в дальнейшем может быть снижена множеством комбинированных точечных мутаций пролинов из разных областей петли, что является возможным посредством точечной мутации пролиновых остатков только в одной-единственной области петли.

    T-клеточная реактивность модификаций:

    Модификации стимулируют пролиферацию исследованных линий T-клеток в сопоставимой степени, как и немодифицированный аллерген. Из этого можно сделать вывод о сохранении важных T-клеточных эпитопов.

    Расшифровать результаты анализа на аллергены

    Похожие и рекомендуемые вопросы

    163 ответа

    При периодических контактах с кошкой иногда возникал насморк, а иногда без всякой реакции.
    Такую реакцию списывал на простуду и не придавал значения.
    Сейчас хочу завести кошку и решил сделать анализ.
    Помогите расшифровать пожалуйста.
    Мне контакты с кошкой противопоказаны?
    Бывает ли аллергия к конкретной породе кошки или порода кошки не имеет значения?

    Нет возможности прислать фото, иммуноглобулин Е — 16

    Дочери 5 лет. Больна с 15.12.17. Появился сильный кашель, дистанционные хрипы, свистящее дыхание. Госпитализация с 19.12. -27.12.2020 (лечение бередуал 4кап х 2раза, флемаксин) дз обструктивный бронхит. Кашель сохранялся после выписки. Назначение бередуал 4кап х 2 раза. Ухудш через неделю, приступообразный кашель, свистящее дыхание, снова госпитализация с 03.01.2020-15.01.2020г. (лечение бередуал, антибиотики) (дз бронхит, подозрение на бронхиальную астму.
    Обратились за консультацией к пульмонологу.

    ЛЕЧЕНИЕ: 1. Бередуал по 12 кап. Х2раза в день(утро, вечер) +атровент по 20 кап. Х1-2раза днем 2недели (до исчезновения кашля), разводить с 2,0 мл физиологич раствора 2. Пульмикорт — суспензия по 1000мгкх2раза в день (1-2дня), затем по 500мгк х 2 раза в день (5-7дней), затем по 250мгк х 2 раза в день 2 — 4 недели (утро вечер) можно смешивать с бередуалом. Полоскать горло, рот 3. Сингуляр(монтелар) 4мг по 1 тб х 1 раз на ночь разжевать 4 недели Нос: 1. Маример по 1-2 дозе +2-4 раза в день
    ОБСЛЕДОВАНИЕ:

    1. Бронофонография
    2. Панель педиатричекая
    3. Иммуноглобулин Е
    4. Мочевая кислота сыв. Крови
    5. Цитологическое исследование материала из носа

    Результаты обследования:
    1. Бронография Признак нарушения проходимости бронхов по обструктивному типу (АКРД более 15,9%) с преобладанием на уровне мелких и средних бронхов+ КВД верхних дыхательных путей.
    2. Иммуноглобулин Е равен 16
    3. Мочевая кислота сыв. Крови равна 90
    4. Цитологическое исследование материала из носа — в цитограмме слизь, клетки мерцательного эпителия с дистрофическими изменениями в части клеток. Единичные нитрофильные лейкоциты. Педиатрическую панель прикреплял

    Аллерген 6p

    Автор: Кочиш Людмила Тихоновна,

    Руководитель лаборатории аллергологии

    ООО «Вега» ГК Алкор Био

    Широкая распространенность аллергических заболеваний, охвативших от 20 до 60 % населения промышленно развитых стран, ежегодный повсеместный рост аллергопатологии и усиление тяжести клинического течения различных ее форм превратили аллергию в глобальную медико-социальную проблему. В связи с этим большое значение имеет своевременная достоверная диагностика аллергопатологии, являющаяся основой профилактики и адекватного лечения аллергических заболеваний.

    Диагностика осуществляется комплексно и включает ряд последовательных этапов: сбор аллергологического анамнеза, общее клинико-лабораторное обследование, специфическая клиническая аллергодиагностика in vivo (проведение кожных проб и/или провокационных тестов с аллергенами), иммунологическое и аллергологическое лабораторное обследование in vitro. И если за последние десятилетия сбор анамнеза, методы клинического обследования, методики кожных и провокационных тестов изменились незначительно, то в области лабораторной диагностики аллергии произошли революционные изменения. Стали совершенствоваться методы аллергодиагностики in vitro, прежде всего определение специфических иммуноглобулинов Е (IgE).

    Одной из важнейших диагностических проблем является сопоставление клинической и лабораторной информации о больном аллергией. Данное сравнение выявляет достаточно большой процент несовпадений, который иногда трактуется односторонне: как «правильность» данных клинической специфической диагностики и ошибку при лабораторной специфической диагностике, либо наоборот – «правильность» лабораторных данных и неспецифичность клинических.

    Хотя данная проблема регулярно становится темой для обсуждения, тем не менее этот вопрос возникает неоднократно как у врачей-специалистов, так и у пациентов, и требует пояснения.

    Во-первых, одним из важных методических аспектов является правильное сопоставление результатов кожного и лабораторного тестирования. Что значит правильное? Результаты можно сравнивать, если они получены в отношении идентичных, либо очень сходных аллергенов. Характеристики аллергенов, полученных различными способами, из различного исходного сырья, с различной степенью очистки и т. д., могут в некоторой степени отличаться друг от друга и, соответственно, существенным образом влиять на результаты. Несмотря на определенные достижения в стандартизации аллергенов остается проблема в создании стандартов и унификации аллергенов на основе единых эталонов.

    Также на частоту возникновения ложноотрицательных/ложноположительных результатов безусловно влияет правильность выполнения методики проведения теста, например, нарушение техники введения при кожном тестировании, повышение дозы аллергена, расстояние между аллергенами менее 2,5 см и изменение свойств аллергенов при неправильном хранении или изготовлении, использованных при тестировании, как in vivo, так и in vitro.

    Во-вторых, несовпадение результатов кожных проб и содержания специфических IgE связано с более сложными механизмами формирования кожной реакции. IgE в крови присутствуют в низких концентрациях, достаточно быстро выводятся, и их повышенный уровень обычно наблюдается при текущем контакте с аллергеном. В тканях же (в частности, в коже), напротив, связанные с тучными клетками IgE сохраняются в течение срока жизни клеток — от нескольких дней до нескольких месяцев. С этим фактором также могут быть связаны некоторые случаи расхождения результатов серологических тестов и кожных проб при тестировании реактивности к идентичным аллергенам.

    В-третьих, клинические реакции у больного могут быть обусловлены высоким местным синтезом специфических IgE, при этом их содержание в периферической крови может измениться незначительно. Кроме этого специфические IgE могут быть частично блокированы анти-IgE-антителами класса IgG, образуя иммунные комплексы. Специфические Ig E из этих комплексов становятся недоступны при определении рутинными методами ИФА, что естественно может сопровождаться ростом ложноотрицательных результатов.

    Вышеперечисленные причины безусловно не единственные, влияющие на расхождение результатов клинических и лабораторных тестов.

    Одной из причин расхождения результатов как при тестировании in vivo, так и in vitro может быть в связи с иммунным ответом (до 10%) на минорные аллергены, входящих в сложный состав нативных экстрактов. Cенсибилизация к минорным аллергенам и низкий уровень свободных специфически реагирующих IgE могут обуславливать повышение частоты возникновения ложноотрицательных результатов.

    Причиной ложноположительных результатов при тестировании in vitro могут быть перекрестные реакции между аллергенами различных групп (особенно часто ингаляционными и пищевыми), повышенный уровень общегоIgE, создающий возможность низкоаффинного связывания части общих IgE, имеющих гомологичные эпитопы, сходные с таковыми у специфических к определенному аллергену Ig E.

    Ряд перекрестных реакций между аллергенами также может привести к повышению уровня ложнопозитивных результатов кожного тестирования при клинической диагностике сенсибилизации к некоторым пищевым аллергенам (реакции на пшеницу, рыбу, сою).

    Важную роль, например, при постановке кожных тестов играет возраст пациента, общее состояние и наличие сопутствующих заболеваний, прием антигистаминных препаратов, индивидуальная реактивность кожи, а также изменение иммунореактивности при развитии острых и активации хронических заболеваний. Все эти факторы также могут стать причиной несовпадения с результатами лабораторных тестов.

    Но всегда нужно помнить, что обнаружение аллергенспецифических IgE (к какому-либо аллергену или антигену) выявляет только сенсибилизацию и еще не доказывает, что именно этот аллерген является причиной аллергического заболевания.

    Окончательное заключение и интерпретация лабораторных данных должны быть сделаны только специалистом-аллергологом на основании сопоставления результатов лабораторных исследований с клинической картиной, данными аллергологического анамнеза и дополнительных методов исследований.

    Аллергены пыльцы полыни и пищевые аллергены растительного происхождения

    Автор: Надежда Сейлиева

    ООО «Вега» ГК Алкор Био

    Перекрестные реакции между пыльцой и пищей встречаются как у пациентов с чувствительностью к пыльце трав и деревьев, так и у пациентов с пищевой аллергией. У пациентов с респираторной аллергией кросс-реактивность между пыльцевыми и пищевыми аллергенами может вызывать пищевую аллергию с симптомами различной тяжести при употреблении в пищу сырых фруктов и овощей, в то время как у пациентов с пищевой аллергией наблюдается высокий риск одновременного проявления симптомов аллергического ринита и астмы. Молекулярная диагностика позволяет определять специфические IgE к аллергокомпонентам у полисенсибилизированных пациентов, что крайне важно для выявления истинной аллергии.

    Разнообразие перекрестных реакций пыльца-пища

    Клинические проявления сенсибилизации к перекрестно-реагирующим пыльцевым и пищевым аллергокомпонентам описаны для многих источников растительного происхождения. Перекрестные реакции между пыльцой и пищей описаны для таких аллергенов как береза-яблоко, сельдерей-полынь-специи, полынь-персик, полынь-горчица, амброзия-арбуз-банан, лебеда-дыня.

    В основе реакций сельдерей-полынь-специи лежит респираторная сенсибилизация к полыни и перекрестные реакции к растительной пище на такие продукты как сельдерей, морковь, петрушку, семена тмина, фенхеля, кориандра, аниса, паприку, лук, чеснок, лук-порей, перец.

    Наблюдаются перекрестные реакции полынь-горчица при аллергии к полыни и пищевой аллергии к предствителям семейства Крестоцветные: горчица белая, горчица русская, капуста кочанная, капуста брокколи, цветная капуста. Возможны случаи аллергических реакций на семена подсолнечника, ассоциированные с аллергией к пыльце полыни.

    Описаны клинические случаи тяжелых аллергических реакций на мед и маточное молочко у пациентов с аллергией на полынь и амброзию. Причина таких реакций в том, что продукты пчеловодства могут содержать как пыльцу растений опыляемых насекомыми, так и пыльцу ветроопыляемых растений.

    Компоненты пыльцы полыни

    Сенсибилизация к компоненту Art v 1 пыльцы полыни варьирует от 70 до 95% среди пациентов с аллергией на полынь, что делает этот белок основным аллергеном. Определение иммуноглобулинов класса E к Art v 1 позволяет прогнозировать эффективность аллерго-специфической иммунотерапии и предполагать наличие перекрестных реакций. Гомологичные аллергены представлены в пыльце амброзии и подсолнечника.

    Липид-переносящие белки (LTP, lipid transfer proteins), которые встречаются в пыльце растений и фруктах, вовлечены в перекрестные реакции между этими двумя источниками аллергенов. Пыльцевые LTP описаны как аллергены в 6 различных растениях (амброзии, полыни, японском кедре, оливе, платане и постеннице) и могут вызывать не только респираторные симптомы, но и симптомы пищевой аллергии. Исследования показывают связь между сенсибилизацией к компоненту пыльцы полыни Art v 3 и аллергическими реакциями на фрукты семейства Розоцветные, например персик. Белок Art v 3 является важным диагностическим маркером пищевой аллергии, поскольку аминокислотная последовательность этого аллергокомпонента и липид-переносящего белка персика Pru p 3 совпадает более чем на 40%. Гомологичность этих аллергенов лежит в основе кросс-реактивности полынь-персик.

    С развитием молекулярной диагностики и описанием молекулярных особенностей пищевых аллергенов, появились данные о кросс-реактивности между различными источниками аллергенов. Понимание аллергических реакций, связанных с перекрестной активностью аллергенов крайне необходимо врачу аллергологу. Это позволяет клиницистам обеспечить соответствующий подход к лечению и профилактике аллергии, оценить виды и тяжесть аллергических реакций. Пациенты с аллергией на определенные компоненты пыльцы и пищевых продуктов должны быть тщательно проинформированы о возможных аллергических реакциях. Рекомендации по соблюдению диеты и отказа от продуктов питания, имеющих потенциально кросс-реактивные белки, должны даваться в соответствии с учетом риска перекрестных реакций.

    Компонент-специфическая аллергодиагностика является методом исследования, который дает возможность различать перекрестные реакции, происходящие после приема пищи у пациентов с пищевой аллергией. Использование молекулярной диагностики аллергии улучшает понимание роли клинически значимых кросс-реактивных компонентов в аллергии на пыльцу и продукты питания.

    Аллергокомпоненты пыльцы тимофеевки

    Автор: Надежда Сейлиева

    ООО «Вега» ГК Алкор Био

    Пыльца растений является основной причиной IgE-опосредованных аллергических заболеваний по всему миру. Тимофеевка луговая (Phleum pratense) — одна из самых широко распространенных трав и важнейший источник пыльцевых аллергенов. До 20% пациентов с аллергией по всему миру сенсибилизированы к тимофеевке и родственным видам трав.

    Компоненты пыльцы тимофеевки

    Пыльца тимофеевки состоит из различных аллергенных компонентов (Phl p 1, Phl p 2, Phl p 4, Phl p 5, Phl p 6, Phl p 7, Phl p 11 and Phl p 12), среди которых есть как видоспецифичные, так и перекрестно-реагирующие аллергенные молекулы. Мажорным аллергеном является Phl p 1, который относится к семейству пыльцевых аллергенов с названием «группа I». Эта группа содержит аллергены таких перекрестно-реагирующих растений как райграс, ежа сборная, овсяница, колосок душистый. Количество пациентов с аллергией к тимофеевке и чувствительностью к аллергенам группы I насчитывает от 70 до 100% в различных странах Европы. Из-за широкого распространения и высокой кросс-реактивности аллергенов группы I, наличие IgE к Phl p 1 можно использовать как диагностический маркер аллергии на пыльцу трав.

    Ещё одной большой группой аллергенов пыльцы трав является группа V, на аллергены которой реагируют от 60 до 93% пациентов. К группе V относится аллерген тимофеевки Phl p 5, вызывающий аллергические и астматические проявления у 90% пациентов.

    Phl p 1 и Phl p 5 охарактеризованы как мажорные, видоспецифичные белки, тогда как Phl p 12 и Phl p 7 описаны как минорные, перекрестно-реагирующие.

    Phl p 7 относится к семейству кальций-связывающих белков. Антитела против белков этого семейства обнаруживаются по различным данным у 5 — 10% пациентов с пыльцевой аллергией и отвечают за перекрестные реакции между пыльцой растений. Пациенты со специфическими IgE к белкам этого семейства демонстрируют полисенсибилизацию к пыльце трав и деревьев. Одним из родственных Phl p 7 белков является аллерген пыльцы березы Bet v 4.

    Компонент пыльцы тимофеевки Phl p 12 относится к профилинам. Это крайне консервативные молекулы с большим числом гомологов, отвечающие за кросс-реактивность между различными видами растений. Количество пациентов в Европе с IgE к профилинам колеблется от 8 до 15%. Phl p 12 может давать перекрестные реакции с профилинами пыльцы растений (олива европейская, свинорой пальчатый, постенница, подсолнечник однолетний, береза бородавчатая, финик пальчатый) и растительной пищи (банан, ананас и другие экзотические фрукты).

    Пациенты, имеющие антитела как к основным, так и к кросс-реагирующим аллергокомпонентам тимофеевки, чаще реагируют с проявлениями анафилаксии, крапивницы и отеком Квинке на арахис, томат и фрукты.

    Прогноз эффективности АСИТ

    Определение профиля сенсибилизации к аллергенным молекулам позволяет прогнозировать эффективность аллерген-специфической иммунотерапии (АСИТ). АСИТ будет эффективной в случае наличия специфических IgE к мажорным компонентам (Phl p 1 и Phl p 5) и отсутствии к минорным (Phl p 12 и Phl p 7). В случае наличия специфических IgE как к мажорным, так и к минорным компонентам, эффективность будет средней. АСИТ будет малоэффективна в случае отсутствия IgE к мажорным компонентам Phl p 1 и Phl p 5.

    Часто задаваемые вопросы

    Почему для диагностики аллергических реакций лучше использовать аллерген эпителия животного, а не его шерсти? Что входит в состав аллергена эпителия?

    Аллергия на домашнюю пыль — одна из самых распространенных видов аллергии. Самой частой причиной развития аллергической бронхиальной астмы и круглогодичного ринита является аллергия на домашнюю пыль.

    Домашняя пыль – это естественный продукт человеческого быта. По своему составу она неоднородна и является сложным аллергеном, состоящим из множества различных элементов, таких как микроклещей, которые питаются частицами эпидермиса людей и животных, фрагменты перьев, шерсти и перхоти животных, волосы и эпидермис человека, споры плесневых грибов и бактерии, частицы насекомых и т.д. Экстракты домашней пыли обладают высокой аллергенной активностью.

    Greer Labs., Inc – лаборатория-производитель экстракта аллергена домашней пыли, известном во всем мире под шифром h1. Ее наиболее важными компонентами являются клещи семейства Pyroglyphidae (Dermatophagoides farinae, Dermatophagoides pteronyssinus и т.д.), частицы эпидермиса и шерсти животных, элементы насекомых. Компания «Алкор Био» производит еще три вида пылевых аллергенов, таких как h0, h2, h3. Все они также являются сложными многокомпонентными аллергенами.Но, например, h в отличие отh1 в большей степени содержит элементы плесневых грибов и их споры и в меньшей частицы насекомых. А вот h2 помимо всех основных компонентов в своем составе содержит значительное количество текстильных элементов, в частности, набивок для матрацев, одеял и материалов, использующихся для обивки мебели. Что касается аллергена библиотечной пыли h3, то в его состав входят элементы древесной целлюлозы использующейся для производства бумаги и, соответственно, сами частицы «старой» бумаги, а также элементы плесневых грибов, тараканов и др. насекомых.

    Конечно, любой из предложенных аллергенов домашней пыли может служить хорошим маркером аллергической реакции. Тем не менее, для определения повышенной чувствительности к домашней или библиотечной пыли, можно при назначении врачом руководствоваться этими различиями в составе аллергенов для выявления специфической реакции преимущественно к определенной группе элементов.

    В чем различие между аллергенами домашней пыли? Для чего они предназначены?

    Аллергия к домашним животным — актуальная проблема современной аллергологии и клинической иммунологии. Домашние животные являются одним из сильнейших источников аллергенов. Ученые объясняют увеличение распространенности аллергии к домашним животным тремя основными причинами: значительным ростом семей, имеющих дома животных, тесным контактом человека с сельским/агропромышленным хозяйством и его профессиональной деятельностью. Немаловажное значение имеет также существенный рост численности грызунов повсеместно.

    Аллергены животных включают белки следующего происхождения: шерсть, эпителий, перхоть, слюну, мочу и перья (у птиц).

    Существует огромное заблуждение, что аллергию вызывает исключительно шерсть животных. Но это не совсем так. Сама шерсть животных не обладает значительными аллергенными свойствами, однако выраженная аллергенность связана с прикреплёнными к шерсти белками эпидермиса и слюны.

    Эпителий животных, представляющий собой клетки наружного кожного слоя, является основным аллергеном этого животного и выступает как важный источник большого количества высокоантигенных и аллергенных частиц.

    Чешуйчатое шелушение (отслаивание) эпителия, происходящее либо в норме, либо вследствие различных патологических процессов, это постоянный процесс у всех животных. Для обозначения слущенного эпителия употребляют термин перхоть. Перхоть также является источником высокоактивных аллергенов.

    Значительные количества белков, прежде всего ферменты, содержит слюна животных.

    Что же лучше использовать для диагностики аллергических реакций — эпителий или шерсть животных, рассмотрим на примере аллергенов кошки и собаки.

    Самыми мощными аллергенами являются аллергены кошек. На сегодняшний день описано более 12 аллергенных белков кошек. Так называемый главный аллерген белок Fel d 1 обнаружен в эпителии кожи, а также в секрете сальных желез, но не в слюне кошек. Более 80% больных с аллергией на кошек имеют специфические IgE-антитела именно к этому гликопротеину. Тогда как к сывороточному альбумину Fel d 2, который содержится в сыворотке крови, перхоти и слюне, только около 25% людей чувствительны к данному белку.

    По некоторым данным результатов кожных проб у детей с бронхиальной астмой и аллергическим ринитом по определению сенсибилизации к аллергенным белкам кошки на примере использования аллергенов из шерсти и эпителия производства компании Allergopharma было выявлено, что диагностическая значимость аллергена из эпителия кошки существенно выше (55%), чем у аллергена шерсти (11%).

    Такая же тенденция наблюдается и относительно аллергенов собаки. Многие люди ошибочно полагают, что у них имеет место аллергия на собачью шерсть, однако на самом деле виновником является не шерсть, а мелкие частички омертвевшей кожи или эпителия собаки.

    Основные аллергены собак Can f 1 и Can f 2 выделены из собачьей перхоти и эпителия. Но тем не менее для диагностики аллергии к собаке важно определить три аллергена: перхоть, эпителий и сывороточный альбумин Can f 3.

    Эпителий животных с диагностической целью получают путем соскабливания эпителиального слоя кожи.

    Аллергия может возникать как при прямом контакте с этим аллергеном, так и при косвенном, например, вдыхание аллергенов с частичками пыли. Так же эпителий животных может переноситься с обувью и одеждой человека, поэтому аллергены присутствуют даже в тех местах, в которых никогда не было животных (офисы, больницы, школы, и т.д.). Именно поэтому люди, которые чрезмерно чувствительные к эпителию кошек, собак и т.д., могут страдать от данной аллергии, даже не имея малейшего контакта с ними.

    Аллерген 6p

    Номенклатура аллергенов (WHO/IUIS) разработана (под редакцией J.N.Larsen, H.Lowenstein, 1994-99) Международным подкомитетом по Номенклатуре аллергенов. Имеются определенные требования к представлению каждой новой формы аллергена: необходимо описать источник происхождения сырья; представить характеристику молекулярной массы, аминокислотной последовательности в структуре гликопротеина, которая сравнивается способом гомологии с известными последовательностями в существующих аллергенах, веденными в электронный банк данных; определить показатель изоэлектрической точки, характер углеводных компонентов в структуре аллергена, его IgE-связывающую активность с целью квалификации как главного, так и минорного аллергена.

    С внедрением достижений молекулярной биологии в область идентификации аллергенов были получены новые сведения о структуре разных форм. Параллельно обновлялась и пополнялась новыми сведениями составленная в 1986 году Номенклатура аллергенов. Редакция варианта 1994 года дополнена в 1999 году новым списком включенных в нее аллергенов и их изоформ.

    Новая редакция составлена с учетом рекомбинантных и синтетических форм и их идентификации с применением метода cDNAb. Учитывая возможность получения синтетических и рекомбинантных форм аллергенных пептидов, введены дополнительные буквенные маркеры, соответственно: r — рекомбинантная форма, n — аллерген получен на основе природного источника, s — синтетический аналог аллергена.

    Пыльцевые аллергены

    Несмотря на большое разнообразие видов пыльцевой группы, существуют общие таксономические признаки в пределах семейства и рода. Пыльца при оплодотворении образует пыльцевую трубку, прорастающую в завязь. Все растения имеют типичное строение: корень, ствол, листья, цветки, плоды. Представители Spermatophyta делятся на два отдела: Pinophyta (Голосемянные) и Magnoliophyta (Покрытосемянные). Большинство растений относится к отделу Покрытосемянных.

    Аллергены пыльцы березы являются наиболее активными аллергенами в составе пыльцевого спектра деревьев. Береза относится к семейству Betulaceae (Березовые), роду — Betula L — Береза. Дерево с мощной, но неглубокой корневой системой. Пыльца округло-треугольной или многоугольной формы. Произрастает по всему миру, кроме Африки и Австралии. Пыльца более 10 видов березы описана как аллергенная. Наиболее изучены аллергенные свойства двух видов пыльцы: Betula vulgaris и Betula verrucosa.

    Дерево зацветает ранней весной, выбрасывает в атмосферный воздух значительные количества пыльцы, в составе которой обнаружено до 40 белков, 6 из них обладают аллергенной активностью. Это белки с молекулярной массой 17, 25, 27 — 30 kD. В Номенклатуре аллергенов зарегистрированы аллергены Betula verrucosa: Bet v 1 с М=17 и Bet v 2; профилин М=15 (см. раздел «Профилины»). Имеют общие аллергенные эпитопы с пыльцой ольхи (род Alnus) и орешника (род Corulus) (77, 103).

    Пыльца диких и культурных злаков (сем. Роасеа — Graminae) также относится к наиболее активным Ал. В составе семейства Злаковых значительная аллергенная активность отмечается у пыльцы дикорастущих растений: тимофеевки (Phleum pratense, Dactylis glomerata и др.). Род Phleum L содержит 17 видов. Растет тимофеевка в умеренном поясе Северного полушария. Наиболее актуальна пыльца Phleum pratense L (Тимофеевка луговая). Многолетнее растение.

    Пыльцевое зерно овальной формы или сфероидальное до 35 мк. Пыльца тимофеевки имеет 5 аллергенных пептидов с М=11 — 33 kD, Phi pi = 27 kD, Phi p 2, Phi p 5, M=32 kD, Phl p 6, Phl p 11, профилин.

    В состав семейства Злаковых входит род Dactylis, представителем которого является Dactylis glomerata (Ежа сборная). Многолетнее растение. Пыльцевое зерно диаметром от 28 до 37 мк. Аллергены Dactylis glomerata (Dae g 1, Dae g 5) являются гликопротеинами с М=31 — 32 kD. Dae g 2 — низкомолекулярный белок-профилин.

    Класс аллергии 6

    Аллерген — это антиген, способный вызывать у чувствительных к ним лиц, аллергические реакции. Различают 4 типа аллергических реакций. Первый тип — реакции гиперчувствительности тип I развивается при участии тучных клеток, базофилов и эозинофилов, IgE и повторного попадания в организм аллергена.

    Расшифровка анализов на аллергию

    Иммунологические методы исследования бывают качественными и количественными. Первые позволяют лишь определить наличие аллергии на определенный компонент. Количественные методы позволяют определить уровень антител.

    Как же расшифровать результат исследования?

    1. Класс 0 — количество антител меньше 0,3; аллергия отсутствует.
    2. Класс 1 — очень малое количество антител (от 0,3 до 0,5).возможна бессимптомная аллергия.
    3. Класс 2 — содержание антител в крови от 0,5 до 3 это малое количество антител. Возможно появление симптомов аллергии.
    4. Класс 3 — выраженное количество антител в крови (от 3 до 5). Симптомы аллергии зачастую присутствуют.
    5. Класс 4 — высокое количество антител (от 15 до 50). Имеются симптомы аллергии.
    6. Класс 5 — содержание антител в крови от 50 до 100. Это очень высокое количество антител.
    7. Класс 6 — это чрезвычайно высокое количество антител (свыше 100).

    Полынь обыкновенная (чернобыльник, чернобыль) — многолетнее травянистое растение семейства астровые, распространено по всей территории России. Пыльца полыни обыкновенной является довольно распространённым аллергеном. Возникновение аллергических реакций связано с периодом цветения этого растения, которое приходится на июль-сентябрь. Наиболее частыми проявлениями повышенной чувствительности организма к пыльце являются аллергический конъюнктивит (покраснение глаз, обильное слезотечение), который, чаще всего, сопровождается ринитом (зуд и щекотание в носу, покраснение кожи носа, обильное прозрачное водянистое отделяемое, чихание), бронхиальная астма, реже наблюдаются кожные проявления — крапивница и отёк Квинке.

    При аллергии на полынь горькую часто встречаются перекрестные реакции на семена подсолнечника, подсолнечное масло и продукты, в состав которых оно входит (халва, майонез, горчица), цикорий, дыню, арбуз, зелень и специи (сельдерей, укроп, тмин, петрушка, кари, перец, анис, мускатный орех, корица, имбирь и кориандр), на напитки, приготовленные с использованием полыни (вермуты, бальзамы, абсент).

    Возможны реакции на морковь, чеснок, цитрусовые, бананы, кабачки, баклажаны, латук, топинамбур, мёд.

    Не допускается применение фитопрепаратов полыни, ромашки, календулы, мать-и-мачехи, девясила, череды, тысячелистника, пижмы, одуванчика.

    Антитела класса IgE вызывают реакции немедленного типа, при которых симптомы развиваются непосредственно после контакта с аллергеном (от нескольких минут до 2-х часов).

    При попадании в организм, предрасположенный к аллергии, некоторых белков (чаще это белки пыльцы растений, пищевых продуктов, медикаментов), образуются антитела класса IgE, которые прикрепляются к особым – тучным клеткам, расположенным в слизистых оболочках.

    Эти клетки содержат большое количество биологически активных веществ. При повторном поступлении антигена, происходит его прикрепление к своим, ранее выработанным, антителам, что приводит к разрыву тучной клетки и выбросу наружу множества биологически активных веществ (гистамина, серотонина, простагландинов, тромбоксана и др.). Именно воздействие этих веществ на ткани и органы определяет клиническую картину того или иного аллергического заболевания.

    Анализ не информативен в случае, если прошло длительное время после контакта с аллергеном.Анализ обнаруживает наличие специфических антител IgЕ к аллергенам пыльцы полыни обыкновенной методом иммуноанализа.

    Метод ИХЛА ( иммунохемилюминесцентный анализ ) — один из самых современных методов лабораторной диагностики.

    В основе метода используется иммунологическая реакция, в которой на этапе выявления искомого вещества (специфического антитела), к нему присоединяют люминофоры — вещества, светящиеся в ультрафиолете. Уровень свечения пропорционален количеству выявленных антител и измеряется на специальных приборах — люминометрах.

    Общие свойства аллергенов

    • Белки (не жиры и не углеводы), гликопротеины
    • Молекулярная масса, кДа
    • Устойчивы к температуре, кислотам и перевариванию

    Гиперчувствительность тип I связана со следующими группами аллергенов (Таблица 1)

    Белки
    Чужеродные сыворотки,

    вакцины

    Продукты

    орехи, морепродукты, яйца
    горох, фасоль, молоко

    Пыльца растений

    плевела, амброзии, тимофеевки

    березы

    Продукты насекомых

    пчелиный яд, яд ос, яд муравьёв, яйцеводы тараканов, клещи домашней пыли

    Лекарства:

    пенициллин, сульфонамиды,местные анестетики салицилаты

    Споры плесени
    Волос и перхоть животных

    Основные аллергенные продукты (> 85% аллергии)

    • Дети: молоко, яйца, соя, пшеница, другие в зависимости от географической
    • Взрослые: арахис, орехи, моллюски, рыба

    Пищевые аллергены I класса

    • Первичные сенсибилизаторы (индуцируют синтез специфических IgE, которые связываются с мембранами тучных клеток и базофилов)
    • Сенсибилизация может происходить через желудочно-кишечный тракт
    • По химической природе — это водорастворимые гликопротеины
    • Молекулярные массы их в пределах от 10 до 70 кДа

    Класс 2 пищевых аллергенов (перекрестно-реагирующие):

    • Обычно растительные белки
    • Устойчивы к воздействию высокой температуры
    • Трудно выделяются
    • Плохо стандартизируются, плохо экстрагируются и не доступны для диагностических целей.

    Основные пищевые аллергены 1 класса

    Коровье молоко:
    Казеин, лактоальбумин, лактоглобулин, сывороточный альбумин
    Куриное яйцо:
    Овомукоид яичный альбумин, овотрансферрин
    Арахис:
    Вицилин, конглютин, глицинин
    Чечевица
    Вицилин
    Соя:
    Глицинин, профилин, ингибитор трипсина
    Креветки:
    Тропомиозин
    Рыба:
    Парвальбумины
    Фрукты и другие овощи (яблоки, абрикосы, персики, сливы, кукуруза)
    Белки, транспортирующие липиды

    Пищевые аллергены 2 класса

    (Перекрестно-реагирующие и асоциированые с оральным аллергическим синдром, латекс-фрукт синдромом)

    • Патоген-связанный белок 2 (глюконаза):Латекс, авокадо, банан, каштан, инжир
    • Патоген-связанный белок 3 (хининаза): Латекс, авокадо
    • Патоген-связанный белок 5 (тауматин):Вишня, яблоко, киви
    • Березовый (патоген-связанный белок 10): Яблоко, вишня, абрикос, персик, груша, морковь, сельдерей, петрушка, фундук
    • Березовый (синдром сельдерей-полынь-специя) профилин: Латекс, сельдерей, картофель, груши, арахисовое, соевые

    NB:Патоге-связанный белок — это белок, синтез которого осуществляется растениями в условиях инфекции.

    Рассматривают как защитные белки.

    Таким образом, аллергическая реакция может развиваться не только на аллерген, индуцировавший образование специфических иммуноглобулинов E, но и на аллергены, которые имеют сходные структуры, распознаваемые IgE — перекрестно-реагирующие аллергены. Эти структуры называют антигенные детерминанты. Благодаря общим антигенным детерминантами спектр аллергенов расширяется и включает овощи, фрукты, латекс.

    Аллерголо́гия (от греч. ἄλλος — другой, иной, чужой, ἔργον — воздействие и Λόγος — знание, слово, наука ) — раздел медицины, изучающий аллергические реакции и заболевания, причины их возникновения, механизмы развития и проявления, методы их диагностики, профилактики и лечения.

    Прежде чем приступить к исследованию проблемы «Аллергология», сперва выясним, что включает в себя термин «Аллергия» и какие факторы приводят к возникновению этого столь неприятного недуга.

    Что такое аллергия?

    Аллергия — это необычная повышенная чувствительность к различным веществам, которые у большинства людей не вызывают болезненных реакций.

    Как правило, врагами становятся домашняя пыль, пыльца растений, плесень, шерсть домашних животных, некоторые виды пищевых продуктов и т.д.

    Эти агенты становятся аллергенами и возникает аллергия.

    Последние десятилетия XX века характеризуются значительным ростом частоты аллергических заболеваний. Распространенность аллергии напоминает эпидемию, за последние 20 лет она увеличилась в раза и охватывает в разных странах мира от 10 до 30% населения, причем заболевание часто протекает в тяжелой, необычной форме. Это связано с усилением аллергенной нагрузки на человека.

    Ухудшающаяся экологическая ситуация, нерациональное питание, излишняя лекарственная терапия, бесконтрольное использование антибиотиков, стрессовые нагрузки, малоподвижный образ жизни, изменения в климате.

    Все это повышает подверженность организма человека воздействию аллергенов — даже тех, которые существовали всегда.

    И если XX век был веком сердечно-сосудистых заболеваний, то XXI по прогнозам Всемирной организации здравоохранения станет веком аллергии. Большинство исследователей прогнозируют дальнейший рост частоты аллергических болезней, в том числе и у детей, что диктует поиск новых путей решения проблемы, в частности применения современных аллергологических исследований.

    Необычная реакция на обычное окружение

    Аллергены — чужеродные вещества, которые, поступая в организм, становятся основной причиной аллергических реакций.

    В первые годы жизни ребенка развитие заболевания провоцируют, прежде всего, пищевые аллергены (коровье молоко, яйцо, рыба, злаковые, овощи и фрукты оранжевой или красной окраски).

    У детей старшего возраста и взрослых на первый план выступают другие аллергены:

    • бытовые (домашняя пыль, клещи домашней пыли);
    • пыльцевые (пыльца злаковых и сорных трав, деревьев);
    • аллергены животных (шерсть, частицы кожного покрова, выделения животных);
    • грибковые (плесневые и дрожжевые грибы);
    • бактериальные (в частности, токсины, выделяемые микробом — золотистым стафилококком).

    Домашняя пыль состоит из грибков, растительных волокон, частиц пищи, чешуек и экскрементов насекомых, частиц кожного покрова (эпидермиса) животных и человека.

    Кроме того, в ней поселяются микроклещи, обладающие мощными аллергенными свойствами (даже погибшие). Особенно много пыли с микроклещами скапливается в мягкой мебели, матрацах, подушках, одеялах и коврах.

    Виновником аллергии может стать пыльца следующих растений:

    1. Деревьев и кустарников — береза, ольха, лещина или орешник, дуб, клен, тополь, ясень, вяз и другие.
    2. Злаковых (луговых) трав — тимофеевка, овсяница, мятлик, пырей, костер, рожь, гречиха, пшеница и другие;
    3. Сорных трав — лебеда, амброзия, одуванчик, конопля, крапива, полынь, лютик и другие.

    В соответствии с разными периодами цветения растений наблюдаются три пика обострений аллергических заболеваний.

    Первый — весной (апрель-май) в период цветения деревьев, второй — летом (июнь-июль), вызванный пыльцой злаков, третий — осенью (август-октябрь), обусловленный пыльцой сорных трав.

    Чаще всего аллергию вызывает эпидермис собак и кошек, а также используемые для набивки мебели, подушек и перин, шерсть и перо. Также может возникать реакция на слюну и мочу животных. Все чаще причиной развития аллергических заболеваний в последнее время становятся домашние насекомые (клещи, тараканы, клопы, моль, домашние муравьи).

    Грибы — микроорганизмы обитают как внутри помещений и являются компонентом в домашней пыли, так и во внешней среде.

    В жилых помещениях грибков особенно много в старой мебельной обивке, комнатных увлажнителях воздуха, в ванных комнатах. Во внешней среде грибки распространены повсеместно. Их можно обнаружить в воздухе, почве, пресной и соленой воде.

    Важно знать, что при аллергии на грибы — микроорганизмы, больной может не переносить некоторые продукты, в процессе приготовления которых используются методы ферментирования или брожения: кисломолочные продукты, изделия из дрожжевого теста, кислая капуста, копченые мясо или рыба, квас, пиво, газированные напитки и др.

    Некоторые вирусы и бактерии способствуют развитию аллергических заболеваний и осложняют их течение.

    Механизм аллергической реакции

    Механизмов развития аллергической реакции несколько, но самый распространенный из них — немедленного типа.

    Это аллергическая реакция, обусловленная иммуноглобулином Е. Иммуноглобулины — это особые белки, присутствующие в крови и секрете, а механизм их действия в случае аллергии таков: в организме у человека, страдающего аллергией или предрасположенного к ней, накапливаются антитела, которые, соединяясь с антигеном извне (аллергологи называют его «аллерген»), вызывают настоящую иммунную реакцию «антиген-антитело». От момента воздействия до развития реакции проходит всего несколько секунд.

    Аллергия имеет много лиц. Ее проявления весьма разнообразны. Это могут быть воспаления слизистой оболочки носа (ринит) и глаз (конъюнктивит); отек лица, шеи, локальные отеки (отек Квинке); бронхоспазм с исходом в развитие астмы; кожные высыпания и зуд (крапивница) или дерматит (нейродермит).

    Аллергия бывает двух видов: сезонная и круглогодичная, что, в свою очередь, связано с характером аллергена.

    Круглогодичную реакцию вызывают аллергены, постоянно присутствующие в нашей среде обитания: домашняя пыль, плесневые грибки, живущие в ванных комнатах, кухнях и коридорах старых домов, лекарства, бытовая химия. Сезонная аллергия связана с временами года и с жизнью растений, и это помогает достаточно точно определить дату обострения.

    Диагноз: аллергия

    Очень важно диагностировать аллергию до наступления кризиса, поэтому при первых же подозрениях лучше прийти к аллергологу. Поводом для беспокойства должны послужить следующие симптомы:

    • длительный насморк;
    • зуд в носу и приступы чихания;
    • зуд век, слезотечение;
    • покраснение глаз;
    • кожные высыпания и зуд;
    • отеки;
    • затрудненное дыхание.

    Необходимо знать, что именно вызывает аллергию.

    Для этого сегодня существует широкий спектр методов.

    1. Кожные скарификационные пробы

    Традиционным методом диагностики аллергии является метод постановки аллергологических проб. Кожные пробы ставят на внутренней поверхности предплечий. Стерильным скарификатором делают царапину и наносят каплю диагностического аллергена. Через 20 минут можно оценить результаты. Если на месте нанесения аллергена возникает припухлость или покраснение, то проба считается положительной. За время одного исследования возможна оценка проб.

    К абсолютным противопоказаниям к данному исследованию относятся: острый инфекционный процесс; аллергия или другое хроническое заболевание в стадии обострения; прием антигистаминных и гормональных препаратов.

    Также особенностью проб с пыльцевыми аллергенами является возможность их проведения только вне сезона цветения трав (октябрь-март).

    К относительным противопоказаниям относится возраст ребенка. Обычно данное исследование проводится у детей после 3 лет, так как у маленьких детей высокая реактивность кожи и высока вероятность ложноположительных результатов.

    2. Определение общего и специфических иммуноглобулинов E

    Повышение общего уровня IgE может свидетельствовать о наличии аллергических заболеваний, а также о других патологических состояниях. Данный метод исследования используется как скрининг-тест для подтверждения аллергического характера заболевания.

    Для диагностики «виновного аллергена» определяются специфические IgE, вступающие в реакции с конкретными аллергенами. О наличии аллергии судят по уровню IgE, которые вырабатываются в ответ на аллергены, а не по клинической реакции (проявлению симптомов аллергической реакции).

    В случае если сыворотка крови пациента дает реакцию с каким-то аллергеном, значит в ней содержатся IgE-антитела, отвечающие за развитие аллергических реакций.

    Подготовка к исследованию: за 3 дня до взятия крови необходимо исключить физические и эмоциональные нагрузки.

    Данный тест не имеет абсолютных противопоказаний, т.е. его можно проводить даже в периоде обострения заболевания и детям до 3 лет.

    Как показывает практика детям до 6 месяцев данное исследование не оправдано, т.к. в этом возрасте еще слабый иммунный ответ организма и уровень IgE низкий.

    Повышение уровня IgE может говорить о наличие аллергических заболеваний и некоторых других патологических состояниях.

    3. Метод иммуноблотинга

    В настоящее время наиболее широкое распространение получил метод иммуноблотинга.Иммуноблоттинг (иммуноблот) — высокоспецифичный и высокочувствительный референтный метод выявления антител к отдельным антигенам (аллергенам), основанный на постановке иммуноферментного анализа на нитроцеллюлозных мембранах, на которые в виде отдельных полос нанесены специфические белки.

    Если имеются антитела против определенных аллергенов — появляется темная линия в соответствующем локусе. Уникальность иммуноблота заключается в его высокой информативности и достоверности получаемых результатов.

    Данный метод исследования не имеет противопоказаний.

    Чаще всего применяются 4 стандартные панели, каждая из которых содержит 20 аллергенов:

    Панель № 1 (смешанная панель) — клещ домашней пыли I (Dermatophagoides pteronyssinus), клещ домашней пыли II (Dermatophagoides farinae), пыльца ольхи, пыльца берёзы, пыльца лещины (орешника), пыльца смеси трав, пыльца ржи, пыльца полыни, пыльца подорожника, эпителий и шерсть кошки, собаки, лошади, грибок Alternaria alternata, белок яйца, молоко, арахис, лесной орех — фундук, морковь, пшеничная мука, соя.

    Панель № 2 (ингаляционная панель) — клещ домашней пыли I (Dermatophagoides pteronyssinus), клещ домашней пыли II (Dermatophagoides farinae), пыльца ольхи, пыльца берёзы, пыльца лещины (орешника), пыльца дуба, пыльца смеси трав, пыльца ржи, пыльца полыни, пыльца подорожника, эпителий и шерсть кошки, лошади, собаки, морской свинки, хомяка, кролика, грибок Penicillinum notatum, грибок Cladosporium herbarum, грибок Aspergillus fumigatus, грибок Alternaria alternata.

    Панель № 3 (пищевая панель) — лесной орех, арахис, грецкий орех, миндаль, молоко, белок яйца, желток яйца, казеин (белок, составляющий основную массу творога), картофель, сельдерей, морковь, помидор, треска, краб, апельсин, яблоко, пшеничная мука, ржаная мука, кунжут, соя.

    Панель № 4 (педиатрическая панель) — клещ домашней пыли I (Dermatophagoides pteronyssinus), клещ домашней пыли II (Dermatophagoides farinae), пыльца берёзы, пыльца смеси трав, эпителий и шерсть кошки, собаки, грибок Alternaria alternata, молоко, альфа-лактоальбумин, бета-лактоглобулин, казеин (белок, составляющий основную массу творога), белок яйца, желток яйца, говяжий сывороточный альбумин, соя, морковь, картофель, пшеничная мука, лесной орех — фундук, арахис.

    Помните о том, что перед проведением обследования желательно проконсультироваться с врачом для выбора оптимальной панели.

    Исследование проводится натощак, забор крови осуществляется из вены.

    Интерпретация результатов: в норме специфические IgE содержатся в сыворотке в очень малых количествах, как правило, ниже 0,35 kU/L. У сенсибилизированных (чувствительных) пациентов отмечается повышение этого уровня до 0,35 kU/L. Данный метод определяет количество IgE антител в диапазоне от 0,35 до kU/L и результат выражается количественно. Поскольку не существует прямой зависимости между значениями специфических IgE и тяжестью клинических симптомов, полученные результаты интерпретируются врачом только в контексте клинических данных больных.

    +-➤ Расшифровка анализа на аллергеныClick to collapse

    +-➤ Анализ крови на аллергеныClick to collapse

    Для диагностики аллергии и определения списка аллергенов необходимо сдать анализ крови или провести кожные аллергопробы.

    Для проведения аллерготеста MACT используются панели, на которых расположены аллергены.

    Аллергопанель заполняется сывороткой пациента. Если у пациента имеется аллергия к конкретному аллергену, в образце крови определяются специфические антитела. Для визуализации антител лаборант добавляет специальный фермент. Фермент, взаимодействуя с антителом, вызывает люминесценцию, которую можно зафиксировать на специальной аппаратуре.

    Широкий спектр аллергенов на этих панелях позволяет выявить не только скрытые формы аллергии, но также и перекрестные реакции между разными группами аллергенов.

    Метод радиоаллергосорбентного теста (RAST)

    Перед исследованием лаборант производит забор венозной крови у пациента.

    В отобранный образец крови помещают вероятный аллерген. Если пациент имеет непереносимость исследуемого аллергена, значит, специфические антитела прикрепятся к аллергену. Затем лаборант добавляет радиоактивные антитела против IgE. Образовавшийся радиоактивный комплекс антиген-антитело считывается на специальном оборудовании.

    Выявление аллергии к определенным аллергенам

    Как уже было сказано для обнаружения аллергии необходимо исследовать антитела в крови к определенным аллергенам.

    Нередко человек даже не может предположить, чем вызвана аллергическая реакция.

    Определить причину возникновения аллергии можно используя аллергопанели:

    Референсные значения — норма
    (Полынь обыкновенная (аллерген w6), IgE антитела, кровь)

    Информация, касающаяся референсных значений показателей, а также сам состав входящих в анализ показателей может несколько отличаться в зависимости от лаборатории!

    Единицы измерения: классы, соответствующие концентрации специфических IgE в сыворотке крови.

    Альтернативные единицы измерения: kU/L

    Концентрация специфического IgE, kU/L Интерпретация результата

    Повышение значений (положительный результат)

    Высокий титр специфических антител свидетельствует о недавнем контакте с данным аллергеном и выраженной аллергической реакции.

    Профилактика аллергии

    • Применяйте солевой раствор для носа

    Помимо увлажнения воздуха, дополнительной защитой от аллергенов станет регулярное орошение носовой полости солевым раствором. Сегодня они свободно продаются в аптеке. Применение такого раствора поможет задержать аллергены, а также снимет воспалительный процесс.

    • Чаще проводите уборку

    Вам стоит чаще пылесосить, а также регулярно чистить и менять фильтры в пылесосе.

    Большое количество аллергенов содержится в коврах. Идеальным вариантом для вас будет, если вы избавитесь от ковров, или хотя бы ограничитесь коврами с коротким ворсом.

    А от привычки развешивать ковры на стенах нужно избавляться.

    • Боритесь с тараканами

    Остерегайтесь тараканов!Они разносят аллергены по дому, которые потом попадают в дыхательные пути.

    Многочисленные исследования подтверждают, что тараканы провоцируют обострение таких заболеваний, как астма и аллергия. Если в вашем доме имеются тараканы, то вы должны предпринять все меры для их уничтожения.

    РЕКОМЕНДОВАННОЕ К ПРОСМОТРУ ВИДЕО:

    Основные аллергены

    Прекращение взаимодействия с причинным аллергеном – основное условие профилактики и устранения реакций на него человеческого организма.

    Аллергены подразделяются на два основных типа: пищевые и ингаляционные. Также атопические заболевания могут развиваться из-за применения лекарственных средств, секрета насекомых и продуктов питания.

    Самые известные аллергены:

    2 Пыльца растений

    4 Шерсть, слущенные частички эпидермиса, шерсть животных

    5 Иные ингаляционные аллергены

    7 Лекарственные аллергены

    8 Поговорим подробно о каждой группе

    Аллергены домашней пыли

    «Отравляющим» компонентом выступают не микроскопические частички пыли, как думают некоторые. В действительности человеческий организм на «клещей», а точнее не их фекалии, которые в большой концентрации оседают на мягкой мебели, матрасах, подушках и ковровых покрытиях. Необходимо помнить, что пылевой клещ «любит» влажность и тепло. Поэтому, чтобы свести к минимуму возможность спровоцировать приступ аллергической реакции, необходимо постоянно строго соблюдать чистоту и контролировать температуру и влажность помещения.

    Пыльцевые аллергены

    Аллергия на пыльцу может спровоцировать у человека сенную лихорадку (поллиноз), внешние проявления которой могут выглядеть, как выделение слизи из носа и глаз, и в худшем случае – приступ удушья. Самой опасной для аллергиков является пыльца ветроопыляемых растений, которая в большом количестве находится в воздухе в летнее время.

    К сожалению, растений, способных вызвать аллергическую реакцию, в России существует множество. К ним относятся лиственные деревья и злаковые сорняки. Большая часть их видов начинают цвести уже в апреле.

    Грибковые аллергены

    Данный вид аллергенов также является очень популярным. Острая реакция на микроскопические грибы, выступающих здесь в роли основного аллергена, отмечается приблизительно у астматиков. Споры грибов также в немалом количестве содержатся преимущественно в жаркое время года. Аллергенные грибы подразделяются на два вида: внедомашних и домашних.

    Первые живут и активно размножаются в почве и на гнилой древесине. Вторые – обитают внутри непроветриваемых помещений, подвалов, а также в месте хранилища продуктов. Аллергические реакция на споры микроскопических грибов в большей степени активизируются при большой влажности.

    Аллергены животных

    В роли главного аллергена здесь выступает перхоть, моча, слюна, шерсть или перья животных. Их избыточное количество содержится в пыли квартиры, где обитают домашние питомцы. Самым сильным «раздражителем» все-такие является перхоть животных, образующаяся в следствие отшелушивания эпидермиса животных.

    Аллергическая реакция на слюну обычно проявляется кожными высыпаниями. Например, крапивницей. Шерсть с остатками молекул эпидермиса животного обычно вызывает обильные слизистые выделения (насморк, кашель).

    Другие ингаляционные аллергены

    Они встречаются гораздо реже. К ним относятся аллергены насекомых. Например, тараканов и моли. А качестве ингаляционных аллергенов могут также выступать: лен, хлопок, промышленная резина, касторовые бобы или личинки насекомых.

    Пищевые аллергены

    Пищевая аллергия – это специфическая реакция организма на продукты питания. Зачастую ее путают с пищевой непереносимостью, характеризующийся недостатком ферментов. Отметим сразу, что понятия эти – абсолютно разные. Аллергия на продукты питания обычно проявляются на коже или провоцирует незначительные поражения органов пищеварения.

    При сильной пищевой аллергии также возможен сильный приступ астмы или даже развитие анафилактического шока, которые может закончиться очень плачевно. Людям, страдающим пищевой аллергией рекомендовано отказаться от «вредоносных» продуктов на длительный срок. При строгом соблюдении данного правила в течение долго времени «реакция» на аллерген может полностью исчезнуть. К сожалению, на такие продукты, как молоко, соя, рыба, ракообразные, пшеница аллергия сохраняется на протяжение всей жизни.

    При проявлении симптомов аллергии данного вида рекомендуется придерживаться стандартной гипоаллергенной диеты и ведение подробного дневника питания.

    Лекарственные аллергены

    Активные компоненты лекарств могу является причиной аллергических реакций человеческого организма. От этого недуга страдает приблизительно 5% взрослых и 10% детей. К типичным проявлениям аллергической реакции на лекарственные препараты относят: кожные высыпание или зуд, отек Квинке, анафилактический шок, гипотермию, лихорадку, медикаментозные гепатит, нефрит.

    Аллерген 6p

    Аллергены — это, в основном, белковые вещества с молекулярной массой от 5 до 100 кДа. Также к аллергенами относятся гаптены («неполные аллергены»), которые являются низкомолекулярными соединениями и вызывают сенсибилизацию после поступления в организм и связывания с белками организма. Аллергены по своей сути являются антигенами, поскольку вызывают развитие иммунного ответа.

    Аллергены обозначаются с использованием трех букв латинского названия рода (растения, животного, насекомого), буквы названия вида и цифрой, отражающей исторический порядок обнаружения либо иную информацию. Так, аллерген клеща домашней пыли Dermatophagoides pteronyssimus обозначается как Der p 1. Аллерген арахиса Arachis hypogaea — Ara h 1, Ara h2, Ara h 3. Молекулярные варианты аллергенов сопровождаются дополнительными цифрами, например Amb a 1.01.

    По клинической значимости выделяют главный (мажорный), средний и минорный аллергены. Мажорный аллерген — это молекула, способная связывать примерно 50% антител IgE в сыворотке пациента, сенсибилизированного данным аллергеном. Минорный аллерген связывает до 10% IgE, а средний находится в интервале между мажорным и минорным.

    Классифицируют аллергены на ингаляционные, пищевые, инсектные (аллергены насекомых) и лекарственные, кроме того существуют профессиональные и другие аллергены.

    Пути внедрения в организм могут быть: ингаляционный (чаще всего), пероральный, парентеральный.

    Ингаляционные аллергены

    Ингаляционные, или аэроаллергены, подразделяют на находящиеся в помещении пребывания людей («indoor») и внешние («outdoor»). к первым относятся клещ домашней пыли, перхоть животных, насекомые, плесневые грибы, к внешним — пыльца, споры папоротника, грибковые аллергены. Клинически внешние аллергены представляют собой наибольший риск для возникновения сезонного аллергического ринита, а внутренние — для бронхиальной астмы и круглогодичного (персистирующего) аллергического ринита.

    Аэроаллергены переносятся потоками воздуха (ветром) благодаря малому размеру (20-60 мкм для пыльцы деревьев и трав, 3-30 мкм для грибковых спор, 1-10 мкм для клещей. Мелкие частицы способны проникать глубоко в отделы дыхательного тракта, вплоть до альвеол.

    Пыльцевой мониторинг позволяет выявлять концентрации аллергенов в различных регионах в разное время года и даже суток. В сухую ветреную погоду концентрация аллергенов в воздухе значительно увеличивается. В помещении сухость воздуха способствует уменьшению количества внутренних аллергенов (клеща и плесени).

    Бытовые аллергены

    Домашняя пыль

    Домашняя пыль — наиболее частая причина развития аллергических реакций. В состав домашней пыли входят перхоть и выделения животных, насекомые, грибки, продукты жизнедеятельности клещей домашней пыли, синтетические аллергены из покрытий и мебели.

    Название (вид) Вид Область высокой концентрации Источник
    Клещи домашней пыли Dermatophagoides pteronyssinus (Der p 1), Dermatophagoides farinae (Der f 1) Под кроватью, матрасы, подушки, ковры, мягкие игрушки и др. Тела и фекалии
    Кошка, собака Felis domesticus (Fel d 1), Canis familiaris (Can f 1) То же Сальные и слюнные железы
    Тараканы Blatella germanica (Bla g 1), Periplaneta Americana (Per a 1) Кухня Слюна, фекалии, выделения, тела насекомых
    Грибы Alternaria alternata (Alt a 1), Cladosporium herbarium (Cla h 1), Aspergillus fumigatus (Asp f 1) Различные Споры

    Клещи домашней пыли

    Клещи домашней пыли («dust mites») составляют значительную часть массы домашней пыли и принадлежат к семейству Pyroglyphidae, подкласс Acari, класс Arachnid, тип Arthropods. Это членистоногие размером около 0,3 мм и незаметные для невооруженного глаза.

    Наиболее важные в качестве аллергенов виды клещей — это Dermaophagoides pteronyssinus (Der p), Dermatophagoides farinae (Der f), Euroglyphus maynei (Eur m), Lepidoglyphus destructor (Lep d) и Blomia tropicalis (Blo t).

    Название Аллерген Молекулярная масса, кДа Описание
    Acarus siro Aca s 13 14 Кислотосвязывающий белок
    Dermatophagoides microceras Der m 1 25 Цистеиновая протеаза
    Dermatophagoides pteronyssinus Der p 1 25 Цистеиновая протеаза, гомолог Der f 1, Eur m 1, папаина, катепсинов B и H
    Der p 2 14 Холестеринсвязывающий белок
    Der p 3 28/30 Трипсин, гомолог Der p 6, Der f 3, Der f 6 и других химотрипсинов и протеаз
    Der p 4 60 Амилаза
    Der p 5 14
    Der p 6 25 Химотрипсин, гомолог Der p 3, Der f 3, Der f 6 и других химотрипсинов и протеаз
    Der p 7 22-28 88%-я гомология и перекрестная реактивность с Der f 7
    Der p 8 26 Глутатионтрансфераза
    Der p 9 28 Сериновая протеаза
    Der p 10 36 Тропомиозин
    Der p 14 Аполипофорин
    Dermatophagoides farinae Der f 1 25 Цистеиновая протеаза, гомолог Der p 1, Eur m 1, папаина, катепсинов B и H
    Der f 2 14 Холестеринсвязывающий белок
    Der f 3 34 Трипсин, гомолог Der p 3, Der p 6, Der f 6 и других химотрипсинов и протеаз
    Der f 6 30 Химотрипсин, гомолог Der p 3, Der p 6, Der f 3 и других химотрипсинов и протеаз
    Der f 7 22 88%-я гомология и перекрестная реактивность с Der p 7
    Der f 9
    Der f 10 39 Тропомиозин
    Der f 11 98 Парамиозин
    Der f 14 190 Аполипофорин
    Der f 15 98 Хитиназа
    Der f 16 53 Гелсолин/вилин
    Der f 17 53 Кальцийсвязывающий белок
    Der f 18w 60 Хитиназа
    Euroglyphus maynei Eur m 1 24 Цистеиновая протеаза, гомолог Der p 1, Der f 1, папаина, катепсинов B и H
    Eur m 2
    Eur m 14 177 Аполипофорин
    Blomia tropicalis Blo t 1 11-13 Цистеиновая протеаза
    Blo t 3 24
    Blo t 4 56
    Blo t 5 14 Гомология с другими аллергенам клещей
    Blo t 6 25 Химотрипсин
    Blo t 10 33 Тропомиозин
    Blo t 11 110 Парамиозин
    Blo t 12 16 Хитиназа, гомолог Der f 15
    Blo t 13 Кислотосвязывающий белок
    Blo t 19 7,2 Гомолог антимикробного пепсина
    Blomia tropicalis Lep d 1 14-16 Гомология с другими аллергенами клещей
    Lep d 2 Тропомиозин

    Главными источниками клещевых аллергенов являются как тело клеща, так и фекальные шарики (10-35 мкм), которые могут при уборке комнаты подниматься в воздух.

    Dermatophagoides и Euroglyphus питаются перхотью человека, которая скапливается обычно на матрасах, на полу под кроватью, в подушках, коврах, мягких игрушках, мягкой мебели. Количество клещей максимально при температуре выше 20С и высокой влажности (80% относительной влажности). Если влажность снижается до менее 50%, то клещи высыхают и умирают.

    Гомологичные клещевые аллергены обладают перекрестной реактивностью.

    Разновидности складских клещей: Glyciphagus domesticus, Glyciphagus destructor, Tyrophagus putrecentiae, Dermatophagoides microceras, Euroglyphus maynei, Acarus siro. Они присутствуют в хранилизах зерна и муки.

    Инсектные аэроаллергены: тараканы

    Источниками аэроаллергенов являются различные насекомые, но наиболее важными являются тараканы. Среди всех разновидностей пять имеют значение как источники внутренних аллергенов, из который наиболее часто встречаются Blatella germanica (немецкие) и Periplaneta americana (американские). Аллергены обнаруживаются в слюне, фекальном материале, выделениях и мертвых телах насекомых.

    Пыльцевые аллергены

    Пыльцевые аллергены вызывают у предрасположенных пациентов сезонные проявления — поллиноз (аллергический ринит, конъюктивит, астму). Вестной цветут деревья, в июне и июле — луговые (злаковые) травы, с июля по октябрь — сорные травы. В зависимости от места проживания время пыления различается.

    Размер пыльцы растений может быть от 5 до 200 мкм в диаметре, в среднем составляя 20-60 мкм. Пыльца может переноситься с ветром на большие расстояния. Пациенты, расположенные ближе к источнику пыления, страдают от более тяжелых симптомов поллиноза.

    Пыльца деревьев

    Между пыльцой различных деревьев существует перекрестная реактивность, особенно, если растения относятся к одному семейству или классу. Концентрация пыльцы деревьев повышается весной и начало пыления зависит от количества теплых дней, предшествующих поллинации.

    Аллергены фруктов и овощей обладают перекрестной реактивностью с аллергенами пыльцы березы Bet v 1 и Bet v 2 (профилин березы).

    Пыльца трав

    В отличие от пыльцы деревьев среди аллергенов трав имеется выраженная перекрестная реактивность. Описано большое количество перекрестных реакций между пыльцевыми аллергенами и другими видами аллергенов.

    Аллергены латекса

    Натуральный каучуковый латекс — сложный биологический материал, содержащий более 200 полипептидов. К настоящему времени выделено 17 аллергенов латекса с молекулярной массой от 2 до 100 кДа, некоторые из них (Hev b 1, Hev b 2, Hev b 5, Hev b 12) являются важными перекрестно реагирующими паналлергенами — белками, отвечающими за обширную перекрестную реактивность между различными аллергенами за счет структурной гомологии с аллергенами фруктов, пыльцы и грибов.

    В зависимости от пути поступления (ингаляционно или при контакте) аллергены латекса могут вызвать респираторные или кожно-слизистые проявления. 30-50% имеющих аллергию на латекс также гиперчувствительны к некоторым растительным пищевым продуктам, осоенно — свежим фруктам. Эту связь называют синдромом «латекс-фрукт».

    Аллергенные белки латекса участвуют в обширных перекрестных реакциях с некоторыми белками авокадо, картофеля, банана, помидора, каштана и киви. У части пациентов отмечаются положительные кожные пробы на томат, обнаруживаются специфические IgE-антитела к латексу, а также к картофелю, томату, перцу, авокадо.

    Растительный защитный белок (хитиназа I класса), перекрестно реагирующий с гевейном (Hev b 6.02), является главным IgE-связывающим аллергеном у больных с аллергией на латекс и, вероятно, это самый важный аллерген, ответственный за перекрестные реакции между киви и латексом. Но и другие паналлергены, например, пататин (Hev b 7.01/7.02) и Hev b 5 могут также принимать участие в этих реакциях. Hev b 5 — белок латекса, ответственный за анафилаксию у больных с сенсибилизацией к латексу. Он гомологичен аллергенам киви и картофеля.

    Примерно 45% с аллергией к латексу также имеют гиперчувствительность к аллергенам банана.

    Аллергены животных

    Сенсибилизация аллергенами животных чаще всего связана с домашними (кошки, собаки) и лабораторными (грызуны, кролики) животными. Выявление реакции осуществляется путем изучения анамнеза и аллергологического тестирования (прик-тесты, ИФА). Наиболее сильные аллергены содержаться в перхоти и секретах животных.

    Основные источники аллергенов кошки: сальные железы, слюна, перианальные железы, шерсть. При кастрации самцов уровень продукции главных аллергенов может снизиться.
    Главные аллергены кошки Felis domesticus (Fel d 1 и Fel d 2, диаметр 1-10 мкм) могут оставаться в помещении длительное время (недели и месяцы) после удаления животного. Также аллергены могут пассивно переноситься на одежде в места, где животных нет.
    Главный аллерген собаки (Can f 1) присутствует в больших количествах в домашней пыли, матрасах, кровати, а также в публичных местах, где животные могут отсутствовать. Основные источники аллергенов – шерсть, слюна, моча, перхоть.
    Аллергены собак и кошек обладают кросс-реактивностью с аллергенами других животных.
    Источниками аллергенов грызунов (хомяков, кроликов, мышей, крыс) являются шерсть, моча, слюна . Профессиональную сенсибилизацию отмечают у лабораторного персонала.
    Описана частая сенсибилизация к аллергенам лошади. Источниками аллергенов являются грива, моча, пот. Перекрестные реакции наблюдаются с аллергенами кошки, собаки, парнокопытных.
    Сенсибилизация к аллергену коровы (Bos d) снижается из-за автоматизации процессов доения и разведения.

    Грибковые аллергены

    Грибы являются как наружными, так и внутренними источниками аллергенов. Они могут размножаться как в лесных почвах, сене и зерне, так и в ванных комнатах, подвалах, библиотеках, в цветочных горшках (особенно при частом поливе). Строение грибковых спор отличается от строения пыльцы, поскольку спора является живой клеткой, способной к росту и секреции аллергенов в живом организме.
    Выделяют две группы грибов – плесневые (“mold”), размножающиеся спорами и фрагментацией гиф, и дрожжевые (“yeasts”) – грибы, состоящие из отдельных клеток, размножающиеся почкованием и делением. Для практического использования удобна экологическая классификация грибковых организмов, объединяющая их в группы по одинаковым условиям, в которых они начинают спороносить.
    Грибы проникают в организм человека ингаляционно, энтерально, и могут вызывать контактную реакцию. Споры грибов очень малы (3-30 мкм) и могут проникать глубоко в респираторный тракт. Они могут вызывать развитие ринита, синусита, астмы, аллергического бронхолегочного аспергиллеза, гиперсенситивного пневмонита. Кожные грибковые инфекции могут вызываться A. fumigatus, C. albicans, M. Furfur, некоторыми видами Trichophyton.
    В атмосфере определяется более ста видов плесневых грибов. Условия обитания грибов – умеренная влажность, умеренная закисленность и освещенность, температура – 18-32 градуса.
    Обострение при грибковой аллергии чаще возникает весной и осенью (в средней полосе России это время наиболее активного спорообразования).
    Наиболее важные аэроаллергены – Cladosporium, Alternaria, Aspergillus и Penicillum. Несмотря на то, что смеси мягких сыров содержат плесени, принадлежащие к роду Penicillum, пациенты с аллергией на споры плесени обычно не реагируют на плесневый сыр.
    Alternaria alternata принадлежит к Ascomycetes и является одним из самых важных аллергенных грибов. Выявлена связь между сенсибилизацией к Alternaria и угрожающей жизни астмой. Споры Alternaria обнаруживаются в воздухе круглогодично, с пиками в августе и осенние месяцы. Главный аллерген – Alt a 1, с неизвестной биологической функцией. Отмечается перекрестная реактивность с Stemphylum и Curvularia.
    Aspergillus fumigatus относится к Deuteromycetes, его часто называют “складской гриб», поскольку он часто обнаруживается в хранилищах зерна, фруктов, овощей. У некоторых пациентов с астмой этот гриб является главным фактором, вызывающим аллергический бронхолегочный аспергиллез. Заболевание сопровождается выработкой IgE и IgG, эозинофилией и бронхоэктазами, в некоторых случаях развивается грибковый синусит. Asp f 1 в комплексе с Asp f 3 и Asp f 5 обладает 97%-ной чувствительностью для диагностики сенсибилизации к Aspergillus.
    Cladosporium herbarum принадлежит к Deuteromycetes и обнаруживается преимущественно вне помещений, в холодном климате. Выделено три главных аллергена: Cla h 1, Cla h 2 и Cla h 4. Содержит энолазу – главный аллерген большинства грибов.
    Penucillum citrinum принадлежит к Deuteromycetes и является важным внутренним аллергеном, как и Aspergillus. Ряд аллергенов обладает перекрестной реактивностью с Aspergillus. У 16-26% пациентов с астмой обнаруживаются антитела IgE к антигенам Penicillum.
    Дрожжевые грибы могут находиться как в пище, так и в воздухе, наиболее распространенные – Candida albicans, Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces minor и Pityrosporum. IgE-сенсибилизация к дрожжевым грибкам обнаруживается, в частности, у пациентов с атопическим дерматитом. Продукты, содержащие Saccharomyces cerevisiae – хлеб, красное вино, игристые вина, белое вино, пиво, они вызывают реакции у сенсибилизированных пациентов и аллергены этих грибков обладают кросс-реактивностью с Candida.
    В воздухе могут содержаться и споры других грибов, Basidiomycetes и Ascomycetes, вызывающие аллергические реакции.
    Инсектные аллергены, содержащиеся в яде и слюне насекомых
    Яд часто попадает в организм при ужалении перепончатокрылых (Hymenoptera): пчел, ос, шмелей, шершней. Иногда реакции развиваются на укусы комаров, мошек, слепней, оводов.

    Пищевые аллергены

    Пищевыми аллергенами называют гликопротеины с молекулярной массой 10-70 кДа, реже – полипептиды и гаптены. Выделяют растительные и животные аллергены.
    Пищевые аллергены хорошо растворимы в воде, некоторые термостабильны и устойчивы к воздействию протеолитических ферментов. Аллергенность пищевых белков обусловлена множеством эпитопов, а также зависит от пространственной конфигурации молекулы. Особенностью пищевых аллергенов является способность изменять антигенные свойства в ходе кулинарной обработки. Иногда аллергенность при этом теряется, а иногда, наоборот, приобретается.
    Пищевая аллергия редка у пациентов с аллергическим ринитом в отсутствие других симптомов. С другой стороны, аллергический ринит может быть симптомом пищевой аллергии при системной реакции на продукт. Многие пищевые продукты содержат перекрестно реагирующие аллергены, например, с аллергенами из пыльцы растений.

    Пищевые аллергены животного происхождения

    Пищевую аллергию у взрослых обычно вызывают рыба, моллюски и ракообразные, в то время как аллергию к коровьему молоку и яйцу чаще отмечают у детей.

    Коровье молоко

    Аллергия к коровьему молоку (Bos Tauris) обычно развивается у детей первого года жизни, как правило, после перевода ребенка на искусственное вскармливание молочными смесями.

    Аллергены содержатся в молоке, сыре и других молоынх продуктах, а также в хлебе, печенье, блинах, супах, обработанном мясе, таком как ветчина, колбаса и т.п. Молоко и продукты его переработки широко используются в кондитреской промышленности. Так, казеин усиливает задержание влаги в конфетах и леденцах, гидролизованные молочные белки служат взбитой основой зефира, в запеченных продуктах молоко улучшает цвет корки, прочность печенья и пирожных.

    У детей грудного возраста пищевая аллергия при употреблении молока обычно проявляется со стороны ЖКТ (диарея, рвота и боль в животе) и кожи (зуд, высыпания). У грудных детей может происходить кровотечение из прямой кишки. Более 50% детей с аллергией на коровье молоко страдают от ринита.

    Коровье молоко состоит из двух фракций: казеина и сыворотки. Казеин включает четыре основных белка: αs1-, αs2-, β- и κ-казеин. Он видонеспецифичен, термостабилен, устойчив к кислому pH и при оксилении выпадает в осадок (много в сырах, твороге). Фракция казеина представляет 80% всех молочных белков. Казеин присутстсвует в молоке как коллоидный комплекс с фосфатом кальция. Казеинаты применяются как наполнители и специи в немолочных продуктах.

    Даже достаточно длительное кипячение лишь уменьшает, но не устраняет аллергенность казеина.

    Главные аллергенные белки, содержащиеся в сыворотке – это β-лактоглобулин, α-лактальбумин и бычий сывороточный альбумин.

    α-лактальбумин – один из наиболее важных аллергенов молоко коровы, он видоспецифичен, термолабилен и теряет аллергенные свойства при нагреве до 56 градусов. Обладает кросс-реактивностью с белком яйца (овальбумином). β-лактоглобулин также рассматривается как главный аллерген молока. Он термостабилен и требует нагревания до 130 градусов.

    Яйцо куриное

    Аллергия на яйцо – одна из самых частых причин пищевой аллергии в грудном возрасте и у детей раннего возраста. Яйцо употребляется при приготовлении множества пищевых продуктов.

    Рыба и морепродукты являются профессиональными аллергенами для людей, участвующих в обработке морепродуктов.

    Белки рыб относятся к наиболее распространенным и сильным аллергенам. Среди всех больных аллергией распространенность аллергии к рыбе – от 10 до 40%. Морская рыба более аллергенна, чем речная. Широко распространена сенсибилизация к аллергену трески, при этом системные реакции могут возникнуть при ингаляции пара при приготовлении трески, при контакте с кожей. Аллергены рыбы могут сохраняться в многократно используемом для жарки растительном масле. Наибольшей сенсибилизирующей активностью обладают протеины саркоплазмы, особенно белок M.

    Аллерген Gad с 1 (аллерген M) трески (Gadus morhua) принадлежит к парвальбуминам, термостабилен, сохраняется в запахах и парах. Главный аллерген лосося – Sal s 1 массой 12 кДа. Некоторые аллергены лосося и трески обладают перекрестной реактивностью. При этом аллергены лосося менее устойчивы при термообработке. Чаще всего больные аллергией на рыбу сенсибилизированы только к определенным видам (например, к треске).

    Моллюски

    Большая часть пищевых аллергий, связанных с употреблением моллюсков, вызвана кальмаром. Кальмар (Todarodes pacificus) вследствие кулинарной обработки может приобретать новые аллергены.

    Сенсибилизация к аллергенам осьминога часто встречается в Южной Европе.

    Ракообразные

    Тяжелые аллергические реакции, вплоть до анафилактических, вызываются при употреблени в пищу краба (Cancer pagurus). Лангуст (Panulirus) имеет главный аллерген, сходный по структуре с аллергенами креветки, рака и краба. Реакции гиперчувствительности могут возникать при употреблении лобстеров (Homarus gammarus).

    Креветка (Pandalus borealis) традиционно рассматривается как высокоаллергенный продукт. Реакция в большинстве случаев связана с тропомиозином (Pen a 1, Pen i 1, Met e 1).

    Несмотря на высокое содержание бека, мясо вызывает аллергию значительно реже, чем яйца, молоко и морепродукты.

    Чаще мясо является гистаминолибератором, и его употребление приводит к рзвитию псевдоаллергических реакций за счет воздействия на тучные клетки. Антигенный состав различных видов мяса отличается, поэтому при аллергии на говядину могут не развиваться симптомы после употребления баранины, свинины, куриного мяса. Важно, что могут возникать перекрестные аллергические реакции на сывороточные препараты, полученные из животных (например, противодифтерийная сыворотка при аллергии к конине; ферментные препараты из поджелудочной железы крупного рогатого скота и т.п.).

    Аллергия на говядину (Bos spp.) не очень распространена и обычно не связана с аллергией на коровье молоко. Говядина содержит бычий сывороточный альбумин (BSA) и γ-глобулин, часть аллергенов, содержащихся в коровьей перхоти и волосах.

    Распространенность аллергии на мясо свиньи (Sus spp.) при пищевой аллергии составляет 1,5-20% случаев. Аллерген свинины является гомологом сывороточного альбумина и аллергена эпителия кошки, что приводит к появлению перекрестных реакций (синдром «свинина-кошка»). Возможно возникновение профессионального дерматита при контакте со свининой.

    Баранина (Ovis spp.) является слабым аллергеном. Аллергия относительно редко встречается и к мясу кролика (Oryctolagus spp.), но может быть серьезной проблемой для детей, так как свидетельствует об общей непереносимости белков мяса.

    При сенсибилизации к белкам яйца могут выявляться антитела и к мясу курицы (Gallus domesticus). У мяса курица может наблюдаться перекрестная реактивность с мясом индейки.

    Пищевые аллергены растительного происхождения

    Важную роль играют следующие группы растительных аллергенов:

    • — PR-белки (pathogen-related) – патогенетические белки, «белки защиты»;
    • — белки хранения;
    • — 2S-альбумины;
    • — тиоловые протеазы;
    • — ингибиторы протеаз.

    PR-белки синтезируются в растениях при стрессовых для них ситуациях (неблагоприятные условия, инфекция, повреждения). В пыльце и плодах содержание этих белков особенно высоко. Выделяют 14 групп этих белков, из которых 8 обладают аллергенной активностью. PR-2-белки – ответственны за развитие синдрома «латекс-фрукт», как и PR-3 – эндохитиназы, служащие для защиты растения от грибков и насекомых. PR-10 – гомологи аллергена березы Bet v 1.

    Важные аллергены – LTP-белки, участвующие в развитии орального аллергического синдрома. Это Pru p 3 персика, Pru ar 3 абрикоса, Mal d 3 яблока. Они часто определяют перекрестную аллергию к фруктам.

    Белки хранения злаковых и бобовых обладают выраженными аллергенными свойствами. Основные белки бобовых – глобулины: легумин и вицилин гороха, и подобные белки, являющиеся 11S- и 7S-глобулинами. Эти глобулины также содержатся в семенах масличных культур, в орехах.

    2S-альбумины содержатся в семянах, обладают выраженными аллергенными свойствами, обнаруживаются в горчице, рапсе, касторовых бобах, грецком орехе, кешью, бразильском орехе, кунжуте, арахисе.

    Тиоловые протеазы – папаин из папайи, фицин из винной ягоды, бромелаин из ананаса, актинидин из киви, соевый белок из сои.

    Ингибиторы протеаз (амилаз, трипсина, химотрипсина) содержатся в соевых бобах, в злаках, в листьях растений (томат, люцерна, картофель).

    Аллергены моркови (Daucus carota) перекрестно реагируют с пыльцевыми паналлергенами, например Dau c 1 является кросс-аллергеном с Bet v 1 березы, гомологи которого также содержатся в яблоке, сельдерее, моркови, орехах и сое.

    Много аллергенов содержит картофель (Solanum tuberosum). Sol t 1 – главный аллерген картофеля. Картофельная мука и крахмал обычно не содержат аллергены.

    Таблица перекрестной реактивности аллергенов Скрыть таблицу

    ОФС.1.7.1.0001.15 Аллергены

    Содержимое (Table of Contents)

    ОФС.1.7.1.0001.15 Аллергены

    ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

    Вводится взамен ГФ Х, ст.43

    Настоящая общая фармакопейная статья распространяется на препараты аллергенов природного происхождения.

    КЛАССИФИКАЦИЯ

    Аллергены представляют собой водно-солевые экстракты белково-полисахаридных комплексов, выделенных из широкого круга веществ – источников природных аллергенов, которые являются веществами, вызывающими или провоцирующими аллергические заболевания. Препараты аллергенов предназначаются для in vivo диагностики и лечения аллергических заболеваний, опосредованных иммунологическими реакциями повышенной чувствительности (IgE-зависимые) к аллергенам различной природы.

    Аллергены классифицируют на неинфекционные (пыльцевые, бытовые, эпидермальные, пищевые, инсектные) и инфекционные (грибковые, бактериальные). Аллергены, обработанные химическими веществами (например, формальдегидом или цианатом калия), называют аллергоидами.

    Аллергены и аллергоиды производят в виде монопрепаратов, содержащих экстракт из сырья одного вида, а также в виде микст-препаратов, содержащих экстракты из нескольких видов сырья.

    В качестве консерванта в состав препаратов аллергенов могут входить фенол (2,0 – 4,0 мг/мл) или формальдегид (не более 0,14 мг/мл).

    Препараты на основе аллергенов могут выпускаться в виде парентеральных, пероральных, сублингвальных, ингаляционных и офтальмологических лекарственных препаратов или препаратов для проведения кожных проб.

    Для диагностических целей используют немодифицированные экстракты аллергенов или экстракты в 50 % растворе глицерина для кожных проб. Для провокационных аллергологических тестов аллергены могут быть приготовлены разведением готовых форм аллергенов до минимальных концентраций непосредственно перед введением интраназальным, конъюнктивальным или эндобронхиальным способом.

    Для иммунотерапии применяют инъекционные формы немодифицированных и модифицированных экстрактов аллергенов (аллергоиды), аллергены, адсорбированные на различных носителях (алюминия гидроксид, кальция фосфат или L-тирозин), экстракты аллергенов в 50 % растворе глицерина для приема внутрь или в виде таблеток для сублингвального использования.

    ПРОИЗВОДСТВО

    Технология производства должна обеспечивать безопасность, эффективность и стабильность аллергенов.

    Характеристика исходных материалов

    Исходными материалами для приготовления препаратов на основе аллергенов являются пыльца растений, микрофлора жилых и служебных помещений, эпителий животных, пищевые продукты, плесневые грибы, бактерии. Условия сбора, предварительная обработка, условия хранения исходных материалов должны обеспечивать постоянный качественный и количественный состав и стандартность в максимально возможной степени.

    Пыльцевые аллергены

    Сырьем для изготовления пыльцевых аллергенов и аллергоидов является растительная пыльца.

    Сбор пыльцы проводят в период цветения. Созревание пыльцы обеспечивают в определенных условиях (поллинариях), сушат до остаточной влажности (3 ± 0,5) %. Пыльцу каждого вида растений характеризуют по морфологическим признакам (диаметр пыльцевого зерна, структура экзимы, форма пыльцевого зерна). Допускается не более 10 % примесей других видов пыльцы (определяется микроскопическим способом).

    Для стандартизации сырья при изготовлении одной серии препарата рекомендуется использование пыльцы, собранной в течение 2 – 3 календарных лет, в связи с различными климатическими и гидрологическими условиями созревания пыльцы.

    Содержание тяжелых металлов в сульфатной золе из 1 г пыльцы (точная навеска) – не более 0, 001 %. Зараженность растительной пыльцы амбарными вредителями не должна превышать I степени чистоты.

    Аллергены жилых и служебных помещений (бытовые аллергены)

    Сырье, используемое для изготовления бытовых аллергенов (домашняя пыль, библиотечная пыль, перо подушек), собирают отдельно для каждого наименования аллергена. Домашнюю пыль собирают путем сбора бытовым пылесосом с верхних поверхностей предметов, мебели, постели (запрещается собирать пыль с пола и ковров) в квартирах больных, имеющих установленную аллергологической службой аллергию к данному сырью. Домашняя пыль, перо подушек, библиотечная пыль не должны содержать посторонние включения. Сбор и обработка перечисленного сырья проводится в соответствии с требованиями указанными в фармакопейной статье или в нормативной документации на конкретные препараты.

    Клещи домашней пыли Dermatophagoides рteronyssinus, D.farinae культивируют в течение 3 – 4 мес в среде (домашняя пыль) при определенных заданных условиях температуры, влажности, ежедневной аэрации, контроле видовой принадлежности. Клещи должны быть отделены от среды культивирования и гомогенизированы для последующего выполнения операционных процессов.

    Вид клеща удостоверяется паспортом подлинности (отсутствием клещей другого вида), в котором указывают вид сырья, сроки культивирования, результаты контроля сырья.

    Сырьем для изготовления аллергена из дафний должны служить пресноводные рачки дафнии магна (Daphnia magna).

    Эпидермальные аллергены

    Сырьем для изготовления эпидермальных аллергенов является шерсть животных (кошки, собаки, овцы, кролика, морской свинки), перхоть лошади, волосы человека. У животных, используемых для приготовления эпидермального сырья, должны быть ветеринарные паспорта, подтверждающие их здоровье, отсутствие инфекционных агентов и гельминтов. Сырье не должно содержать посторонних включений и шерсти других животных.

    Пищевые аллергены

    Сырье для их изготовления (говядина, мясо курицы или утки, рыба, крупы, овощи, фрукты) получают из хозяйств, в которых не зарегистрированы вирусные, бактериальные и другие заболевания.

    Инсектные аллергены

    Различные виды насекомых (пчелы, осы, комары и т.п.), из которых экстрагируется аллерген, должны быть идентифицированы и описаны. Методы сбора насекомых и экстракция яда должны гарантировать надлежащее качество исходных материалов.

    Грибковые аллергены

    Представляют собой водно-солевые растворы гликопротеидов, полученные из высушенного и обезжиренного мицелия соответствующего вида грибов с последующим экстрагированием солевым раствором и спиртовым фракционированием. Содержание биологически активных примесей, таких как микотоксины, в плесневых грибах должно быть минимизировано.

    Бактериальные аллергены

    Представляют собой экстракт смеси инактивированных фенолом клеток бактерий и продуктов их метаболизма. Штаммы бактерий должны быть зарегистрированы и быть типичными по морфологическим, культуральным и биохимическим свойствам.

    Получение аллергенного экстракта

    Аллергены получают путем экстракции исходного сырья с использованием методов, направленных на сохранение биологических свойств аллергенных компонентов. Сырье сушат, обезжиривают и выделяют белково-полисахаридные комплексы с помощью водно-солевой экстракции с последующим диализом, концентрированием, центрифугированием и стерилизующей фильтрацией, обеспечивающей получение продукта, свободного от контаминации, которая может повлиять на его безопасность и качество.

    Контрольные испытания аллергенных экстрактов

    Аллергенный экстракт должен удовлетворять требованиям по физическим свойствам, стерильности, значению рН, общего белка/белкового азота, специфической/аллергенной активности, аномальной токсичности. Если в готовой форме проведение испытания по показателю «Аномальная токсичность» невозможно (например, препараты с 40–60 % содержанием глицерина, алюминия гидроксида или кальция фосфата), то этому испытанию подвергается экстракт.

    Стандартизация

    По содержанию единиц белкового азота (protein nitrogen unit – PNU) в 1мл препарата. 1 PNU – международная единица, принятая для выражения концентрации белкового азота в аллергенах, равная 0,00001 мг белкового азота. В основе стандартизации по системе PNU лежит положение о том, что большинство аллергенов имеют белковую природу. Однако содержание белкового азота в полной мере не отражает биологическую активность аллергенов, т.к. не все экстрагируемые белки обладают аллергенными свойствами. В системе стандартизации по PNU специфическую активность препаратов необходимо подтверждать кожными пробами.

    По биологической активности, которую определяют относительно активности стандартного образца (СО) аллергена. Его биологическую активность устанавливают тестами in vivo. СО может использоваться при контроле серий промежуточных аллергенных продуктов (аллергенный экстракт) и при контроле серии конечных препаратов аллергенов.

    Характеристика СО

    СО представляет собой одну из серий аллергенного экстракта или готового препарата аллергена, которая должна быть охарактеризована по следующим показателям: содержанию общего белка, белковому профилю, аллергенным компонентам, специфической активности. Диапазон характеристик СО зависит от природы исходного материала, сведений о его аллергенных компонентах и наличия используемых реактивов.

    Общий белок определяют любым подходящим методом, изложенным в ОФС «Определение белка».

    Белковый профиль должен быть охарактеризован одним из следующих методов – иммуноэлектрофорезом в полиакриламидном геле с натрием додецилсульфатом (SDS-PAGE электрофорез), иммуноэлектрофорезом, капиллярным электрофорезом, хроматографией, масс-спектрометрией.

    Подлинность. Выявление специфических аллергенных компонентов осуществляется методами вестерн-блот или иммуноферментного анализа (ИФА) (ОФС «Определение подлинности препаратов аллергенов») с использованием специфических IgE-содержащих сывороток крови от лиц, сенсибилизированных к исследуемому аллергену.

    Отдельные аллергенные компоненты (главные аллергены) могут быть обнаружены с помощью моноклональных антител.

    Количественное определение главных аллергенов проводят с помощью ИФА с использованием соответствующих одноименных стандартов.

    Биологическую активность первой серии СО определяют методами in vivo (например, кожные пробы) у 15 – 20 лиц, сенсибилизированных к исследуемому аллергену. Результаты исследования выражают в условных единицах биологической активности. Биологическую активность последующих серий СО оценивают конкурентным иммуноанализом (ИФА, РАСТ, иммуноблоттинг и т.п.), основанном на ингибировании связывающей способности специфических антител иммуноглобулина Е.

    Получение готового продукта

    Аллергенный экстракт разводят до конечных концентраций белка, установленных для каждого наименования готового препарата, разливают и укупоривают, обеспечивая стерильность и сохранение активности и физико-химических свойств препарата на протяжении срока годности.

    ИСПЫТАНИЯ

    Диапазон показателей, по которым проводят испытания, зависит от формы выпуска препаратов (лиофилизаты, растворы, суспензии, таблетки).

    Описание

    Приводится описание соответствующей лекарственной формы препарата. Испытание проводят визуально.

    Подлинность

    В аллергенах и аллергоидах должны быть обнаружены специфические аллергенные компоненты. Испытания проводят по ОФС «Определение подлинности препаратов аллергенов» или любым подходящим методом, изложенным в нормативной документации.

    Прозрачность

    Прозрачность (для растворов). Прозрачный или слегка опалесцирующий раствор. Определение проводят в соответствии с ОФС «Прозрачность и степень мутности жидкостей» с использованием эталонов сравнения, как указано в нормативной документации.

    рН

    рН (для растворов и суспензий). Допустимое значение pH для аллергенов – от 6,5 до 7,3, аллергоидов – от 7,3 до 7,7, если в нормативной документации не указаны другие требования. Испытание проводят потенциометрическим методом в соответствии с ОФС «Ионометрия».

    Механические включения

    Механические включения (для растворов и суспензий). Видимые механические включения должны соответствовать требованиям ОФС «Видимые механические включения в лекарственных формах для парентерального применения и глазных лекарственных формах».

    Размер частиц

    Размер частиц (для суспензий). Нормативные требования указывают в фармакопейной статье и нормативной документации. Испытания проводят в соответствии ОФС «Инъекционные лекарственные формы. Лекарственные средства для парентерального применения».

    Распадаемость

    Распадаемость (для таблеток). Не более 2 мин. Определение проводят в соответствии с ОФС «Распадаемость таблеток и капсул».

    Время седиментационной устойчивости

    Время седиментационной устойчивости (для суспензий). Нормативные требования указываются в фармакопейной статье и нормативной документации. Испытания проводят в соответствии ОФС «Инъекционные лекарственные формы. Лекарственные средства для парентерального применения».

    Извлекаемый объем

    Извлекаемый объем (для растворов, суспензий). Должен быть не менее номинального. Определение проводят по ОФС «Извлекаемый объем лекарственных форм для парентерального применения».

    Вода

    Вода (для лиофилизатов и таблеток). Не более 5 %. Испытания проводят в соответствии с ОФС «Определение воды» методом титрования по К. Фишеру или гравиметрическим методом в соответствии с ОФС «Определение потери в массе при высушивании».

    Общий белок

    Общий белок (для препаратов, стандартизированных в единицах биологической активности). Нормативные требования указываются в нормативной документации. Испытания проводят в соответствии ОФС «Определение белка».

    Белковый азот

    Белковый азот (для препаратов, стандартизированных в единицах PNU) – от 3000 до 12500 PNU. Определение проводят в соответствии с ОФС «Определение белка» методом Къельдаля или колориметрическим методом с реактивом Несслера.

    Стерильность

    Стерильность (для инъекционных форм). Лекарственные препараты должны быть стерильными. Определение проводят в соответствии с ОФС «Стерильность» методами прямого посева или мембранной фильтрации.

    Микробиологическая чистота

    Микробиологическая чистота (для пероральных и сублингвальных форм) – категория 3А. Определение проводят в соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

    Аномальная токсичность

    Аномальная токсичность (растворы для инъекций). Лекарственные препараты должны быть не токсичны. Определение проводят в соответствии с ОФС «Аномальная токсичность». Указывают тест-дозы, способ введения и время наблюдения за животными, их вид и массу.

    Специфическая/аллергенная активность

    Специфическая активность, остаточная аллергенность (тесты in vivo). Определение проводят в соответствии с ОФС «Определение специфической активности препаратов аллергенов методом кожных проб».

    Аллергенная активность (тесты in vitro) – 50 – 150 % от указанного количества. Аллергенную активность препаратов определяют с использованием СО методами конкурентного иммуноанализа с использованием специфических сывороток, содержащих IgE-антитела.

    Фенол

    Формальдегид

    Глицерин

    (для пероральных и сублингвальных препаратов) – от 40 до 60 %. Определение проводят методом, изложенным в фармакопейной статье или нормативной документации.

    Алюминий

    (для суспензий). От 80 до 120 % от указанного количества. Определение проводят в соответствии с ОФС «Определение ионов алюминия в сорбированных иммунобиологических лекарственных препаратах».

    Кальций

    (для суспензий) От 80 до 120 % от указанного количества. Определение проводят любым подходящим методом, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации.

    РАСТВОРИТЕЛИ И РЕАГЕНТЫ, ВХОДЯЩИЕ В КОМПЛЕКТ С ПРЕПАРАТОМ

    Препараты аллергенов могут выпускаться в комплекте с растворителями и реагентами. Растворители и реагенты подвергаются испытаниям, аналогичным испытаниям для основного препарата (аллергена/аллергоида).

    Тест-контрольная жидкость (для бытовых, пищевых, пыльцевых, эпидермальных аллергенов) – фосфатно-солевой буферный раствор, рН от 6,75 до 7,25.

    Назначение – отрицательный контроль при постановке кожных проб.

    Разводящая жидкость (для бытовых аллергенов). Фосфатно-солевой буферный раствор, рН от 6,75 до 7,25.

    Назначение – для разведения бытовых аллергенов при проведении специфической иммунотерапии.

    Разводящая жидкость (для пыльцевых аллергенов). Фосфатно-солевой буферный раствор, рН от 6,8 до 7,2.

    Назначение – для разведения пыльцевых аллергенов при проведении специфической иммунотерапии.

    Разводящая жидкость (для аллергоидов) – 0,1 М фосфатный буферный раствор, рН от 7,3 до 7,7.

    Назначение – разведение аллергоидов при проведении специфической иммунотерапии.

    Упаковка и маркировка.

    В соответствии с требованиямиОФС «Иммунобиологические лекарственные препараты». Необходимо указание «Отпускается по рецепту».

    Транспортирование и хранение.

    В защищенном от света месте при температуре от 2 до 8 ºС. Жидкие лекарственные препараты не допускается замораживать.

    Классификация и клинические проявления пищевой аллергии

    *Импакт фактор за 2020 г. по данным РИНЦ

    Журнал входит в Перечень рецензируемых научных изданий ВАК.

    Читайте в новом номере

    НИИ педиатрии и детской хирургии Минздрава РФ, Москова

    П ервые указания на необычные реакции на пищу принадлежат еще Гиппократу, который описал проявления повышенной чувствительности на молоко. Анафилактические реакции на яйцо и рыбу были описаны в XVI и XVII веках (Sampson H.A., 1999). На протяжении столетий реакциям на пищевые продукты уделяли внимание врачи и их пациенты. В XX веке произошел качественный перелом как в составе пищевого рациона, потребляемого «обычным» человеком, так и в попытках объяснить возможные механизмы «необычных» реакций на продукты. Многообразие клинических проявлений, отсутствие общепринятой классификации, возможности «безграничной интерпретации неизвестных» механизмов реакций на пищевые продукты сегодня зачастую приводят к сомнительному диагнозу и неоправданным ограничениям рациона питания.

    Классификации побочных реакций на пищевые продукты основаны на выделении иммунных и неиммунных форм пищевой непереносимости. Пищевой аллергией называют вызванную приемом пищевого продукта побочную реакцию, в основе которой лежат иммунные механизмы. При этом выделяют IgE– и не–IgE–медиируемые реакции.

    Кожные проявления пищевой аллергии наиболее часто представлены:

    • IgE–медиируемыми реакциями, которые манифестируют крапивницей/отеком Квинке,
    • не–IgE–медиируемыми реакциями – герпетиформный дерматит,
    • сочетанием IgE– и не–IgE–медиируемых реакций – атопический дерматит.

    Крапивница – заболевание, проявляющееся преходящими высыпаниями, морфологическим элементом которых является волдырь – четко ограниченный участок отека дермы. Цвет волдырей варьирует от светло–розового до ярко красного, размеры от 1–2 мм до нескольких сантиметров.

    Отек Квинке – четко локализованный участок отека дермы и подкожной клетчатки. Высыпания обычно исчезают в течение 24 часов, и после них не остается следов.

    Среди продуктов наиболее частая причина острой крапивницы – молоко, рыба, крабы, бобовые, орехи и яйцо. Различные фрукты и овощи могут также являться причиной IgE–опосредованной крапивницы. Необходимо подчеркнуть, что хроническая крапивница у детей редко связана с пищевой гиперчувствительностью (Sampson H.A., 1999).

    Известен ряд продуктов, которые при контакте с неповрежденной кожей вызывают крапивницу. Типичным примером могут служить яйца, рыба. Достаточно часто встречается контактная гиперчувствительность к коровьему молоку, в частности, к белкам – лактоглобулину и казеину, проявляющаяся в виде рецидивирующей крапивницы. Дифференциальный диагноз кожных реакций, индуцированных локальным контактом или системной абсорбцией, особенно сложен у детей раннего возраста, которые контактируют с пищевыми продуктами различными участками тела.

    Герпетиформный дерматит – заболевание, манифестирующее зудящей сыпью, обычно распространяемой на экстензорной поверхности и ягодицах. Высыпания могут быть представлены уртикариями, везикулами, папулами. В области ладоней и подошв возможно развитие геморрагических элементов. Герпетиформный дерматит связан с целиакией и гиперчувствительностью к глютену. В 75–90% случаев выявляют целиакию, в остальных глютензависимая гиперчувствительность является субклинической и проявляется при массивном воздействии глютена. Наиболее часто встречается у детей в возрасте 2–7 лет. Необходимо подчеркнуть, что при использовании диеты с элиминацией глютена положительная динамика со стороны кожных покровов возникает в более поздние сроки по сравнению с нормализацией функционирования кишечника.

    Значение пищевой аллергии в формировании атопического дерматита у детей показано в ряде исследований (Балаболкин И.И., Гребенюк В.Н., 1999). Так, пищевая аллергия играет ключевую роль у 1/3–1/2 детей с атопическим дерматитом (Sampson H.A., McCaskill C.C., 1985). Повторяющееся воздействие пищевых аллергенов ведет к хроническому воспалению, зуду, вызывающему расчесы с последующим формированием лихенифицирующего повреждения кожи (Sampson H.A., 1995).

    Характерным для значительной части детей с пищевой аллергией является ее транзиторность. В частности, к 3–х летнему возрасту полностью выздоравливают от 70 до 90% детей, ранее имевших проявления пищевой аллергии в виде атопического дерматита (Host A., 1997). Вместе с тем данная тенденция выявляется не для всех продуктов. Так, к 5–летнему возрасту у детей с выявленной в 1 год пищевой аллергией в 10% случаев сохранялась гиперчувствительность к коровьему молоку, в 20% – к яйцу и в 60% – к арахису. Необходимо подчеркнуть, что несмотря на наличие поливалентной сенсибилизации у большинства детей, клинически значимой обычно является сенсибилизация к 1 или 2 пищевым аллергенам (Bernhisel–Broadbent J., 1989).

    В работе Guillet G., Guillet M.H. (1992) было продемонстрировано наличие прямой корреляции между тяжестью атопического дерматита и вероятностью пищевой аллергии. В проспективном исследовании доказан положительный эффект элиминации яйцесодержащих продуктов у детей раннего возраста, имеющих сенсибилизацию к релевантному аллергену (Lever R. и соавт., 1998).

    Поражения желудочно–кишечного тракта занимают второе место среди патологии, вызываемой пищевыми аллергенами. Клинические проявления IgE–опосредованных заболеваний желудочно–кишечного тракта обычно встречаются в комплексе с поражением кожи и манифестируют в виде различных симптомов (рвота, тошнота, боль, диарея). К не–IgE–медиируемым реакциям на пищевые продукты относятся энтероколит, индуцированный пищевыми белками; проктит/проктоколит, индуцированный пищевыми белками у детей раннего возраста; энтеропатия, индуцированная пищевыми белками, и целиакия. В патогенезе эозинофильного эзофагита и эозинофильного гастроэнтерита предполагается роль IgE– и не–IgE–медиируемых реакций на пищевые продукты.

    Оральным аллергическим синдромом могут страдать как дети, так и взрослые. Симптомы ограничены поражением орофарингеальной области и проявляются зудом, чувством дискомфорта, ангиоотеком губ, языка, неба. Симптомы, как правило, возникают в течение минут после контакта с соответствующими продуктами и обычно недлительны.

    Существует мнение, что оральный аллергический синдром распространен в большей степени у взрослых. Вместе с тем, вероятно, варьирует не столько частота наличия орального аллергического синдрома, сколько спектр гиперчувствительности к пищевым аллергенам. Так, у детей заболевание преимущественно ассоциировано с аллергенами яйца, рыбы, орехов, бобовых. У взрослых наряду с перечисленными продуктами значение приобретают овощи и фрукты. Важным аспектом данной нозологии у детей старшего возраста является наличие перекрестной IgE–опосредованной гиперчувствительности к пыльце и пищевым продуктам (яблокам, лесным орехам, сельдерею, моркови с березой; вишне, абрикосам, сливе, персику с бразильским орехом) (Sicherer S., 2001; Fritsch R., 1998).

    Реакции немедленной гиперчувствительности в желудочно–кишечном тракте могут проявляться в любом возрасте и развиваются в течение минут – двух часов после употребления продукта. Временные рамки являются ключевыми для диагностики IgE–опосредованной гиперчувствительности. К наиболее выраженным симптомам относятся рвота, тошнота, колики, абдоминальные боли, диарея. Изолированные IgE–опосредованные симптомы поражения желудочно–кишечного тракта редки. Характерным представляется сочетание дерматологических и желудочно–кишечных симптомов, связанных с атопической гиперчувствительностью.

    Рвота – наиболее яркий симптом, но она может быть менее выражена при длительной экспозиции аллергена. В этом случае ведущими симптомами являются потеря аппетита, снижение веса, абдоминальные боли (Walker– Smith J.A.) Необходимо подчеркнуть, что значение количества перорально вводимого аллергена в развитии различных дискинетических нарушений желудочно–кишечного тракта доказано в эксперименте Frick O. (1995).

    Среди проявлений IgE–опосредованной гиперчувствительности необходимо отметить синдром, заключающийся в сочетании запора и сенсибилизации к коровьему молоку (Iacono G., 1996). При тщательной оценке выявляется, что большинство больных с этим заболеванием имеют проктит. Кроме того, согласно нашим наблюдениям, причиной запора при пищевой аллергии может быть анальный зуд. В этом случае ребенок сдерживает дефекацию и запор приобретает привычный характер. Запоры уменьшаются после отмены молочных продуктов.

    Симптомы энтероколита, индуцированного пищевыми белками, включают рвоту и профузную диарею с развитием тяжелого шокоподобного состояния (Dupont C., 2000). Большинство больных с энтероколитом, индуцированным пищевыми белками, – это дети первых дней – месяцев жизни. Так, Powell G. (1976) описал 9 детей с персистирующей рвотой и диареей в возрасте 4–27 дней, находящихся на вскармливании смесями на основе коровьего молока. Переход на диету на основе соевых смесей характеризовался транзиторным улучшением с возвратом симптомов приблизительно через 7 дней. Обычно заболевание исчезает к 2–м годам, но иногда может персистировать и в старшем возврате. Установлено, что у всех детей раннего возраста, страдавших энтероколитом, индуцированным пищевыми белками, кожные прик–тесты и специфические IgE (RAST) к релевантным аллергенам (коровье молоко или соя) негативны. В отличие от IgE–медиируемых реакций симптомы энтероколита, индуцированного пищевыми белками, начинаются спустя 1–10 часов после употребления соответствующего продукта. Симптомы обычно начинаются с рвоты, за которой следует диарея (Sicherer S., 2000). Рвота начинается через 2–4 часа. Симптомы исчезают в течение 72 часов после элиминации аллергена, однако могут продолжаться и более длительно в связи с развитием вторичной дисахаридазной недостаточности. Наиболее частыми продуктами, вызывающими энтероколит у детей первого года жизни, являются коровье молоко и соя (Sicherer S., 1998). У детей старшего возраста провоцирующими факторами обычно являются яйцо, пшеница, рис, кукуруза и горох.

    Пищевая аллергия – наиболее частая причина ректальных кровотечений у детей раннего возраста. Проктит, индуцированный пищевыми белками, обнаруживается у детей первых месяцев жизни и проявляется появлением примеси крови в кале на фоне хорошего самочувствия. Средний возраст постановки диагноза приблизительно 60 дней, однако обычно кровотечение наблюдается в течение нескольких недель до установления правильного диагноза. Потери крови обычно небольшие. Наиболее частыми триггерами являются смеси на основе сои и коровьего молока. Синдром может развиться и у детей, находящихся исключительно на грудном вскармливании (Lake A.M., 1997). Элиминация из диеты сои и коровьего молока приводит к исчезновению явного кровотечения в течение 72 часов. Длительность продолжения скрытого кровотечения не известна. В случае развития заболевания на фоне гидролизованных смесей возможен эффект от использования аминокислотных смесей.

    Энтеропатия, индуцированная пищевыми белками, проявляется у детей раннего возраста и заключается в диарее, рвоте и недостаточном наборе веса. При биопсии кишечника обнаруживается атрофия ворсинок, клеточная инфильтрация, что приводит к нарушению абсорбции и потерям белка, а в итоге – к отекам у некоторых больных (Walker–Smith J., 1994). Анемия не выражена. Гиперчувствительность к молоку наиболее распространена, но может сочетаться с сенсибилизацией к сое, яйцу, пшенице и другим продуктам. Кровопотеря быстро исчезает после элиминации белков коровьего молока. Большинство больных становятся толерантными к молоку при достижении 1–3 летнего возраста. Имеются отдельные сообщения о данном заболевании у детей старшего возраста.

    Целиакия представляет собой энтеропатию, индуцированную пищевым белком, содержащим глиадин, который содержится в пшенице, овсе, рисе, ячмене (Collin P., 1999). Диагноз документируется типичными гистологическими находками (атрофия ворсинок и клеточные инфильтраты), которые нивелируются при элиминации глиадина из диеты. Гастроинтестинальные симптомы включают потерю веса, хроническую диарею, стеаторею. Возможно развитие оральных язв (Poon E., Nixon R., 2001).

    Эозинофильный гастроэнтерит может поражать больных всех возрастов (Kelly K.) и проявляется во множестве симптомов: абдоминальные боли, диарея, потеря веса, мелена и т.д. В биоптате слизистой желудка и кишечника выявляется эозинофильная инфильтрация. Возможна эозинофилия в периферической крови. Необходимо помнить, что и при ряде других поражений эозинофилы могут быть обнаружены в ЖКТ (паразитарные инфекции, воспалительные заболевания кишечника). Диагноз эозинофильного гастроэнтерита устанавливается только после исключения других заболеваний.

    Эозинофильный эзофагит проявляется у детей и взрослых (Moon A., 1995). Симптомы эозинофильного эзофагита аналогичны манифестации гастроэзофагального рефлюкса, но не отвечают на антирефлюксную терапию. Рвота и абдоминальные боли – наиболее частые симптомы. Кроме того, возможны анемия (вследствие скрытого кровотечения), потеря веса, ахалазия. Необходимо подчеркнуть, что не исключено и развитие других симптомов. Так, Vitellas K. et al. сообщили о 13 больных с эозинофильным эзофагитом, у которых отмечались дисфагия (12/13), аллергические симптомы (10/13), эозинофилия в периферической крови (12/13), стриктуры проксимального отдела пищевода (10/13) и положительный ответ на кортикостероидную терапию, что свидетельствует о наличии воспалительного процесса. В ряде исследований было установлено, что эозинофильный эзофагит может иметь место и в детском возрасте. Kelly K. et al. (1995) обследовали 23 ребенка с классическими симптомами гастроэзофагальной рефлюксной болезни, которые не исчезали при стандартной терапии. Количество эозинофилов в биоптате было увеличено по сравнению с детьми, имевшими обычный гастроэзофагальный рефлюкс. При открытых провокационных пробах молоко индуцировало симптомы у 7 детей, соя – 4, пшеница – 2, арахис – 2, яйцо – 1. Таким образом, пищевая аллергия, вероятно, играет определенную роль в патогенезе эозинофильного эзофагита у детей.

    Легкие являются одним из шоковых органов, которые поражаются при пищевой аллергии. Вместе с тем, эти заболевания выявляются значительно реже по сравнению с болезнями кожи и желудочно–кишечного тракта. Наиболее часто встречаемой клинической манифестацией легочной патологии при пищевой аллергии являются бронхиальная астма и аллергический ринит, заболевания, ассоциированные с IgE–медиируемыми реакциями. Изолированные назальные и бронхиальные реакции на пищевые продукты встречаются достаточно редко. Более характерно их вовлечение в реакции, связанные с пищевой аллергией при наличии атопического поражения кожи и желудочно–кишечного тракта. Частота респираторных симптомов, подтвержденных провокационным тестированием, составляет от 6% до 25% и максимальна у детей с атопическим дерматитом и астмой (James J.M., Eigenmann; Sampson H. 1999; Bock S., 1992; Novembre F. et al.). Большинство астматических реакций к пищевым продуктам связано с присутствием специфических IgE (Bock S., 1992; James J.M.; Sampson H.A., 1993; Sampson H.A., Mendelson L.M., Rosen J.P., 1992) . Среди широкого спектра пищевых продуктов, способных индуцировать бронхоспазм, особое внимание необходимо уделить арахису, лесному ореху (Bock S.A., 1992).

    Астматические реакции могут появляться при прямой ингаляции аэрозоля, содержащего пищевые аллергены. Эти реакции обычно происходят у больных с аллергией к рыбе, морепродуктам, яйцу при условиях их приготовления в ограниченном пространстве. Необходимо отметить, что заложенность носа у детей 1 года жизни, часто связываемая с употреблением коровьего молока, выявляется при проведении провокационного тестирования с данным продуктом менее чем у 0,2 % обследованных (Bock S.A., 1987; Host A., Halken S., 1990; Schrander J.J.P., 1993). Вместе с тем первичный путь экспозиции пищевых аллергенов, которые вызывают астму – пероральный, а не ингаляционный.

    Синдром Гейнера возникает у детей первых месяцев жизни и характеризуется не–IgE–медиируемой иммунной реакцией к белкам коровьего молока. Клинически это проявляется свистящим дыханием, одышкой, кашлем, периодически возникающими инфильтратами в легких, легочным гемосидерозом, анемией, рецидивирующими пневмониями, задержкой роста (Heiner D.C., Sears J.W.). Возможны риниты, формирования легочного сердца, рецидивирующие отиты, а также различные симптомы поражения желудочно–кишечного тракта. Преципитирующие антитела класса G к коровьему молоку обнаружены у больных с данной патологией. Симптомы уменьшаются при исключении коровьего молока и рецидивируют при повторном его введении в диету.

    К наиболее тяжелым и, к счастью, наиболее редким проявлениям пищевой аллергии относятся системные реакции – анафилаксия. В США пищевые продукты вызывают анафилаксию со смертельным исходом приблизительно у 100 человек в год (Yocum M.W., 1994). Необходимо подчеркнуть, пищевая аллергия – наиболее частая причина внегоспитальной анафилаксии (Sampson H.A., Mendelson L., Rosen J.P., 1992; Yocum M.W., 1999). По данным Rance F. (1999), из 544 детей с подтвержденной пищевой гиперчувствительностью анафилаксия являлась частью их клинических проявлений у 27 (4.9%). Наиболее частыми причинами анафилаксии, индуцированной пищевыми продуктами и подтвержденной двойной слепой, плацебо–контролируемой провокацией, являются яйца, коровье молоко, арахис, соя, рыба, морепродукты и различные орехи (Bock S.A., Atkins F.M., 1990, Burks A.W., James J.M., Hiegel A., 1998). Причем наиболее «опасными» продуктами, вызывающими летальную или тяжелую анафилаксию, являются арахис и орехи, растущие на деревьях: лесной орех, грецкий орех, кешью, фисташки, миндаль, а также морепродукты: моллюски, крабы, лобстеры, устрицы (Wuthrich B., 2000; Yunginger J.W., 1988). Патофизиология анафилаксии понятна не до конца, и ее связывают с массивным высвобождением медиаторов.

    Клинические проявления анафилаксии, вызванной пищевыми продуктами, включают отек гортани, крапивницу, ангиоотек, стридор, бронхообструкцию, одышку, рвоту, абдоминальные боли, гипотензию, загрудинные боли, сердечную аритмию и т.д. Ряд факторов предрасполагает к развитию анафилаксии, вызванной пищевыми продуктами:

    • наличие в анамнезе личной и наследственной отягощенности по атопическим заболеваниям (в особенности бронхиальной астмой);
    • максимальный риск в первые 2 года жизни, а затем он снижается;
    • диета, содержащая наиболее распространенные аллергены в течение первого года жизни, вероятно, способствует формированию сенсибилизации;
    • особенности национальной кухни также определяют спектр пищевых продуктов, к которым развивается гиперчувствительность.

    Анафилаксия к пищевым продуктам может являться одной из причин синдрома внезапной смерти. Аллергия к белкам коровьего молока, видимо, играет определенную роль в данном синдроме у детей первых месяцев жизни (Coombs R.R.A., Holgate S.T., 1990).

    Приблизительно треть больных с анафилаксией к пищевым продуктам имеют двухфазную реакцию, у 1/4 больных отмечаются пролонгированные (до 3 недель) симптомы (Sampson H.A., Mendelson L.M., Rosen J.P., 1992).

    У части пациентов анафилаксия появляется только в том в случае, если физической нагрузке предшествует употребление определенного продукта, к которому у больного определяются положительные скарификационные пробы. Эти продукты (сельдерей, крабы, пшеница) могут быть использованы в пище в течение последних 24 часов.

    Заключение. Клинические проявления пищевой аллергии чрезвычайно вариабельны (табл. 1). Поэтому, учитывая многообразие клинических манифестаций пищевой аллергии у детей, перед проведением специальных методов обследования рекомендуется ответить на следующие вопросы:

    • Какой продукт подозревается?
    • Вызывает ли «подозреваемый» продукт определенные симптомы при каждом его употреблении и как это зависит от его количества?
    • Какой период необходим для возникновения симптомов после еды?
    • Какова продолжительность симптомов?
    • Возможно ли развитие клинических проявлений без употребления «подозреваемого» продукта?

    1. Балаболкин И.И., Гребенюк В.Н. Атопический дерматит у детей.– Москва.–1999.– 240с.

    2. Bernhisel–Broadbent J., Taylor S., Sampson H.A.: Cross–allergenicity in the legume botanical family in children with food hypersensitivity. II. Laboratory correlates. J Allergy Clin Immunol 84:701–709, 1989

    3. Bock S.A., Atkins F.M.: Patterns of food hypersensitivity during sixteen years of double–blind placebo–controlled oral food challenges. J Pediatr 117:561–567, 1990

    4. Bock S.A.: Respiratory reactions induced by food challenges in children with pulmonary disease. Pediatr Allergy Immunol 3:188–194, 1992.

    5. Bock S.A.. Prospective appraisal of complaints of adverse reactions to foods in children during the first 3 years of life. Pediatrics 1987;79:683–8.

    Burks A.W., James J.M., Hiegel A.: Atopic dermatitis and food hypersensitivity reactions. J Pediatr 132:132–136, 1998

    6. Collin P., Kaukinen K., Maki M.: Clinical features of celiac disease today. Dig Dis Sci 17:100–106, 1999

    7. Coombs R.R.A., Holgate S.T.: Allergy and cot death: With special focus on allergic sensitivity to cows’ milk and anaphylaxis. Clin Exp Allergy 20:359–366, 1990

    8. Guillet G., Guillet M.H. Natural history of sensitizations in atopic dermatitis. Arch Dermatol 1992;128:187–92.

    9. Dupont C., Heyman M.: Food protein–induced enterocolitis syndrome: Laboratory perspectives. J Pediatr Gastroenterol Nutr 30(suppl):50–57, 2000

    10. Frick O., Ermel R., Reinhart G. Late–phase reactions to foodsin atopic dogs. 15 International Congress of allergology and clinical immunology. Stockholm, p.104–1994.

    11. Fritsch R., Bohle B., Vollmann U.: Bet v 1, the major birch pollen allergen, and Mal d 1, the major apple allergen, cross–react at the level of allergen–specific T helper cells. J Allergy Clin Immunol 102:679–686, 1998.

    12. Heiner D.C., Sears J.W.: Chronic respiratory disease associated with multiple circulating precipitins to cow’s milk. Am J Dis Child 100:500–502, 1960

    13. Host A. Development of atopy in childhood. Allergy 1997: 52: 695–7.

    14. Host A., Halken S. A prospective study of cow milk allergy in Danish infants during the first 3 years of life. Allergy 1990;45:587–96.

    15. James J.M., Bernhisel–Broadbent J., Sampson H.A.: Respiratory reactions provoked by double–blind food challenges in children. Am J Respir Crit Care Med 149:59–64, 1994.

    16. Iacono G., Carroccio A., Cavataio F.: Gastroesophageal reflux and cow’s milk allergy in infants: A prospective study. J Allergy Clin Immunol 97:822–827, 1996

    17. Kelly K.: Eosinophilic gastroenteritis. J Pediatr Gastroenterol Nutr 30(suppl):28–35, 2000

    18. Kelly K., Lazenby A., Rowe P.: Eosinophilic esophagitis attributed to gastroesophageal reflux: Improvement with an amino acid–based formula. Gastroenterology 109:1503–1512, 1995

    19. Lake A.M.: Beyond hydrolysates: Use of L–amino acid formula in resistant dietary protein–induced intestinal disease in infants. J Pediatr 131:658–660, 1997

    20. Lever R., MacDonald C., Waugh P., Aitchison T. Randomized controlled trial of advice on an egg exclusion diet in young children with atopic eczema and sensitivity to eggs. Pediatr Allergy Immunol 1998;9:13–9.

    21. Moon A., Kleinman R.: Allergic gastroenteropathy in children. Ann Allergy Asthma Immunol 74:5–9, 1995

    22. Poon E., Nixon R. Cutaneous spectrum of coeliac disease. Aust J Dermatol 42:136–138, 2001

    23. Powell G.K. Enterocolitis in low–birth–weight infants associated with milk and soy protein intolerance. J Pediatr 1976;88:840–4.

    24. Sicherer S. Clinical implications of cross–reactive food allergens. J Allergy Clin Immunol 2001;108:881–90.

    25. Sampson H.A.: Food allergy: I. Immunopathogenesis and clinical disorders. J Allergy Clin Immunol 103:717–728, 1999

    26. Sampson H.: Food allergy: II. Diagnosis and management. J Allergy Clin Immunol 103:981–989, 1999

    27. Sampson H.A., McCaskill C.C. Food hypersensitivity and atopic dermatitis: Evaluation of 113 patients. J Pediatr 1985;107:669.

    28. Sampson H.A., Mendelson L., Rosen J.P.: Fatal and near–fatal food anaphylaxis reactions in children. N Engl J Med 327:380–384, 1992

    29. Sampson H.: Diagnosing food allergy. In Spector S (ed): Provocation Testing in Clinical Practice.NewYork,MarcelDekker,1995,p.623.

    30. Sampson H.A., Mendelson L.M., Rosen J.P.: Fatal and near–fatal anaphylactic reactions to food in children and adolescents. N Engl J Med 327:380–384, 1992

    31. Sampson H.A.: Adverse reactions to foods. In Middleton EJ, Reed CE, Ellis EF, et al (eds): Allergy, Principles and Practice. St. Louis, Mosby, 1993, pp 1661–1686

    32. Schrander J.J.P., van den Bogart J.P.H., Forget P.P., Schrander–Stumpel C.T.R.M., Kuijten R.H., Kester A.D.M. Cow’s milk protein intolerance in infants under 1 year of age: a prospective epidemiological study. Eur J Pediatr 1993;152:640–4.

    33. Sicherer S.: Food protein–induced enterocolitis syndrome: Clinical perspectives. J Pediatr Gastroenterol Nutr 30(suppl):45–49, 2000

    34. Sicherer S., Eigenmann P., Sampson H.: Clinical features of food protein–induced enterocolitis syndrome. J Pediatr 133:214–219, 1998

    35. Novembre E., de Martino M., Vierucci A.: Foods and respiratory allergy. J Allergy Clin Immunol 81:1059–1065, 1988

    36. Vitellas K., Bennett W., Bova J.: Radiographic manifestations of eosinophilic gastroenteritis. Abdom Imaging 20:406–413, 1995

    37. Walker–Smith J.: Food sensitive enteropathy: Overview and update. Acta Paediatr Jpn 36:545–549, 1994

    38. Walker–Smith J.A., Ford R.P., Phillips A.D.: The spectrum of gastrointestinal allergies to food. Ann Allergy 53:629–636, 1984

    39. Wuthrich B.: Lethal or life–threatening allergic reactions to food. Invest Allergol Clin Immunol 10:59–65, 2000

    Оценка эффективности злакового прикорма у детей с гастроинтестинальной аллергией

    Изучена эффективность диетотерапии с использованием гречневой каши на основе козьего молока у детей грудного возраста с гастроинтестинальной аллергией, находящихся на естественном вскармливании. Показано, что применение прикорма на основе козьего молока п

    Efficiency of diet therapy with buckwheat groats on the base of goat’s milk for suckling children with gastrointestinal allergy on breast feeding has been studied. Using supplemental feeding on the base of goat’s milk allows optimizing diet therapy.

    Гастроинтестинальная аллергия (ГИА) занимает важное место среди патологии, которая связана с пищевой аллергией [1]. Формирование гастроинтестинальной формы аллергии определяется сенсибилизацией организма к пищевым аллергенам и воздействием генетических факторов. Основным аллергеном, вызывающим развитие пищевой аллергии (ПА) у детей первого года жизни, является коровье молоко, что необходимо учитывать при назначении прикорма [2–5]. Согласно Национальной программе вскармливания детей первого года жизни в Российской Федерации (2011) в качестве первого прикорма целесообразно назначать каши промышленного производства, а при паратрофии и запорах — овощное пюре [6]. Принципы введения прикорма грудным детям с ПА отличаются от здоровых детей. Используются безмолочные каши, не содержащие глютен [6, 7]. Однако исключение из рациона питания ребенка злаковых продуктов и молока может привести к дефициту кальция и витаминов. Поэтому необходим поиск продуктов прикорма, содержащих низкоаллергенные ингредиенты. К таким продуктам относятся Бибикаши, содержащие цельнозерновые крупы Organic (гречневая, рисовая), и адаптированную формулу Нэнни на основе новозеландского козьего молока, а также пребиотический комплекс Orafi®Synergy1.

    Целью настоящего исследования было изучение эффективности диетотерапии с использованием гречневой Бибикаши на основе новозеландского козьего молока у детей раннего возраста с ГИА, находящихся на естественном вскармливании.

    Материалы и методы исследования

    Обследовано 50 детей в возрасте от 5 до 6 месяцев с ГИА, имеющих сенсибилизацию к пищевым аллергенам. Гастроинтестинальная аллергия у детей проявлялась в виде кишечной колики у 88% детей, кишечной диспепсии (неустойчивый стул с примесью слизи, метеоризм) — у 70%, желудочной диспепсии (срыгивания, рвота) — у 36%, колитом с ректальными кровотечениями — у 16% пациентов. Дети были разделены на две группы — основную и группу сравнения. В основную группу вошли 30 детей, получавших в качестве первого прикорма гречневую Бибикашу на основе новозеландского козьего молока в объеме 150 мл/сут. Группу сравнения составили 20 детей, имевших в качестве первого прикорма другую безмолочную гречневую инстантную кашу в объеме 150 мл/сут. Все дети находились на естественном вскармливании.

    Детям с ГИА проводились сбор аллергологического анамнеза, клиническое обследование, общий анализ крови, мочи, специфические аллергологические методы обследования — определение уровня общего IgE в сыворотке крови и аллергенспецифических IgE-антител к белкам коровьего молока и казеину.

    Диетотерапия назначалась в составе комплексной терапии ГИА и включала в себя назначение гипоаллергенной диеты кормящей матери, антигистаминных препаратов, сорбентов, ферментов и в сравниваемых группах не различалась.

    Оценку эффективности терапии проводили на основе оценки динамики клинических симптомов ГИА, снижения уровня общего и аллергенспецифических IgE к белкам коровьего молока и казеину. Положительным клиническим эффектом считалось исчезновение симптомов на 14–18 день после начала лечения. Клиническую эффективность оценивали на основе общего терапевтического эффекта (ОТЭ) и индивидуального терапевтического эффекта (ИТЭ). При высоком ИТЭ ремиссия наступала через 10–13 дней, а при среднем ИТЭ — через 14–18 дней. ОТЭ оценивался по проценту больных, имеющих положительный ИТЭ от лечения.

    Результаты и их обсуждение

    Выявлено, что среди детей основной группы, получавших гречневую Бибикашу в составе комплексного лечения, ОТЭ составил 83,3%. Высокий ИТЭ отмечался в 46,6% случаев, средний — в 36,7% (табл. 1). У 84% больных с ГИА с первых дней лечения уменьшились кишечные колики, улучшился характер стула, исчезали проявления метеоризма, срыгивания и рвота, а к 10–18 дню отмечалось наступление клинической ремиссии заболевания. Средняя продолжительность обострения составила 14 дней.

    Среди пациентов группы сравнения с ГИА, получавших гречневую безмолочную инстантную кашу, в составе комплексной терапии ОТЭ составил 75%. Высокий ИТЭ имел место в 35% случаев, средний — в 40%. Средняя продолжительность периода обострения составила 16 дней.

    Изучение долгосрочных результатов лечения на фоне продолжения приема Бибикаши в качестве злакового прикорма в течение 12 месяцев показало, что средняя продолжительность ремиссии в основной группе увеличилась в 3,5 раза — с 3 до 10,5 мес, а в группе сравнения в 2,6 раза — с 3 до 8 мес (р

    Т. Г. Маланичева* , 1 , доктор медицинских наук, профессор
    А. М. Закирова*, кандидат медицинских наук
    С. Н. Денисова**, доктор медицинских наук, профессор
    И. И. Сидоров**, кандидат медицинских наук

    * ГБОУ ВПО КГМУ МЗ РФ, Казань
    ** ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н. И. Пирогова МЗ РФ, Москва

    Расшифровать результаты анализа на аллергены

    Похожие и рекомендуемые вопросы

    163 ответа

    При периодических контактах с кошкой иногда возникал насморк, а иногда без всякой реакции.
    Такую реакцию списывал на простуду и не придавал значения.
    Сейчас хочу завести кошку и решил сделать анализ.
    Помогите расшифровать пожалуйста.
    Мне контакты с кошкой противопоказаны?
    Бывает ли аллергия к конкретной породе кошки или порода кошки не имеет значения?

    Нет возможности прислать фото, иммуноглобулин Е — 16

    Дочери 5 лет. Больна с 15.12.17. Появился сильный кашель, дистанционные хрипы, свистящее дыхание. Госпитализация с 19.12. -27.12.2020 (лечение бередуал 4кап х 2раза, флемаксин) дз обструктивный бронхит. Кашель сохранялся после выписки. Назначение бередуал 4кап х 2 раза. Ухудш через неделю, приступообразный кашель, свистящее дыхание, снова госпитализация с 03.01.2020-15.01.2020г. (лечение бередуал, антибиотики) (дз бронхит, подозрение на бронхиальную астму.
    Обратились за консультацией к пульмонологу.

    ЛЕЧЕНИЕ: 1. Бередуал по 12 кап. Х2раза в день(утро, вечер) +атровент по 20 кап. Х1-2раза днем 2недели (до исчезновения кашля), разводить с 2,0 мл физиологич раствора 2. Пульмикорт — суспензия по 1000мгкх2раза в день (1-2дня), затем по 500мгк х 2 раза в день (5-7дней), затем по 250мгк х 2 раза в день 2 — 4 недели (утро вечер) можно смешивать с бередуалом. Полоскать горло, рот 3. Сингуляр(монтелар) 4мг по 1 тб х 1 раз на ночь разжевать 4 недели Нос: 1. Маример по 1-2 дозе +2-4 раза в день
    ОБСЛЕДОВАНИЕ:

    1. Бронофонография
    2. Панель педиатричекая
    3. Иммуноглобулин Е
    4. Мочевая кислота сыв. Крови
    5. Цитологическое исследование материала из носа

    Результаты обследования:
    1. Бронография Признак нарушения проходимости бронхов по обструктивному типу (АКРД более 15,9%) с преобладанием на уровне мелких и средних бронхов+ КВД верхних дыхательных путей.
    2. Иммуноглобулин Е равен 16
    3. Мочевая кислота сыв. Крови равна 90
    4. Цитологическое исследование материала из носа — в цитограмме слизь, клетки мерцательного эпителия с дистрофическими изменениями в части клеток. Единичные нитрофильные лейкоциты. Педиатрическую панель прикреплял

    Аллергологические

    АЛЛЕРГОЛОГИЯ — ФАКТОРЫ ГУМОРАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА
    — определение антител к белкам (иммуноглобулинов) — Ig A, Ig M, Ig G, Ig E.

    По вашему желанию перед взятием крови из вены мы можем провести
    местное обезболивание кожи специальным обезболивающим кремом ЭМЛА (EMLA),
    производство AstraZeneca.
    Современная эффективная технология используется во многих странах мира
    и позволяет сделать безболезненной и нестрашной одну и
    з самых психологически неприятных для ребенка процедур — забор крови из вены.
    От вас требуется:
    1) изъявить желание,
    2) появиться в центре за 30-40 минут ДО назначенного Вам
    времени взятия анализа — это время необходимо для того,
    чтобы провести аппликацию крема и дождаться эффекта.

    Пыльцевые аллергены растений, трав, деревьев

    Скрининг аллергенов раннецветущих трав — 5 аллергенов: ежа сборная, овсяница луговая, рожь многолетняя, тимофеевка, мятлик луговой

    Скрининг аллергенов поздноцветущих трав — 5 аллергенов: колосок душистый, рожь много-летняя, камыш обыкновенный, рожь культивированная, бухарник шерстистый

    Панель аллергенов травы — 5 аллергенов:
    колосок душистый, рожь многолетняя, тимофеевка, рожь культивированная, бухарник шерстистый

    Скрининг аллергенов растений — 4 аллергена:
    амброзия обыкновенная, полынь обыкновенная, нивяник, одуванчик лекарственный

    Панель аллергенов сорной травы — 6 аллергенов:
    амброзия обыкновенная, полынь обыкновенная, одуванчик лекарственный, подорожник, зольник/солянка, поташник

    Луговые травы по 2 тестам (IgE+РПГ) — 9 аллергенов:
    ежа, овсяница, тимофеевка, мятлик, костер, рожь, лисохвост, пырей, райграс

    Луговые травы по 3 тестам (IgE+IgG+РПГ)- 9 аллергенов: ежа, овсяница, тимофеевка, мятлик, костер, рожь, лисохвост, пырей, райграс

    Сорные травы по 2 тестам (IgE+РПГ) — 9 аллергенов: амброзия, полынь, одуванчик, лебеда, крапива, ромашка, роза, подсолнечник, зверобой

    Сорные травы по 3 тестам (IgE+IgG+РПГ) — 9 аллергенов: амброзия, полынь, одуванчик, лебеда, крапива, ромашка, роза, подсолнечник, зверобой

    Деревья по 2 тестам (IgE+РПГ) — 12 аллергенов:
    клен, ольха, береза, орешник, бук, дуб, вяз, ива, тополь, ясень, сосна, акация

    Деревья по 3 тестам (IgE+IgG+РПГ) — 12 аллергенов:
    клен, ольха, береза, орешник, бук, дуб, вяз, ива, тополь, ясень, сосна, акация

    Скрининг аллергенов раннецветущих деревьев — 5 аллергенов:
    ольха, лещина, вяз, ива, тополь

    Скрининг аллергенов позднецветущих деревьев — 5 аллергенов:
    клен, береза, дуб, бук, грецкий орех

    Панель аллергенов деревьев — 5 аллергенов:
    ольха, лещина обыкновенная, ива, береза, дуб

    Аллергены животных и птиц

    Панель эпидермальных аллергенов по 2 тестам (IgE+РПГ) — 11 аллергенов:
    шерсть кошки, шерсть собаки, перхоть лошади, собака (эпителий), шерсть морской свинки, волос человека, мышь (эпителий), попугай (помет), перо попугая, шерсть овцы, шерсть кролика

    Панель эпидермальных аллергенов по 3 тестам (IgE+IgG+РПГ) — 11 аллергенов:
    шерсть кошки, шерсть собаки, перхоть лошади, собака (эпителий), шерсть морской свинки, волос человека, мышь (эпителий), попугай (помет), перо попугая, шерсть овцы, шерсть кролика

    Бытовые аллергены: пыль, перо, насекомые, клещи, тараканы

    Клещ — Dermatophagoides pteronyssinus

    Клещ — Dermatophagoides farinae

    Мотыль (личинка комара-дергунца)

    Дафния (водяная блоха)

    Таракан (Blatella germanica)

    Панель бытовых аллергенов по 2 тестам (IgE+РПГ) — 9 аллергенов: Препараты домашней пыли:
    1. Домашняя пыль, 2. Книжная пыль, 3. Перо подушки;
    Клещи домашней пыли:
    1. D. Pteronyssinus, 2. D. Farinae, 3. D. Microceras, 4. T. Purtescentiae;
    Насекомые:
    1. B. Germanica, 2. M. Domestica

    Панель бытовых аллергенов по 3 тестам (IgE+IgG+РПГ) — 9 аллергенов:
    Препараты домашней пыли:
    1. Домашняя пыль, 2. Книжная пыль, 3. Перо подушки;
    Клещи домашней пыли:
    1. D. Pteronyssinus, 2. D. Farinae, 3. D. Microceras, 4. T. Purtescentiae;
    Насекомые:
    1. B. Germanica, 2. M. Domestica

    Аллергены микроскопических грибов (плесени)

    Скрининг аллергенов микроскопических грибов — 4 аллергена: aspergillus fumigatus, alternaria tenuis, cladosporium herbarum, penicillium notatum

    Панель аллергенов плесени — 5 аллергенов:
    aspergillus fumigatus, alternaria tenuis, cladosporium herbarum, penicillium notatum, candida albicans

    Гриб — Alternaria tenuis

    Гриб — Aspergillus fumigatus

    Гриб — Candida albicans

    Гриб — Cladosporium herbarum

    Гриб — Penicillium notatum

    Панель грибковых аллергенов по 2 тестам (IgE+РПГ) — 12 аллергенов:
    Penicillium natatum, Cladosporium herbarum, Aspergillus fumigatus, Mucor racemosus, Candida albicans, Alternaria tenius, Rhizophorum nigricans, Cladosporium fulvum, Penicillium commune, Aspergillus niger, Trichophyton rubrum, Aspergillus flavus

    Панель грибковых аллергенов по 3 тестам (IgE+IgG+РПГ) — 12 аллергенов:
    Penicillium natatum, Cladosporium herbarum, Aspergillus fumigatus, Mucor racemosus, Candida albicans, Alternaria tenius, Rhizophorum nigricans, Cladosporium fulvum, Penicillium commune, Aspergillus niger, Trichophyton rubrum, Aspergillus flavus

    Бактериальные аллергены по 2 тестам (IgE+РПГ) — 8 аллергенов: Str. Pneumoniae, S. aureus, N. perflava, E. coli, K. pneumoniae, P. vulgaris, S. epidermidis, H. Influenzae

    Бактериальные аллергены по 3 тестам (IgE+IgG+РПГ) — 8 аллергенов: Str. Pneumoniae, S. aureus, N. perflava, E. coli, K. pneumoniae, P. vulgaris, S. epidermidis, H. Influenzae

    Аллергологическое обследование — 55, 70 и 100 аллергенов

    Аллергологическое обследование — 55 аллергенов по 2 тестам (IgE+РПГ) или по 3 тестам (IgE+IgG+РПГ):

    Бытовые аллергены:
    Препараты домашней пыли: домашняя пыль, книжная пыль, перо подушки;
    Клещи домашней пыли: D. pteronyssinus, D. farinae, T. purtescentiae;
    Насекомые: B. germanica
    Эпидермальные аллергены:
    шерсть кошки, шерсть собаки, шерсть овцы, шерсть кролика;
    Деревья:
    клен, ольха, береза, орешник, дуб;
    Луговые травы:
    ежа, овсяница, тимофеевка, лисохвост, пырей, райграс;
    Сорные травы:
    полынь;
    Бактериальные аллергены:
    Str. Pneumoniae, S. aureus, N. perflava, E. coli, K. pneumoniae, P. vulgaris;
    Грибковые аллергены:
    Penicillium natatum, Aspergillus fumigatus, Candida albicans, Alternaria tenius, Rhizophorum nigricans, Aspergillus Flavus;
    Пищевые аллергены:
    куриное яйцо (белок), молоко коровье, свинина, говядина, мясо курицы, мясо утки, треска, ржаная мука, пшеница, гречка, овсянка, рис, ячмень, грецкий орех, морковь, томаты, вишня, клубника, пищевая краска (смесь).

    Аллергологическое обследование — 70 аллергенов по 2 тестам (IgE+РПГ) или по 3 тестам (IgE+IgG+РПГ)

    Бытовые аллергены:
    Препараты домашней пыли: домашняя пыль, книжная пыль, перо подушки;
    Клещи домашней пыли: D. pteronyssinus, D. farinae, T. purtescentiae;
    Насекомые: B. germanica
    Эпидермальные аллергены:
    шерсть кошки, шерсть собаки, шерсть овцы, шерсть кролика, перхоть лошади, шерсть морской свинки, волос человека;
    Деревья:
    к лен, о льха, б ереза, о решник, д уб, тополь, ясень;
    Л уговые травы:
    е жа, о всяница, т имофеевка, л исохвост, п ырей, райграс, костер, рожь;
    Сорные травы:
    п олынь, амброзия, одуванчик, лебеда, крапива;
    Бактериальные аллергены:
    Str. pneumoniae, S. aureus, N. perflava, E. coli, K. pneumoniae, P. vulgaris;
    Грибковые аллергены:
    Penicillium natatum, Aspergillus fumigatus, Candida albicans, Alternaria tenius, Rhizophorum nigricans, Aspergillus Flavus;
    Пищевые аллергены:
    куриное яйцо (белок, желток), м олоко коровье, св инина, г овядина, м ясо курицы, м ясо утки, т реска, хек, р жаная мука, п шеница, г речка, овсянка, р ис, я чмень, г рецкий орех, м орковь, т оматы, в ишня, клубника, апельсин, лимон, мандарин, п ищевая краска (смесь).

    Аллергологическое обследование — 110 аллергенов по 2 тестам (IgE+РПГ) по 3 тестам (IgE+IgG+РПГ)

    Бытовые аллергены:
    Препараты домашней пыли: домашняя пыль, книжная пыль, перо подушки;
    Клещи домашней пыли: D. pteronyssinus, D. farinae, T. purtescentiae, D. microceras, M. domestica;
    Насекомые: B. germanica
    Эпидермальные аллергены:
    шерсть кошки, шерсть собаки, шерсть овцы, шерсть кролика, перхоть лошади, шерсть морской свинки, волос человека, собака (эпителий), мышь (эпителий), попугай (помет), перо попугая;
    Деревья:
    к лен, о льха, б ереза, о решник, д уб, тополь, ясень, бук, вяз, ива, сосна, акация;
    Л уговые травы:
    е жа, о всяница, т имофеевка, л исохвост, п ырей, райграс, костер, рожь, мятлик;
    Сорные травы:
    п олынь, амброзия, одуванчик, лебеда, крапива, ромашка, роза, подсолнечник, зверобой;
    Бактериальные аллергены:
    Str. pneumoniae, S. aureus, N. perflava, E. coli, K. pneumoniae, P. vulgaris, S. epidermidis, H. influenzae;
    Грибковые аллергены:
    Penicillium natatum, Сladosporium herbarum, Aspergillus fumigatus, Mucor ramigatus, Candida albicans, Alternaria tenius, Rhizophorum nigricans, Cladosporium fulvum, Penicillium commune, Aspergillus niger, Trichophyton rubrum, Aspergillus flavus ;
    Пищевые красители:
    куркумин, шафран, индигокармин, тартразин, метилвиолет; Пищевые консерванты:
    бензойная кислота, уротропин, сорбиновая кислота, нитрат натрия, нитрит натрия
    Пищевые аллергены:
    куриное яйцо (белок, желток), м олоко коровье, овальбумин, молоко коровье обработанное, сыр, казеин, св инина, г овядина, говядина вареная, м ясо курицы, м ясо утки, т реска, хек, скумбрия, карп, р жаная мука, п шеница, г речка, овсянка, р ис, я чмень, г рецкий орех, фундук, арахис, м орковь, т оматы, картофель, капуста, свекла, красная смородина, черная смородина, малина, в ишня, клубника, апельсин, лимон, мандарин, грейпфрут, п ищевая краска (смесь).

    Панели пищевых аллергенов

    Орехи (4 аллергена):
    арахис, грецкий орех, фундук, миндаль

    Расшифровка анализа на аллергены

    Для чего сдают анализы?

    Врач данной специализации назначит вам ряд проб (анализы крови на аллергены, кожные пробы при необходимости), на основе результатов которых поставит диагноз и выработает максимально подходящую и эффективную для вас тактику лечения от аллергии. Не стоит заниматься самолечением, тянув с обращением к врачу – легко заработать такие хронические заболевания, как хронический ринит, бронхиальную астму, конъюнктивит и т.д.

    После того, как вы сдадите анализ крови на аллергены, вашим врачом будут получены определенные результаты. Далее аллерголог займется расшифровкой анализа на аллергены. Итак, что же из себя представляет данная расшифровка и как расшифровать анализы на аллергены самостоятельно?

    На что направлены сдаваемые анализы?

    Необходимо помнить, что перед сдачей иммунологического анализа, призванного обнаружить или опровергнуть наличие аллергена в крови пациента, необходима подготовка. Она заключается в отказе за несколько дней до анализа от физических нагрузок и эмоциональных впечатлений, стараясь избегать стрессовых ситуаций. За сутки до забора крови постараться не курить, а поужинать следует за 8-10 часов до предполагаемой кровоотдачи.

    Некоторые пробы нельзя сдавать в период острого проявления аллергии, так как есть возможность получить недействительные и завышенные результаты анализов на аллергены, расшифровка которых не должна осуществляться в принципе.

    Все клинические пробы, направленные на выявление аллергена в организме человека, состоят из определения общего иммуноглобулина (специальных антител, вырабатываемых лимфоцитами и клетками тканевой жидкостью) и иммуноглобулина специфического.

    Значения каких показателей смогут рассказать о наличии аллергии?

    В норме показатель общего иммуноглобулина незначительный, однако, если он повышен, то возможно диагностировать аллергическую реакцию организма.

    В том случае, если тест показал наличие аллергена в организме человека, специалистами принимается решение о сдачи крови на специфический иммуноглобулин IgE.

    Анализ крови на иммуноглобулин ige

    Показатели специфического иммуноглобулина

    • 5 дней — 12 месяцев – 0-15 Ед/мл;
    • 12 месяцев — 6 лет – 0-60 Ед/мл;
    • 6 — 10 лет – 0-90 Ед/мл;
    • 10 лет — 16 – 0-200 Ед/мл;
    • Старше 16 лет – 0-100 Ед/мл.

    Референсные значения такого специфического иммуноглобулина как Ig4 в расшифровке анализа крови на аллергены могут иметь следующие значения:

    • 5000 нг/мл – стоит отказаться от продукта как минимум на следующие 3 месяца после сдачи крови на аллергены.

    Вышеупомянутый иммуноглобулин характеризует степень иммунного ответа (низкий уровень, средний и высокий) в расшифровке результатов анализа на аллергены.

    В настоящее время для оценивания результатов анализа крови на аллергены существует следующий диапазон норм, или так называемые классы:

    • Класс 0 — 100 характерен для экстремально высокого количества антител.

    Но не только анализ крови используется для обнаружения и распознавания антигенов к аллергенам в крови человека.

    Кожные пробы

    Лечащий врач может назначить и кожные пробы, которые не потребуют особой расшифровки. Все дело в том, что такие пробы дают ответ врачу о наличии аллергена в организме практически сразу. Процедура нанесения препарата аллергена, предположительно вызывающего аллергию у пациента, может дать (а может и нет) аллергическую реакцию, наличие которой и будет ответом о наличии аллергенов в организме.

    Наличие аллергена в организме

    Не стоит проводить кожную пробу самостоятельно дома. Хоть эта операция и является по своей сути простой, проводиться она может только под строжайшим наблюдением врача. Связано это с возможным развитием анафилактического шока, справиться с которым может только специалист.

    Если вы нашли ошибку в тексте, обязательно дайте нам знать об этом. Для этого просто выделите текст с ошибкой и нажмите Shift + Enter или просто нажмите здесь. Большое спасибо!

    Спасибо что уведомили нас об ошибке. В ближайшее время мы все исправим и сайт станет еще лучше!

    Полынь обыкновенная (аллерген w6), IgE антитела, кровь

    Исследуемый материал: Взятие крови

    Полынь обыкновенная (чернобыльник, чернобыль) — многолетнее травянистое растение семейства астровые, распространено по всей территории России. Пыльца полыни обыкновенной является довольно распространённым аллергеном. Возникновение аллергических реакций связано с периодом цветения этого растения, которое приходится на июль-сентябрь. Наиболее частыми проявлениями повышенной чувствительности организма к пыльце являются аллергический конъюнктивит (покраснение глаз, обильное слезотечение), который, чаще всего, сопровождается ринитом (зуд и щекотание в носу, покраснение кожи носа, обильное прозрачное водянистое отделяемое, чихание), бронхиальная астма, реже наблюдаются кожные проявления — крапивница и отёк Квинке.

    При аллергии на полынь горькую часто встречаются перекрестные реакции на семена подсолнечника, подсолнечное масло и продукты, в состав которых оно входит (халва, майонез, горчица), цикорий, дыню, арбуз, зелень и специи (сельдерей, укроп, тмин, петрушка, кари, перец, анис, мускатный орех, корица, имбирь и кориандр), на напитки, приготовленные с использованием полыни (вермуты, бальзамы, абсент). Возможны реакции на морковь, чеснок, цитрусовые, бананы, кабачки, баклажаны, латук, топинамбур, мёд.

    Не допускается применение фитопрепаратов полыни, ромашки, календулы, мать-и-мачехи, девясила, череды, тысячелистника, пижмы, одуванчика.

    Антитела класса IgE вызывают реакции немедленного типа, при которых симптомы развиваются непосредственно после контакта с аллергеном (от нескольких минут до 2-х часов).

    При попадании в организм, предрасположенный к аллергии, некоторых белков (чаще это белки пыльцы растений, пищевых продуктов, медикаментов), образуются антитела класса IgE, которые прикрепляются к особым – тучным клеткам, расположенным в слизистых оболочках. Эти клетки содержат большое количество биологически активных веществ. При повторном поступлении антигена, происходит его прикрепление к своим, ранее выработанным, антителам, что приводит к разрыву тучной клетки и выбросу наружу множества биологически активных веществ (гистамина, серотонина, простагландинов, тромбоксана и др.). Именно воздействие этих веществ на ткани и органы определяет клиническую картину того или иного аллергического заболевания.

    Анализ не информативен в случае, если прошло длительное время после контакта с аллергеном.Анализ обнаруживает наличие специфических антител IgЕ к аллергенам пыльцы полыни обыкновенной методом иммуноанализа.

    Метод

    Метод ИХЛА ( иммунохемилюминесцентный анализ ) — один из самых современных методов лабораторной диагностики. В основе метода используется иммунологическая реакция, в которой на этапе выявления искомого вещества (специфического антитела), к нему присоединяют люминофоры — вещества, светящиеся в ультрафиолете. Уровень свечения пропорционален количеству выявленных антител и измеряется на специальных приборах — люминометрах.

    Референсные значения — норма
    (Полынь обыкновенная (аллерген w6), IgE антитела, кровь)

    Информация, касающаяся референсных значений показателей, а также сам состав входящих в анализ показателей может несколько отличаться в зависимости от лаборатории!

    Единицы измерения: классы, соответствующие концентрации специфических IgE в сыворотке крови.

    Альтернативные единицы измерения: kU/L

    Концентрация специфического IgE, kU/L Интерпретация результата
    100

    Показания

    Выявление причин аллергии.

    Повышение значений (положительный результат)

    Высокий титр специфических антител свидетельствует о недавнем контакте с данным аллергеном и выраженной аллергической реакции.

    Смеси аллергенов

    Код

    Название аллергена

    Скрининг-ингаляционная смесь
    (d1-d2-e1-e2-e3-g2-g8-m3-m6-t4-t9-t11-w1-w6-w9-w21)
    (Dermatophagoides pteronyssinus + Dermatophagoides farinae + эпителий кошки + эпителий собаки + перхоть лошади + свинорой пальчаты + мятлик луговой + Aspergillus fumigatus + Alternaria alternata (tenuis) + орешник/лещина + маслина европейская + платан кленолистный + амброзия обыкновенная + полынь обыкновенная + подорожник + постеница ) NEW!

    Ингаляционная смесь
    (d1-e1-e5-g6-g12-m2-t3-w6)
    (Dermatophagoides pteronyssinus, эпителий кошки, перхоть собаки, тимофеевка луговая, рожь посевная, Cladosporium herbarum, береза бородавчатая, полынь обыкновенная) NEW!

    Смесь бытовых аллергенов
    (d1-e1-m3-i6)
    (Dermatophagoides pteronyssinus, эпителий кошки, Aspergillus fumigatus, таракан-прусак ) NEW!

    Смесь бытовых аллергенов
    (d1-d2-e1-e2)
    (Dermatophagoides pteronyssimus + Dermatophagoides farinae + эпителий кошки + эпителий собаки)

    Смесь перьевых аллергенов
    (е70-е85-е86)
    (гусиные перья+куриные перья+утиные перья )

    Эпителиальная смесь
    (e1-e5-e6-e87-e88)
    (эпителий кошки, перхоть собаки, эпителий морской свинки, эпителий и белки крысы, эпителий и белки мыши) NEW!

    Смесь эпителиев и белков (грызуны)
    (e6-e82-e84-e87-e88)
    (эпителий морской свинки, эпителий кролика, эпителий хомяка, эпителий и белки крысы, эпителий и белки мыши) NEW!

    Смесь перьев попугаев (e78-e93-e201-e213) (перья волнистого попугайчика, перья длиннохвостого попугая, перья канарейки, перья попугая жако) NEW!

    Эпителиальная смесь
    (e1-e2-e3-e4-e5-e70-e81-e85-e86-e100)
    (эпителий кошки+эпителий собаки+перхоть лошади+перхоть коровы+ перхоть собаки+гусиные перья+эпителий овцы+куриные перья+ утиные перья+перхоть кошки)

    Cмесь аллергенов детского питания
    (f1-f2-f3-f4-f14-f25-f75)
    (яичный белок + молоко + треска+ пшеница+соевые бобы+томаты+ яичный желток)

    Смесь аллергенов морепродуктов
    (f3-f23-f24-f37)
    (треска+крабовое мясо+ креветки+мидии)

    Смесь аллергенов злаковых
    (f4-f6-f7-f8-f9) (пшеница+ячмень+овес+кукуруза+рис)

    Смесь аллергенов рыбы
    (f3-f41-f205-f206-f254)
    (треска+ лосось/семга+сельдь+ скумбрия+ камбала)

    Смесь пищевая (педиатрическая)
    (f1-f2-f3-f4-f13-f14)
    (яичный белок + молоко коровье+треска + пшеница + арахис + соевые бобы)

    Смесь аллергенов орехов
    (f17-f18-f20-f36-f256)
    (лесной орех+бразильский орех+миндаль+кокос+грецкий орех)

    Смесь аллергенов овощей
    (f12-f15-f25-f31-f35)
    (горох + фасоль белая + томаты + морковь + картофель)

    Смесь пищевая (зерновые)
    (f4-f7-f8-f10-f11)
    (пшеница, овес, кукуруза, кунжут, греча)
    NEW!

    Смесь пищевая
    (f33-f49-f92-f95)
    (апельсин, яблоко, банан, персик) NEW!

    Смесь пищевая
    (f44-f94-f208-f210)
    (клубника+груша+лимон+ ананас)

    Смесь фруктов
    (f49-f92-f94-f95)
    (яблоко, банан, груша, персик) NEW!

    Смесь фруктов
    (f84-f87-f92-f95-f210)
    (киви, дыня, банан, персик, ананас ) NEW!

    Смесь пищевая
    (f1-f2-f4-f5-f8-f75-f76-f77-f78-f79-f81)
    (яичный белок, молоко коровье, пшеница, рожь, кукуруза, яичный желток, α-лактальбумин, β-лактоглобулин, казеин, глютен, сыр Чеддер) NEW!

    Смесь пищевая
    (f13-f14-f16-f17-f26-f45-f48-f83)
    (арахис+соевые бобы+ грецкий орех+фундук+ свинина+дрожжи+лук+ куриное мясо)

    Смесь пищевая
    (f20-f25-f33-f44-f84-f87-f92-f95)
    (миндаль, томат, апельсин, клубника, киви, дыня, банан, персик) NEW!

    Смесь пищевая
    (f10-f12-f36-f84-f85-f93-f105-f221-f300) (кунжут, горох, кокосовый орех, киви, сельдерей, какао, шоколад, кофе, молоко козье) NEW!

    Смесь луговых трав
    (g3-g4-g5-g6-g8)
    ( ежа сборная + овсяница луговая + плевел + тимофеевка + мятлик луговой)

    Смесь луговых трав
    (g2-g3-g5-g6-g8-g10-g12-g13-g14-g15-g16)
    (свинорой пальчатый+ ежа сборная+ плевел+ тимофеевка луговая+ мятлик луговой+ сорго+ рожь посевная+ бухарник шерстистый+ овес посевной+ пшеница посевная+ лисохвост луговой ) NEW!

    Смесь луговых трав
    (g2-g5-g6-g8-g10-g17)
    (свинорой пальчатый, плевел, тимофеевка луговая, мятлик луговой, сорго, гречка заметная)
    NEW!

    Смесь аллергенов домашней пыли
    (h1-d1-d2-i6)
    (домашняя пыль + Dermatophagoides pteronyssinus + Dermatophagoides farinae + таракан-прусак)

    Смесь аллергенов домашней пыли
    (m1-m3-m5-m6-d1-d2-h1)
    (Penicillium notatum+ Aspergillus fumigatus+ Candida albicans+Alternaria alternata (tenuis)+ Dermatophagoides pteronyssinus+Dermatophagoides farinae+домашняя пыль)

    Смесьплесневыхаллергенов
    (m1-m2-m3-m4-m6)
    (Penicillium notatum + Cladosporium herbarum + Aspergillus fumigatus + Mucor racemosus + Alternaria alternata (tenuis)

    Смесь плесневыхаллергенов
    (m1-m2-m3-m5-m6-m8)
    (Penicillium notatum, Cladosporium herbarum, Aspergillus fumigatus, Candida albicans, Alternaria alternata (tenuis), Helmintosporium haloides) NEW!

    Cмесь аллергенов деревьев (раннее цветение) (t2-t3-t4-t15)
    (ольха серая + береза бородавчатая + лещина/орешник + американский ясень)

    Смесь аллергенов деревьев (позднее цветение) (t1-t7-t12-t14)
    (клен ясенелистный + дуб + ива + тополь трехгранный)

    Смесь аллергенов деревьев (раннее цветение) (t2-t4-t8-t12-t14) (ольха серая+ лещина/орешник+вяз+ ива+тополь трехгранный) NEW!

    Смесь сорных трав
    ( w1-w6-w7-w10-w19)
    (амброзия обыкновенная + полынь обыкновенная + нивяник + марь белая + постенница лекарственная)

    Смесь сорных трав
    (w1-w6-w7-w8-w9)
    (амброзия обыкновенная + полынь обыкновенная + нивяник + одуванчик + подорожник)

    Смесь сорных трав
    (w6-w9-w10-w12-w20)
    (полынь обыкновенная, подорожник, марь белая, золотарник, крапива двудомная) NEW!

    Смесь сорных трав
    (w1-w6-w7-w8-w12)
    (амброзия обыкновенная, полынь обыкновенная, нивяник, одуванчик, золотарник) NEW!

    Смесь сорных трав
    (w1-w6-w9-w12-w14) (амброзия обыкновенная, полынь обыкновенная, подорожник ланцетовидный, золотарник, ширица колосистая) NEW!

    Перспективы стандартизации аллергенных экстрактов: современные технологии контроля качества биологических препаратов

    Природные аллергены — сырьевые источники «аллерговакцин»

    Автор
    Редакторы

    Статья на конкурс «био/мол/текст»: Аллергические заболевания распространены среди населения всего мира. Существует целый вагон способов лечения подобных патологий, наиболее эффективным из которых является аллерген-специфическая иммунотерапия (АСИТ). Основным «действующим началом» данного метода лечения являются аллерговакцины или аллергенные экстракты-препараты. Оценка качества данной группы биологических препаратов представляет весьма сложную задачу, решение которой возможно несколькими способами. Каждый из них имеет свои достоинства и недостатки, поэтому интерес представляет каждый из них, начиная от самого начала производства препарата, заканчивая готовым продуктом.

    Конкурс «био/мол/текст»-2013

    Эта статья представлена на конкурс научно-популярных работ «био/мол/текст»-2013 в номинации «Своя работа».

    Спонсор конкурса — дальновидная компания Thermo Fisher Scientific. Спонсор приза зрительских симпатий — фирма Helicon.

    Становление и достижения современной АСИТ

    На сегодняшний день в современной медицине сложилось стойкое убеждение, что наиболее эффективным способом лечения аллергических заболеваний является аллерген-специфическая иммунотерапия (АСИТ) [13]. Это подтверждается рядом неопровержимых фактов. История становления АСИТ заняла несколько десятилетий: ещё в 1819 г. английский врач Джон Босток описал «сенную лихорадку»; в 1869 г. уже Дэвид Блекли, пытаясь определить, что являлось причиной обострений сенной лихорадки, поставил на себе кожные пробы (втирая пыльцу в повреждённые участки кожи); в 1902–1905 гг. врачи из Гамбурга, Прауснитц и Дунбар, страдавшие сенной лихорадкой, так же установили, что симптоматика сенной лихорадки вызвана пыльцой растений. Впервые в качестве терапевтического метода АСИТ предложили Леонард Нун и Джон Фримен в 1911 году при лечении поллиноза (сенной лихорадки = аллергического заболевания, вызванного пыльцой растений): публикация в журнале «Ланцет» сообщала сведения об успешном выздоровлении около 20 больных сенной лихорадкой. При лечении астмы иммунотерапия аллерговакцинами с успехом использовалась Кауфилдом в 1921 г. [17], [19].

    Особо следует отметить, что в 1907 г. наш соотечественник А.М. Безредка в Париже одним из первых в мире начал работу по созданию аллерговакцины на основе пыльцы. Большая заслуга в становлении и развитии метода АСИТ принадлежит аллергологам бывшего СССР и стран постсоветского пространства. Особенно большой вклад внёс в развитие и становление метода АСИТ основатель современной отечественной аллергологии академик А.Д. Адо. Именно под его чутким руководством было организовано производство терапевтических и диагностических аллергенов в СССР, и метод АСИТ нашел широкое распространение в самых дальних аллергологических кабинетах нашей страны [2]. В настоящий момент прослеживается чёткая тенденция к возрастанию частоты встречаемости аллергических заболеваний, структура которых весьма разнообразна (рис. 1) [23], [24].

    Рисунок 1. Распространённость в структуре аллергических заболеваний

    Сегодня АСИТ стала единственным патогенетическим методом лечения, направленным исключительно на составляющие этапов механизма развития аллергических реакций. Данный метод терапии заключается в применении возрастающих доз специальным образом приготовленных водно-солевых аллергенных экстрактов, а также модифицированных или адсорбированных на разных носителях препаратов [4], [8]. Причем подбор аллергена осуществляется с тем расчётом, чтобы именно он вызывал основные симптоматические проявления заболевания у больного с повышенной чувствительностью [18]. Основной задачей терапии является специфическая гипосенсибилизация — постепенное снижение чувствительности пациента вплоть до полной индифферентности к естественной экспозиции этого аллергена (или группы аллергенов) в окружающей среде (рис. 2) [11], [18].

    Рисунок 2. Причины, симптомы и профилактика сенной лихорадки

    При введении в организм пациента аллергена наблюдается повышение резистентности к его действию на иммунологическом уровне, что имеет некоторые общие черты с процедурой вакцинации. Исходя из этого сегодня возможно использование терминов наряду с «аллергенными экстрактами», так же «аллергенные вакцины». С момента первого использования АСИТ накопилось достаточно клинических данных применения этого метода. Сегодня он широко используется в качестве терапии Ig E-опосредованных типовых аллергических процессов [4], [7], [10].

    Аллергенные экстракты: вчера и сегодня

    Достижения в области эффективности и безопасности современной АСИТ были бы невозможны без разработки и внедрения стандартизированных экстрактов аллергенов. Сейчас наблюдаются значительные успехи в их изготовлении. В то же время существует ряд проблем, которые связаны со стандартизацией и контролем качества данных препаратов [4], [6], [9], [29]. С применением водно-солевых аллергенных экстрактов пыльцы растений началось широкое распространение лечебных аллергенов в медицинской практике. Например, в Средней полосе России первостепенная роль в этиологии всех поллинозов, вызванных древесными растениями в весенний период, принадлежит берёзе повислой (Betula pendula Roth) (рис. 3.) [5].

    Рисунок 3. Береза повислая (Betula pendula Roth). а — мужское соцветие; б — микроснимок ее пыльцевого зерна, полученный при помощи растрового электронного микроскопа (увеличение 1820×).

    В настоящий момент выделяют три основные категории аллергенных растений: древесные, сорняки, злаковые и разнотравье. Условно, сезоны заболевания поллинозом можно разделить на три основных пика, связанных с календарём цветения растений в центральной полосе Российской Федерации (рис. 4) [1], [17].

    Рисунок 4. Календарь цветения растений в центральной полосе Российской Федерации

    В дальнейшем лечебные формы аллергенов совершенствовались с учетом их безопасности при сохранении главного критерия — иммуногенности. Были также предприняты попытки модифицировать аллергены путём их полимеризации (глутаровым альдегидом, формальдегидом), получения сорбированных форм (с гидроксидом алюминия, L-тирозином), разработке пролонгированных форм с применением многочисленных как синтетических, так и природных носителей [23], [24].

    Состав и качество аллергенных экстрактов

    Состав аллергенных экстрактов чрезвычайно разнообразен: это белки, пептиды, гликопротеиды, полисахариды, производные липидов и т.д. Объясняется это тем, что для получения аллергенных экстрактов используются различные источники сырья, методы изготовления и способы очистки. Из-за этого препараты разных фирм-производителей также отличаются значительной вариабельностью по составу антигенных компонент и биологической активности. Обеспечить одинаковый состав и иммунологическую активность аллергенов (нативных экстрактов) различных производителей и партий препаратов одного конкретного производителя возможно при соблюдении требований к проведению стандартизации, чтобы данные препараты стали полноценными фармакопейными продуктами [3], [20].

    Определение специфической активности аллергенных экстрактов является основной, а также наиболее сложной составляющей стандартизации. Проблемы связаны с различными способами получения сырьевого материала, методами его химической и физической модификации, использованием разного рода растворителей, нормативами заполнения тары (флаконов и ампул), способами хранения и транспортировки и т.д. [3], [6], [9]. В процессе изготовления аллергенных экстрактов зачастую приходиться сталкиваться с проблемами, которые связаны с невозможностью выделения из ряда препаратов химически чистых аллергенных компонентов, нестабильностью физико-химических свойств сырьевого материала, неполной корреляцией между биологической активностью отдельных аллергенных компонент и их количественным соотношением.

    Так, с финансовой поддержкой Европейского союза был сформирован проект CREATE или «Сертифицированные эталоны (референсы) аллергенов для оценки качества продукции» (Certified References used for Allergen and Test Evalution). Цель проекта — стандартизация аллергенов на уровне фармакопейных препаратов и внесение в соответствующие фармакопейные статьи унифицированных методик и характеристик независимо от конкретной компании-производителя. В основе данного проекта были заложены идеи широкого введения унифицированных стандартизированных методов количественного содержания главных (мажорных) аллергенных компонент с использованием стандартных протоколов [26]. К клинически значимым, мажорным аллергенам относятся те аллергены, которые способны вызывать иммунологический ответ более чем у половины пациентов и связывать более половины IgE-AT у сенсибилизированных к этому аллергену пациентов [3]. Несмотря на всю амбициозность проекта его постиг ряд неудач, связанных прежде всего с трудновыполнимостью поставленных задач. В результате сложной кропотливой работы участников проекта всего лишь две молекулы аллергенных белков — аллерген пыльцы березы (Betv1) и аллерген пыльцы тимофеевки (Phlp5b) (рис. 5) [26] — смогли пройти проверку в лабораториях, чтобы их можно было включить в соответствующие статьи Европейской фармакопеи [28].

    Рисунок 5. Масштабные структуры молекул Betv1 (а) и Phlp5b (б)

    Приготовление аллергенных экстратов-препаратов

    Самым старым методом изготовления аллергенных экстрактов для лечебных и диагностических целей является экстрагирование необходимых аллергенов из природной матрицы (биообъектов). Выделение аллергенов проводят путём экстрагирования сырьевого материала различными растворителями. Перед экстракцией проводят дезинтеграцию природного сырья путём разрушения природной матрицы; далее полученные таким образом экстракты подвергают различного рода очистке. Итак, приготовление экстрактов аллергенов на основе природного сырья состоит из следующих этапов: измельчения, экстракции, очистки, диализа, стерилизации, пробы на токсичность.

    Для обеспечения стандартности продукта предварительно проводят оценку качества самого сырья. Его источником являются организмы-продуценты аллергенов: растения (березовые, злаки), клещи домашней пыли, насекомые, грибы и др. Их культивируют в лабораторных условиях (клещи, микроорганизмы, насекомые) или проводят сбор в естественных условиях обитания (пыльца различных растений). К сырью предъявляется ряд требований: определение видовой принадлежности, регламентирование присутствия посторонних примесей. Так, при проведении визуального и микробиологического анализов возможно присутствие не более 1% любых посторонних примесей в исследуемом образце [27].

    В процессе измельчения предварительно отобранного сырья происходит разрушение клеточных мембран, что приводит к значительному увеличению общей поверхности сырьевого материала. Для проведения измельчения используют специальную аппаратуру (лабораторный миксер, ультразвуковые приборы и др.). Больше всего проблем технологического характера возникает при пробоподготовке таких материалов, как перо, шерсть животных, шелк и т.п.

    Для экстракции используют слабощелочную среду (pH 7,5–8,5), поскольку в процессе экстрагирования зачастую происходит подкисление раствора. Для обеспечения постоянного рН целесообразно использовать буферные растворы: щелочной раствор Кока (Coca A., 1922) применяется для приготовления экстрактов из грибов, домашней пыли, пыльцы и др.; буферный раствор с NaCl чаще всего используется для экстрактов из овощей, орехов, фруктов, эпидермиса животных и т. д. Обезжиренный материал смешивают с наиболее подходящим раствором, затем проводят экстрагирование при комнатной температуре в тест-системе от 17 до 24 часов при постоянном встряхивании. Согласно технике Frugoni экстракцию проводят 12%-раствором этилового спирта (соотношение материала к экстрагенту 1:9) продолжительностью 48–72 часов в холодильной камере.

    Процесс очистки сырьевого материала может включать осаждение, центрифугирование, фильтрацию, либо комплекс этих методов. Получение, по возможности, максимального количества высокоочищенного экстракта аллергена, а так же минимизация потерь при изготовлении являются основными техническими задачами на данном этапе.

    После предварительной очистки следует диализ, в процессе которого происходит удаление низкомолекулярных веществ и пигментов, способных вызвать нежелательные побочные реакции (например, раздражения кожи). Использование данного метода необходимо для экстракции некоторых продуктов питания, домашней пыли. Высокомолекулярные примеси можно исключить благодаря применению каскадного способа фильтрации. Не смотря на все меры предосторожности, в готовом экстракте все равно остается некоторое количество сопутствующих компонентов, которые не проявляют иммунологических свойств, что является одним из недостатков данного метода.

    Поскольку экстракты аллергенов предназначены по большей части для инъекционного введения, следующим этапом изготовления является стерилизация. Фильтрация через бактериальные фильтры — наиболее приемлемый способ стерилизации, позволяющий сохранить структуру термолабильных веществ. После стерилизации экстракт переносят в стерильную посуду. Также необходим дополнительный контроль на стерильность перед использованием: для этого проводят посев и обнаруживают возможный рост аэробных и анаэробных микроорганизмов.

    Испытание на токсичность состоит в определении рН (значение должно быть ≈7.0), обязательном проведении микробиологического и токсикологического контролей. Таким образом, полученный экстракт должен представлять собой высокоочищенный препарат с точным указанием качественного и количественного состава [6], [23].

    Получать аллергенные экстракты кроме как из природных источников возможно с помощью биотехнологического производства (высокочистые экстракты, содержащие одну фракцию активного аллергенного белка). Новые технологии получения клонированных молекул белка уже сейчас позволяют использовать большое количество важных аллергенов (аллергены пыльцы растений, эпидермиса животных, постельного клеща, ядов насекомых и др.), представляющих собой индивидуальные рекомбинантные белки, которые обладают иммунологической активностью, сопоставимой с аналогичными белковыми аллергенами, встречающимися в природе [16]. Такая технология облегчает стандартизацию аллергенных препаратов, позволяя с высокой точностью определять содержание главных (мажорных) аллергенов в произведенных сериях лекарственных препаратов. Однако, в любом случае необходима процедура стандартизации аллергенного получаемого экстракта.

    Стандартизация аллергенных экстрактов

    На данный момент, как уже было отмечено ранее, отсутствуют единые протоколы стандартизации аллергенных экстрактов для всех производителей. Так, в Европе оценкой экстрактов аллергенов на их соответствие всем требованиям, прописанным в Европейской Фармакопее, занимается Европейское агентство по лекарственным средствам (ЕАЛС) — European Medicines Agency (EMEA). В США основной организацией, занимающейся вопросами стандартизации аллергенных экстрактов является Управление по контролю качества продуктов питания и лекарственных средств — Food and Drug Administration (FDA). Суммарная аллергенная активность лекарственного препарата определяется из соотношения проявления кожной реакции на аллерген (прик-тест) к аналогичной кожной реакции, вызываемой гистамином у больных, сенсибилизированых (чувствительных) к данному аллергену [9]. Таким образом, основным методом стандартизации экстрактов аллергенов во всем мире является определение биологической активности препарата посредством способности связывания комплекса АГ—АТ [6].

    Что касается природного сырья (нерекомбинантных молекул), состав и иммунологическая активность аллергенных экстрактов имеют довольно значительные расхождения не только у нескольких производителей, но так же и у одного производителя от одной партии препарата к другой. Возникает потребность в проведении сравнительных анализов иммунологической активности производимых экстрактов. При проведении сравнительного анализа необходимо определить метод, стандарт и единицы измерения иммунологической активности препарата.

    Оценка биологической активности экстрактов аллергенов возможна несколькими методами. Различают in vitro- и in vivo-диагностику. К методам in vitro относят: вестерн-блоттинг, изоэлектрофокусирование, IgE-иммуноблоттинг, перекрёстный радиоиммуноэлектрофорез, иммуноферментный анализ (ИФА, ELISA), перекрёстный радиоиммуноэлектрофорез, ракетный электрофорез по Лореллу, электрофорез в полиакриламидном геле с додецил-сульфатом натрия, радиоаллергосорбентный тест (PACT) и др. К in vivo-методам относят: кожные пробы — капельные, прик-тесты (тесты уколом), аппликационные (эпикутанный) метод, скарификационные, внутрикожные и др. [3], [6], [9], [11], [23].

    Следует отметить, что до сегодняшнего дня специфическая активность и концентрация аллергенов каждым производителем определялась посредством методологических подходов, удобных только для него, то есть с использованием своих внутренних стандартов — In House Reference Standard (IHRS) (рис. 6) [3], [9], [22].

    Рисунок 6. Схема стандартизации с использованием IHRS при производстве препарата

    Поэтому на рынке появилось великое множество препаратов, имеющих различную маркировку своих коммерческих серий лечебных и диагностических аллергенных экстрактов, характеризующих их иммунологическую активность. Среди них:

    • биологическая единица — Biological Unit (BU),
    • биологическая аллергенная единица — Biological Allergenic Unit (BAU),
    • единица аллергенной активности — Allergen Units (AU),
    • единица активности АСИТ — Specific treatment unit (STU),
    • индекс реактивности (ИР) — Index of reactivity (IR-Europe),
    • единица активности радиоаллергосорбентного теста — Activity Units by RAST (AUR-Europe),
    • единица эквивалента гистамина HEP,
    • таблетка (T) или единица (U) — вид экстрактов для терапии сенсибилизированных пациентов — Standartisation Quality (SQ-T или SQ-U) [3].

    Также встречаются единицы, которые стандартизуются по специфической активности связывания IgG, а не IgE — SU. К ним относятся диагностическая биологическая единица — DBU и лечебная терапевтическая стандартизированная единица TSU.

    Данные испытания основываются главным образом на размерах папулы (кожный прик-тест) с концентрацией гистамина 10 мг/мл в качестве эталона-стандарта. Несмотря на это даже в случае применения абсолютно одинаковых методик стандартизации, одна и та же указанная активность, которая будет выражаться в одинаковых единицах на упаковках экстрактов аллергенов, но изготовленных по разным технологическим условиям у разных производителей, в реальности будет вызывать реакцию разной степени выраженности. Данный факт объясняется различной чувствительностью тестируемых больных, а также проведения большинства исследований на недостаточно больших выборках пациентов [7], [10]. Подобное явное непостоянство в оценке активности аллергенов оказывает сильноe влияние на результаты метаанализов, резко снижая их однородность, и как следствие мешает проведению систематических обзоров клинических испытаний по установлению эффективности АСИТ, что в конечном счете мешает разработке новых эффективных и безопасных аллергенных препаратов.

    Каково мнение мирового сообщества?

    Отсутствие унифицированных методик вынуждает каждого производителя аллергенных экстрактов, опять же, применять собственные протоколы стандартизации, зачастую значительно отличающиеся от аналогичных у других фирм-производителей. На данный момент универсальные эквиваленты выражения иммунологической активности отсутствуют, и у каждого производителя есть свои методы и алгоритмы их интерпретации. Но сегодня, для разных фирм-производителей стало принципиально выполнимым определение содержания в лекарственном препарате главных аллергенных белков, которые преимущественно ответственны за гиперчувствительность организма пациента к многокомпонентному составу аллергенного экстракта. Для этого в распоряжение стран мирового сообщества передаются так называемые международные референс-стандарты, созданные Всемирной организацией здравоохранения (ВОЗ), которые содержат определенное количество соответствующих аллергенных компонент. ВОЗ так же была предложена система международных единиц (International Unit, IU): в данных единицах выражается биологическая активность международных стандартов, разработанных организацией.

    В феврале 1981 года на рабочем совещании ВОЗ в Женеве была разработана программа по использованию 15-ти международных стандартов аллергенов, в числе которых были аллергены пыльцы березы и клещей домашней пыли. В 1983–1986 годах благодаря работе Экспертного подкомитета стандартизации аллергенных препаратов при Международном союзе иммунологических обществ (WHO/IUIS) были одобрены следующие международные стандарты аллергенов: тимофеевки (Phleum pratense L.), клещей домашней пыли (Dermatophagoides pteronyssinus, 1897), пыльцы березы (Betula pendula Roth.) и аллергенов собаки (Canis lupus familiaris L.). На этом работа в области стандартизации аллергенных экстрактов не была остановлена: сегодня имеются основные нормативные акты, которые регламентируют национальные и международные стандарты. В европейских странах, несмотря на все достоинства, международные референс-препараты не получили широкого распространения: каждым производителем всё так же используется свой IHRS, и активность данного стандарта по-прежнему выражается в собственных единицах [3], [7], [9].

    Неоспоримо, что однотипная, унифицированная стандартизация аллергенных экстрактов, как и всех фармакопейных продуктов, смогла бы оказать существенную помощь в определении оптимальной дозировки для больных, которые подвержены сенсибилизации на конкретный определённый аллерген. Но пока, к сожалению, разработка одной унифицированной единицы, по которой бы проводилась стандартизация у хотя бы подавляющего большинства компаний — производителей диагностических и лечебных аллергенов — практически нерешаемая задача. В сложившихся условиях ВОЗ настоятельно рекомендует использовать именно те аллергены, стандартизация которых осуществлялась в соответствии с текущими европейскими требованиями. К подобным критериям качественной оценки аллергенов относятся: обособленность антигенов (максимальная изоляция от компонентов, которые перекрещивающихся с родственными антигенными детерминантами), специфичность (особое свойство индуцировать аллергическую реакцию исключительно в организме, предварительно сенсибилизированном конкретным аллергеном), антигенная чистота, безвредность, стандартизация биологических и физико-химических свойств, а также рациональный химический состав [3], [8], [15].

    Требования к аллергенным экстрактам в Российской Федерации

    В настоящий момент в Российской Федерации для комплексной АСИТ применяют ряд водно-солевых экстрактов, представляющих собой смесь из аллергенных и неаллергенных соединений; депонированные, а также подвергнутые модификации лечебные формы аллергенов. Их, как правило, применяют для лечения различного рода аллергических заболеваний (респираторных, анафилактических реакций и др.). Модифицированные и депонированные терапевтические аллергены выгодно отличаются большей иммуногенностью и в то же время меньшей аллергенностью. Благодаря этим свойствам данные группы аллергенов являются более эффективными и вызывают значительно меньше побочных реакций при проведении АСИТ.

    В практической медицине широко применяются депонированные аллергены и аллергоиды. Первая группа аллергенов представляют собой суспензионную форму, их адсорбируют на гидроксиде алюминия (Al(OH)3), фосфате кальция (Ca3(PO4)2), или химически модифицируют с помощью глутарового альдегида (C5H8O2). Вторую группу получают посредством полимеризации молекул аллергена с формальдегидом (CH2O). ГНЦ Институтом иммунологии ФМБА проводятся исследования, в которых при помощи направленной модификации структур белковых молекул создаются новые конъюгированные формы аллергенов на основе полиоксидония (иммуномодулятора) — аллерготропинов. В ходе клинических исследований новой группы препаратов была установлена их высокая эффективность и, что немало важно, безопасность использования для АСИТ. Исходя из этого, можно судить о перспективности дальнейшей разработки данной группы лекарственных средств [3], [14], [24].

    В Российской Федерации достаточно широко применяются лечебные аллергены на основе водно-солевых экстрактов клещей домашней пыли рода Dermatophagoides, пыльцы злаковых и сорных трав, деревьев, а так же их смеси. Лечебные аллергены, которые разрешенны к использованию в РФ, производятся компаниями ФГУП НПО «Микроген» (Ставрополь), «Севафарма» (Чехия), «Биомед» (ФГБУ «НИИВС им. И. И. Мечникова» РАМН) стандартизуются преимущественно при помощи уже устаревших технологических приёмов, а именно посредством единиц азотного белка (protein nitrogen units — PNU). Другие формы лечебных аллергенов в РФ не прошли регистрацию или находятся пока на ранней стадии внедрения, поэтому их использование в широкой медицинской практике на данный момент не может осуществляться в полном объеме.

    Контроль за качественным и количественным составом, чистотой, соответствие стандартам лечебных и диагностических аллергенов в России производится на базе Государственного научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А. Тарасевича. Стандартизация терапевтических и диагностических аллергенных препаратов, которые на сегодняшний момент выпускаются отечественными производителями, по прежнему, к сожалению, проводится по параметру количественного содержания в экстракте аллергена единиц белкового азота — Protein nitrogen units. Определение аллергенной активности готовых препаратов возможно также по результатам кожных тестов на пациентах, которые чувствительны к данному аллергену. К сожалению, количественная оценка в испытаниях in vitro и in vivo не проводится [3].

    Основные протоколы стандартизации аллергенных экстрактов

    Суммарная активность, определяемая по азотистым основаниям (PNU), зачастую не совсем эквивалентна таковой биологической активности аллергенного экстракта ввиду достаточно большой разницы в содержании в самом продукте мажорных и сопутствующих аллергенов. При всём этом, на российском фармацевтическом рынке в последние время стали появляться стандартизированные в ИР препараты, которые зарегистрированы и могут применяться в медицинской практике.

    Подобная система стандартизации применяется французской компанией Stallergènes при изготовлении препаратов

    • Phostal® — «Аллерген пыльцы деревьев» (аллергенный экстракт, представляющий собой смесь пыльцы древесных растений — березы, граба, ольхи, орешника, используемого для подкожной АСИТ),
    • Staloral® — «Аллерген пыльцы березы» (аллергенный экстракт, представляющий собой извлечение из пыльцы березы для сублингвальной АСИТ),
    • Staloral® — «Аллерген клещей» (аллергенный экстракт, представляющий собой смесь нескольких видов клещей домашней пыли Dermatophagoides farinae, Dermatophagoides pteronyssinus в пропорции 1:1 для сублингвальной АСИТ) [22], [31].

    Преимуществами препаратов Phostal® и Staloral® является то, что ВОЗ, а также группой международных экспертов из ARIA рекомендуется использование подобных стандартизированных аллергенов. Препаратами Phostal® и Staloral® подобная стандартизацию пройдена, и поэтому иммунологическая активность данных аллергенных экстрактов может гарантироваться, что, в свою очередь, дает лечащему врачу надлежащую уверенность в отсутствии побочных реакций у пациента и эффективности АСИТ.

    Отечественные препараты, к большому сожалению, не могут порадовать подобной стабильностью, и при покупке аллергенных препаратов с таким же наименованием и той же фирмы-производителя не всегда можно быть уверенным в протекании реакций и исхода терапии в целом. Справочно, аллергенный экстракт с 100 ИР/мл эквивалентен величине кожной реакции в среднем около 7 мм в диаметре на кожной пробе методом уколов (прик-тест) у выборки, составляющей 30 пациентов, которые имеют доказанную реактивность к используемым аллергенам. В каждой партии реактогенность всегда сопоставляется с эталоным препаратом, а именно внутренним референсным продуктом (IHRS). Подобный подход к стандартизации значительно повышает показатели специфичности, эффективности и безопасности терапии, но, к сожалению, в то же время повышает и стоимость курса лечения [3], [9].

    Протоколы стандартизации, включающие определение иммунологической активности, на данный момент становятся одними из главных направлений развития современных технологий, благодаря которым стал возможен переход от подкожного введения самостоятельно приготовленных разведений нативных аллергенных экстрактов к обоснованному научно высокотехнологичному стандартизированному продукту.

    Инновационные методы стандартизации аллергенных экстрактов

    Способ стандартизации аллергенных вакцин по биологической активности остается неинформативным в отношении содержания мажорных аллергенов, а именно благодаря их присутствию обеспечивается эффективность АСИТ у преобладающего числа пациентов. Установлено, что оптимальная концентрация главных аллергенов в большинстве различных аллергенных вакцин лежит в интервале 5–20 мкг в одной инъекции. По этой причине лечащему врачу необходимо точно знать концентрацию мажорных аллергенов в используемом для АСИТ препарате [25]. Поскольку единицы биологической активности трудно сопоставляются среди разных производителей, активность препарата может быть выражена в концентрациях мажорных аллергенов (мкг/мл), определение которой возможно по методу жидкостной хроматографии с хроматомасс-спектрометрическим детектированием (ЖХ—МС) (Liquid chromatography—mass spectrometry, LC—MS) (рис. 7) [30].

    Рисунок 7. Жидкостной хромато-масс-спектрометр Shimadzu LCMS 2020

    В настоящий момент данное направление является приоритетным в области стандартизации аллергенных экстрактов. Таким образом, производство препаратов для проведения АСИТ стало выходить на более высокий, современный, качественный уровень. Однако все же остается ряд текущих проблем, в первую очередь связанных со стандартизацией как процессов получения препарата, так и готового продукта.

    Стандартизация аллергенных экстрактов по методу ЖХ—МС

    Выпускаемые в настоящий момент немногочисленными отечественными производителями лечебные и диагностические аллергены по-прежнему стандартизуются по количественному содержанию в биологическом препарате единиц белкового азота, в то же время их аллергенная активность устанавливается по результатам кожного тестирования (прик-тестов) на сенсибилизированных к этим аллергенам пациентах, но количественная оценка не проводится ни в испытаниях in vitro, ни in vivo. Совершенно ясно, что необходимо как можно раньше привести отечественную технологию получения и стандартизации аллергеных экстрактов в полное соответствие с современным мировым уровнем. Выход из сложившейся ситуации может быть найден посредством применения современных физико-химических методов анализа. Таким на данный момент является вышеупомянутый метод ЖХ—МС [5], [12], [30].

    Масс-спектрометрический (МС) анализ является одним из высокотехнологичных методов, который позволяет определять качественный и количественный состав многокомпонентных белково-пептидных смесей, обладающих различными физико-химическими свойствами. Данный вид анализа заключается в ионизации молекул в исследуемом образце с последующим разделением и регистрацией образующихся ионов. С введением такого метода как ионизация электрораспылением (ИЭР) и метода матрично-активированной лазерной десорбции/ионизации (МАЛДИ) стало возможным анализировать крупные биоорганические молекулы, в том числе молекулы аллергенных белков. Наиболее перспективные исследования связаны именно с анализом белковых молекул.

    Поскольку масс-спектрометрия обладает целым рядом преимуществ, среди которых высокая чувствительность, экспрессность, информативность, возможность работы с многокомпонентными смесями, её использование для анализа белковых молекул стало одним из важнейших этапов в их исследовании. С открытием ряда методик переведения биологических молекул из раствора в газообразное состояние с использованием МАЛДИ и ИЭР неизбежно привело к прорыву во всей биологической масс-спектрометрии. Развитию этих методов способствовали характерные для них уникальные аналитические параметры. Благодаря их внедрению стало возможным проводить измерение молекулярных масс с очень высокой точностью. Большие молекулы белков-аллергенов фрагментируются в масс-спектрометрах за довольно короткие промежутки времени, что исключительно необходимо для их оперативного анализа. Скорость анализа, несравненно более высокие чувствительность и разрешение по массе являются ключевыми факторами, сделавшими масс-спектрометрию лидирующим методом среди всех нынешних аналитических способов анализа, которые используются для исследования и идентификации биомолекул [12].

    В области LC-MS компанией Shimadzu представлен целый набор инновационных систем, каждая из которых максимально учитывает предъявляемые требования для решения конкретных задач в области стандартизации аллергенных экстрактов. Для определения сверхмалых количеств известных компонентов, например молекул аллергенов в таких сложных объектах, как аллергенные экстракты, Shimadzu предлагается новейший тандемный масс-спектрометрический детектор типа «тройной квадруполь». Благодаря поддержке режимов регистрации выбранных ионных переходов достигается высочайшая чувствительность детектирования известных компонентов. Режимы анализа нейтральных потерь, сканирования ионов-предшественников и ионов-продуктов позволяют расшифровывать структуры неизвестных веществ с самой высокой степенью достоверности. Все системы для хромато-масс-спектрометрии внесены или проходят процедуру внесения в Государственный реестр средств измерения РФ, имеют Государственный Метрологический Сертификат РФ. Хромато-масс-спектрометры Shimadzu активно эксплуатируются в ведущих научных и учебных центрах России [5], [21].

    Исследования на кафедре фармацевтической химии Первого Московского государственного медицинского университета имени И.М. Сеченова

    В настоящее время нами на кафедре фармацевтической химии Первого Московского государственного медицинского университета имени И.М. Сеченова проводится ряд исследований относительно стандартизации аллергенных экстрактов методом ЖХ—МС. Например, были определены оптимальные параметры, относительно которых будет проводиться стандартизация аллергенного экстракта пыльцы берёзы (белок Betv1), что невозможно без изучения химического состава, а также разработана и валидирована методика стандартизации данного экстракта по выбранному компоненту с использованием указанного метода.

    Основной сложностью при разработке методики является подбор колонки с наполнителем и состава жидкой фазы, то есть оптимальных условий хроматографирования. После разделения компонентов экстракта в хроматографе происходит их последовательная ионизация и количественное определение интересующего мажорного белка.

    Данная методика количественного определения белка Betv1 (характеристическое отношение при ионизации m/z = 876,1) может быть с успехом использоваться для стандартизации экстрактов пыльцы берёзы, применяемых при проведении АСИТ [5].

    Таким образом, можно сделать вывод о том, что в области стандартизации аллергенных экстрактов прослеживается ряд положительных изменений, благодаря которым станет возможным производство качественных лечебных и диагностических аллергенов в Российской Федерации.

    Лучшая статья за этот месяц:  Как принимать таблетки от аллергии
    Добавить комментарий